羊脂油炙朝鮮淫羊藿的炮制工藝及特征圖譜研究

中圖分類號 R283；R917 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2025）05-0546-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.05.07

摘要 目的 優化羊脂油炙朝鮮淫羊藿的炮制工藝，并分析朝鮮淫羊藿炮制前后的特征圖譜。方法 以外觀性狀（顏色+氣味）、醇溶性浸出物含量、淫羊藿苷和寶藿苷Ⅰ總含量的綜合評分為評價指標，以炒制功率、炒制時間、入藥溫度為考察因素，采用正交實驗優化羊脂油炙朝鮮淫羊藿的最佳炮制工藝，并進行驗證。以最佳炮制工藝制備羊脂油炙朝鮮淫羊藿，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012 版）》建立15 批朝鮮淫羊藿炮制前后的特征圖譜，并進行相似度分析；采用聚類分析、主成分分析和正交偏最小二乘-判別分析評價朝鮮淫羊藿炮制前后的差異。結果 羊脂油炙朝鮮淫羊藿的最佳炮制工藝為：將4 g 羊脂油以600 W功率加熱熔化，待鍋底溫度達到140 ℃時加入朝鮮淫羊藿絲20 g，炒制6 min，取出，放涼。3 次驗證實驗的綜合評分均值為98.94 分，RSD小于3%。朝鮮淫羊藿、羊脂油炙朝鮮淫羊藿的特征圖譜分別標定了16、15 個共有峰，確定峰2 為綠原酸、峰5 為朝藿定A、峰6 為朝藿定B、峰7 為朝藿定C、峰8 為淫羊藿苷、峰14 為寶藿苷Ⅰ，相似度均大于0.9。聚類分析和主成分分析結果顯示，朝鮮淫羊藿、羊脂油炙朝鮮淫羊藿各自聚為一類；正交偏最小二乘-判別分析結果顯示，峰13、峰15、峰9、峰1、峰8、峰12、峰7、峰10 的變量重要性投影值均大于1。結論 本研究成功優化了羊脂油炙朝鮮淫羊藿的炮制工藝參數。朝鮮淫羊藿炮制前后的特征圖譜具有明顯差異，其中峰13、峰15、峰9、峰1、峰8、峰12、峰7、峰10 所對應的化學成分可能是朝鮮淫羊藿炮制前后的差異成分。

關鍵詞 朝鮮淫羊藿；羊脂油炙朝鮮淫羊藿；炮制工藝；特征圖譜；聚類分析；主成分分析；正交偏最小二乘-判別分析；變量重要性投影

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornuMaxim.、箭葉淫羊藿E. sagittatum（Sieb. et Zucc.）Maxim.、柔毛淫羊藿E. pubescens Maxim. 或朝鮮淫羊藿E. koreanum Nakai 的干燥葉[1]。其中，朝鮮淫羊藿集中分布于我國東北長白山地區，是吉林省首批道地藥材之一，其淫羊藿苷類成分含量較高，是北方藥用淫羊藿的主要來源[2]。淫羊藿性溫，味辛、甘，歸肝、腎經，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的功效[1]。現代研究表明，淫羊藿含有黃酮、多糖、木脂素、生物堿、萜類等多種化學成分[3―5]，具有提高免疫功能、抗骨質疏松、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗抑郁等多種藥理作用[6―7]。

羊脂油炙法是炙淫羊藿最為常見的一種炮制方法，從南北朝時期一直沿用至今[8]。羊脂油性溫，能增強淫羊藿補腎壯陽的作用[9]。2020 年版《中國藥典》記載“每100 kg 淫羊藿，用羊脂油（煉油）20 kg”，但無炒制功率、炒制時間和入藥溫度（即入藥前鍋底溫度）等炮制工藝參數，導致炙淫羊藿存在質量參差不齊、不合格率較高的問題[10]。基于此，本研究以朝鮮淫羊藿為研究對象，采用正交實驗優化羊脂油炙朝鮮淫羊藿的炮制工藝參數，并比較朝鮮淫羊藿炮制前后特征圖譜的差異，以期為朝鮮淫羊藿的炮制工藝和質量標準研究提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

1260 型高效液相色譜儀購自美國Agilent 公司；MS-105D型十萬分之一電子分析天平購自瑞士MettlerToledo 公司；QE-100 型高速萬能粉碎機購自浙江屹立工貿有限公司；H1650-W型臺式高速微量冷凍型離心機購自湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司；DHG 9070A型電熱恒溫鼓風干燥箱購自上海精宏實驗設備有限公司。

1.2 主要藥品與試劑

淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ對照品（批號分別為110737-202017、111852-202104，純度分別為98.1%、99.2%）均購自中國食品藥品檢定研究院；朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C 對照品（批號分別為J12HB184811、J12HB184812、N18GB166250，純度均為98%）均購于上海源葉生物科技有限公司；甲醇、乙腈為色譜醇，水為超純水。

