酶抑制速測(cè)法檢測(cè)豇豆中農(nóng)藥殘留分析

酶抑制速測(cè)法檢測(cè)豇豆中農(nóng)藥殘留具有方便、快捷、操作簡(jiǎn)單、技術(shù)難度低等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于豇豆種植區(qū)、大型農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)等快速檢測(cè)活動(dòng)中，在檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留方面具有較高的準(zhǔn)確性。2023年8月，漯河市使用酶抑制速測(cè)法對(duì)集中上市的豇豆進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)。

一、酶抑制法原理及應(yīng)用

酶抑制速測(cè)法原理為氨基甲酸酯類和有機(jī)磷類農(nóng)藥會(huì)抑制乙酰膽堿酯酶活性，根據(jù)酶反應(yīng)試驗(yàn)中顏色等信號(hào)的變化，判斷農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)。此種速測(cè)方法便捷可靠，應(yīng)用廣泛。目前，主要有分光光度法、速測(cè)卡法、生物傳感器法等三種應(yīng)用方法。

分光光度法（農(nóng)藥濃度與色劑顏色變化相關(guān)，通過(guò)分光光度計(jì)檢測(cè)農(nóng)藥殘留情況）在準(zhǔn)確率和便捷性方面變現(xiàn)較好，根據(jù)漯河市各大生產(chǎn)基地近年使用情況，本次豇豆農(nóng)藥殘留分析采用分光光度法。

二、檢測(cè)過(guò)程

（一）依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)及儀器設(shè)備

豇豆中農(nóng)藥殘留分析采用分光光度法的抽樣標(biāo)準(zhǔn)參照《農(nóng)藥殘留分析樣本的采樣方法》（NY/T 789—2004）和《新鮮水果和蔬菜" 取樣方法》（GB/T 8855—2008）。速測(cè)標(biāo)準(zhǔn)參照《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》（GB/T 5009.199-2003）。檢測(cè)使用儀器為斯坦道STD-9000便攜式食品安全檢測(cè)儀、電子天平JJ500。

氣相色譜法標(biāo)準(zhǔn)為《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761—2008），使用儀器為安捷倫7890B。

豇豆中農(nóng)藥殘留判定標(biāo)準(zhǔn)為《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763）。

（二）樣品采集

在漯河市的大型商超和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)等14個(gè)取樣點(diǎn)抽取豇豆樣品41批次，每批次約3 kg。豇豆樣品新鮮無(wú)腐爛，并按標(biāo)準(zhǔn)要求包裝、運(yùn)輸和貯存。樣品均勻混合后，按四分法縮分，粉碎后樣品于-20℃貯存以備復(fù)測(cè)。

（三）酶抑制法檢測(cè)過(guò)程

1. 試劑配置。一是緩沖液，將緩沖試劑溶于純凈水中，常溫保存?zhèn)溆谩６堑孜铮苡诩儍羲小Ｈ悄憠A酯酶，溶于緩沖液中。四是顯色劑，溶于緩沖液中。底物、膽堿酯酶、顯色劑等均在2℃冷藏，保存?zhèn)溆谩?/p>

2. 樣品制備。稱取樣品2 g，剪小塊于小燒杯中，加入10 mL緩沖液，輕微震蕩2 min，濾紙過(guò)濾后待測(cè)。

3. 測(cè)試。取2.5 mL緩沖液做空白對(duì)照（CK），取2.5 mL待測(cè)樣本液于試管中；所有試管內(nèi)分別依次加入酶100μL、顯色劑100 μL，搖勻，37℃培養(yǎng)10 min；培養(yǎng)后加入底物100 μL，搖勻后立即倒入比色皿中，分別放入指定通道，進(jìn)行檢測(cè)。

（四）氣相色譜法檢測(cè)過(guò)程

1. 樣品處理。按照標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761—2008處理樣品。稱取樣品量（m）25.0 g，提取溶液有機(jī)相的體積（V1）50.0 mL，提取溶液有機(jī)相的取用體積（V2）10.0 mL，80℃水浴氮吹至近干，2 mL正已烷定容樣品，采用florisil固相萃取柱進(jìn)行凈化，接收淋洗液，50℃水浴氮吹至近干，正已烷定容（V3）5.00 mL。

2. 氣相色譜儀條件。色譜柱（P）為DB-1701，

30 m × 0.53 mm × 1.0μm，初溫為150℃，保持3 min，再以8℃·min-1的速度升到250℃，保持12 min。進(jìn)樣口的溫度為220℃。檢測(cè)器的溫度為250℃。柱流速為10 mL·min-1；色譜柱（Cl）為HP-5，30 m × 0.32 mm × 0.25μm，初溫為150℃，保持2 min，以10℃·min-1的速度升到270℃，保持5 min；再以5℃·min-1的速度升到300℃，保持5 min。進(jìn)樣口的溫度為260℃，檢測(cè)器的溫度為300℃。柱流速為1.0 mL·min-1。

計(jì)算公式：ω=

（式中ω表示樣品中農(nóng)藥殘留量，A表示樣品中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積，As表示農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積，P為農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度）

（五）檢測(cè)結(jié)果

豇豆樣品中經(jīng)酶抑制法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有2個(gè)批次樣品超標(biāo)，3個(gè)批次未超標(biāo)但抑制率較高。以上5個(gè)批次經(jīng)過(guò)氣相色譜儀檢測(cè)，均未發(fā)現(xiàn)超標(biāo)，檢出項(xiàng)為常規(guī)農(nóng)藥。其中聯(lián)苯菊酯檢出3項(xiàng)次，氯氟氰菊酯（＜0.2 mg·kg-1）檢出2項(xiàng)次。其他批次均未檢出，檢出率為12.2%，合格率為100%，酶抑制法準(zhǔn)確率為95.1%。

本次實(shí)驗(yàn)因氣相色譜儀檢測(cè)參數(shù)有限，故以上結(jié)果不能確保本次實(shí)驗(yàn)酶抑制法的準(zhǔn)確率，但酶抑制法檢測(cè)豇豆農(nóng)藥殘留結(jié)果比較準(zhǔn)確、可靠。

三、檢測(cè)不夠準(zhǔn)確的原因分析及注意事項(xiàng)

（一）原因分析

1. 參與反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。乙酰膽堿酯酶活性受溫度影響較大，在實(shí)驗(yàn)中，底物搖勻后未立即進(jìn)行比色，參與反應(yīng)過(guò)長(zhǎng)，可能出現(xiàn)抑制率偏大或假陽(yáng)性。

2. 人員操作不當(dāng)。實(shí)驗(yàn)中有4種試劑，在取用時(shí)，若吸頭混用，或?qū)⑽