15 批朝鮮淫羊藿藥材收集于吉林省通化市通化縣（編號S1～S5）、遼寧省撫順市新賓縣（編號S6～S10）、遼寧省丹東市鳳城市（編號S11～S15）3 個不同產區（實驗前按2020 年版《中國藥典》淫羊藿“炮制”項下方法制備朝鮮淫羊藿絲[1]）。羊脂油購自吉林敖東藥業集團股份有限公司。上述兩類藥材經南京中醫藥大學藥學院陳建偉教授鑒定為小檗科植物朝鮮淫羊藿E. koreanumNakai的干燥葉和牛科動物綿羊Ovis aries L.的脂肪油。

2 方法與結果

2.1 淫羊藿苷和寶藿苷Ⅰ含量測定方法的建立

2.1.1 色譜條件

色譜柱為Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～30 min，24%A→26%A；30～31 min，26%A→45%A；31～45 min，45%A→47%A）；流速為1 mL/min；柱溫為30 ℃；檢測波長為270 nm；進樣量為10 μL。

2.1.2 混合對照品溶液的制備

分別精密稱取淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ對照品適量，置于不同10 mL容量瓶中，以甲醇定容，搖勻，制成淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ質量濃度均為500 μg/mL 的單一對照品儲備液。精密吸取上述儲備液各適量，置于同一容量瓶中，以甲醇稀釋，制成淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ質量濃度分別為40.000 0、10.080 0 μg/mL的混合對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備

取羊脂油炙朝鮮淫羊藿適量，打粉，過三號篩；精密稱取該粉末0.2 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，稱定質量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）1 h；放冷，再次稱定質量，用稀乙醇補足減失的質量，搖勻；濾過，取續濾液，以12 000 r/min 離心10min，取上清液過0.22 μm微孔濾膜，即得。

2.1.4 含量測定

參考2020 年版《中國藥典》淫羊藿“含量測定”項下方法，精密吸取“2.1.2”和“2.1.3”項下混合對照品溶液和供試品溶液各10 μL，按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定。

2.2 羊脂油炙朝鮮淫羊藿綜合評分的計算

2.2.1 外觀性狀評分

參照2020 年版《中國藥典》“炙淫羊藿”項下的性狀描述“本品形如淫羊藿絲，表面淺黃色顯油亮光澤，微有羊脂油氣”，本研究選擇顏色和氣味為指標進行外觀性狀評分，具體評分如表1所示。

2.2.2 醇溶性浸出物測定

參照2020 年版《中國藥典》（四部）浸出物測定法（通則2201）中醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定[11]，用稀乙醇作溶劑。

2.2.3 綜合評分的計算

為全面反映羊脂油炙朝鮮淫羊藿的質量，本研究以外觀性狀（顏色+氣味）、醇溶性浸出物含量及淫羊藿苷和寶藿苷Ⅰ總含量的綜合評分作為評價指標，并根據各指標的重要程度賦予權重。朝鮮淫羊藿經炮制后，其淫羊藿苷和寶藿苷Ⅰ的含量增高，且這兩種成分具有溫腎助陽的藥理作用[4]，故設淫羊藿苷和寶藿苷Ⅰ總含量的權重系數為50%；考慮到中藥化學成分的復雜性，醇溶性浸出物含量可綜合反映羊脂油炙朝鮮淫羊藿的內在成分含量，故設醇溶性浸出物含量的權重系數為20%；飲片的外觀性狀是評價炮制飲片質量優劣的傳統評價指標，故設外觀性狀權重系數為30%。具體計算方法如下：綜合評分Y＝100× [（Y1/Y1max）×30%+（Y2/Y2max）×20%+（Y3/Y3max）×50%]，其中，Y1～Y3分別為某批次羊脂油炙朝鮮淫羊藿的外觀性狀評分、醇溶性浸出物含量、淫羊藿苷和寶藿苷Ⅰ總含量，Y1max～Y3max分別為上述指標的最大值。

2.3 羊脂油炙朝鮮淫羊藿的正交實驗優化

2.3.1 正交實驗設計

根據前期單因素實驗結果，采用L（9 34）正交表，以炒制功率（A）、炒制時間（B）、入藥溫度（C）3 個因素為自變量，以綜合評分為評價指標進行正交實驗設計，因素水平表見表2。

2.3.2 正交實驗結果分析

取9 份朝鮮淫羊藿，每份20 g，按照規定的炒制功率、炒制時間、入藥溫度進行炒制，取出，放涼，即得到1～9 號羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品。以綜合評分為評價指標，優化羊脂油炙朝鮮淫羊藿的炮制工藝。正交實驗設計及分析結果見表3，方差結果見表4。

從表3 和表4 可以看出，各因素對綜合評分的影響大小依次為A＞C＞B，即炒制功率＞入藥溫度＞炒制時間。因此，確定羊脂油炙朝鮮淫羊藿的最佳炮制工藝為A2B1C3，即取4 g 羊脂油以600 W功率加熱熔化，待鍋底溫度達到140 ℃時加入朝鮮淫羊藿絲20 g，炒制6 min，取出，放涼。

2.3.3 驗證實驗

取同一批朝鮮淫羊藿飲片3 份，每份20 g，按“2.3.2”項下最佳炮制工藝制備樣品，并計算綜合評分。結果顯示，3 批樣品的綜合評分均值為98.94 分，RSD小于3%，表明該工藝穩定、重復性良好。

2.4 朝鮮淫羊藿炮制前后的特征圖譜分析

2.4.1 色譜條件

采用Kromasil C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～5 min，15%A；5～10 min，15%A→20%A；10～20min，20%A→28%A；20～35 min，28%A→32%A；35～45min，32%A→45%A；45～55 min，45%A→60%A；55～60min，60%A→15%A）；流速為1.0 mL/min；柱溫為25 ℃；檢測波長為270 nm；進樣量為10 μL。

2.4.2 混合對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、寶藿苷Ⅰ對照品各適量，置于同一10 mL容量瓶中，用甲醇溶解，制成上述成分質量濃度分別為75.982 2、8.017 5、19.999 5、16.202 4、10.000 0 μg/mL 的混合對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備

分別取朝鮮淫羊藿、羊脂油炙朝鮮淫羊藿（將15 批朝鮮淫羊藿飲片按最佳炮制工藝炮制而得，編號Z1～Z15）粉末0.2 g（過三號篩），精密稱定，置于具塞錐形瓶中；精密加入稀乙醇20 mL，稱定質量，超聲處理（功率400 W，頻率50 kHz）20 min；放冷，再次稱定質量，用稀乙醇補足減失的質量，搖勻；以12 000 r/min 離心10min，取上清液過0.22 μm微孔濾膜，即得鮮淫羊藿供試品溶液和羊脂油炙朝鮮淫羊藿供試品溶液。

2.4.4 精密度試驗

取羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品（Z1）適量，按照“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件連續進樣分析6 次，以8 號峰（淫羊藿苷）為參照峰S，計算得各特征峰相對保留時間的RSD均≤0.45%，相對峰面積的RSD均≤2.86%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.4.5 重復性試驗

取羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品（Z1）適量，共6 份，分別按照“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進樣分析，以8 號峰（淫羊藿苷）為參照峰S，計算得各特征峰相對保留時間的RSD均≤0.32%，相對峰面積的RSD均≤0.29%（n＝6），表明該方法重復性良好。

2.4.6 穩定性試驗

取羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品（Z1）適量，按照“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，于室溫放置0、2、4、8、12、24h 時按“2.4.1”項下色譜條件進樣分析，以8 號峰（淫羊藿苷）為參照峰S，計算得各特征峰相對保留時間的RSD均≤0.47%，相對峰面積的RSD均≤2.92%（n＝6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內穩定性良好。

2.4.7 特征圖譜的建立

將15 批朝鮮淫羊藿和羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品，分別按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進樣檢測，記錄色譜圖。將15 批朝鮮淫羊藿和羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品的色譜圖檢測數據積分處理后，以AIA數據格式導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012 版）》進行處理，分別以S1、Z1 為參照圖譜，經多點校正后采用Mark 峰匹配，時間窗寬度設為0.1 min，以平均數法生成對照指紋圖譜R與朝鮮淫羊藿、羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品的特征圖譜（圖1）。由圖1 可知，15 批朝鮮淫羊藿樣品共有16 個共有峰，15 批羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品共有15 個共有峰；進一步與混合對照品溶液的色譜圖（圖2）比對，確定峰2 為綠原酸、峰5 為朝藿定A、峰6 為朝藿定B、峰7 為朝藿定C、峰8 為淫羊藿苷、峰14 為寶藿苷Ⅰ。與相應對照特征圖譜R相比，15 批朝鮮淫羊藿和羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品的特征圖譜相似度均大于0.9，說明同一飲片不同批次間的整體質量較為穩定。

2.4.8 聚類分析

以15 批朝鮮淫羊藿、羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品的共有峰峰面積為變量，運用SPSS 26.0 軟件進行聚類分析，結果見圖3。結果顯示，當歐氏距離為20 時，朝鮮淫羊藿和羊脂油炙朝鮮淫羊藿各自聚為一類，提示朝鮮淫羊藿生品與炙品的化學成分一致性良好，也進一步驗證了羊脂油炙朝鮮淫羊藿炮制工藝的穩定性。

2.4.9 主成分分析

將15 批朝鮮淫羊藿、羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品的共有峰峰面積導入SIMCA 14.1 軟件進行主成分分析，結果見圖4。結果顯示，前3 個主成分的累計方差貢獻率為86.21%，可反映朝鮮淫羊藿和羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品特征圖譜的大部分信息。進一步分析發現，15 批朝鮮淫羊藿樣品和15 批羊脂油炙朝鮮淫羊藿樣品各自聚為一類，與聚類分析結果一致。

2.4.10 正交偏最小二乘-判別分析

依據“2.4.9”主成分分析結果，建立監督模式的正交偏最小二乘-判別分析（orthogonal partial least squaresdiscriminant analysis，OPLS-DA）模型，結果見圖5。結果顯示，該模型的解釋能力參數R2Y 為0.961，預測能力參數Q2為0.944，表明建立的數學模型穩定性好且預測能力較強。根據變量重要性投影（variable importanceprojection，VIP）值＞1 的原則篩選差異成分[12]，發現峰13、峰15、峰9、峰1、峰8、峰12、峰7、峰10 是區分朝鮮淫羊藿生品、炙品的主要貢獻峰，其對應的化學成分可以考慮作為朝鮮淫羊藿炮制工藝的質量控制指標成分。

3 討論

朝鮮淫羊藿為補腎壯陽常用藥，因具有獨特的化學成分和顯著的生物活性一直是國內外研究的熱點[13]，但在2020 年版《中國藥典》中，羊脂油炙朝鮮淫羊藿的具體炮制工藝參數尚不明確。研究發現，炮制過程中淫羊藿所含的多糖苷黃酮類成分（朝藿定A、朝藿定B等）向低糖苷黃酮類成分（淫羊藿苷、寶藿苷Ⅰ等）轉化，更利于人體吸收以增強溫腎助陽作用[14―15]。由于中藥化學成分較多，僅憑幾種化學成分難以評判中藥的整體質量，而浸出物是一種能夠反映中藥整體質量及中藥成分復雜多樣性的重要質量控制指標。另外，中藥材在炮制過程中的形態、色澤、氣味等可能發生變化。因此，本研究以外觀性狀（顏色+氣味）、醇溶性浸出物含量及淫羊藿苷和寶藿苷Ⅰ總含量的綜合評分作為評價指標，以炒制功率、炒制時間、入藥溫度為考察因素，結合正交實驗優化羊脂油炙朝鮮淫羊藿的最佳炮制工藝。結果顯示，羊脂油炙朝鮮淫羊藿的最佳炮制工藝為：取4 g 羊脂油以600 W功率加熱熔化，待鍋底溫度達到140 ℃時加入朝鮮淫羊藿絲20 g，炒制6 min，取出，放涼。

中藥化學成分復雜、作用靶點多，本研究建立了朝鮮淫羊藿和羊脂油炙朝鮮淫羊藿的特征圖譜，以期評價朝鮮淫羊藿炮制前后的差異。結果顯示，在朝鮮淫羊藿的特征圖譜中共指認了16 個共有峰，在羊脂油炙朝鮮淫羊藿的特征圖譜中共指認了15 個共有峰，相似度均大于0.9，說明樣品整體質量穩定。由于相似度無法有效區分朝鮮淫羊藿與羊脂油炙朝鮮淫羊藿，因此本研究進一步采用聚類分析、主成分分析等化學計量學方法分析兩者的差異。結果顯示，朝鮮淫羊藿與羊脂油炙朝鮮淫羊藿可明顯聚為兩類，說明朝鮮淫羊藿的化學成分在炮制過程中產生了變化；根據VIP 值分析發現，峰13、峰15、峰9、峰1、峰8、峰12、峰7、峰10 的VIP 值均大于1，說明其對應的化學成分可以作為朝鮮淫羊藿炮制工藝的質量控制指標成分。

綜上所述，本研究成功優化了羊脂油炙朝鮮淫羊藿的炮制工藝參數，并發現朝鮮淫羊藿炮制前后的特征圖譜具有明顯差異，其中峰13、峰15、峰9、峰1、峰8、峰12、峰7、峰10 所對應的化學成分可能是朝鮮淫羊藿炮制前后的差異成分。

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（收稿日期：2024-10-04 修回日期：2025-01-17）

（編輯：唐曉蓮）

基金項目國家中醫藥管理局中藥炮制技術傳承創新項目（No.GZY-KJS-2022-053）；江蘇省中醫藥科技發展計劃項目（No.ZD202316）；江蘇省知識產權戰略推進計劃項目（No.GJ20231160_01）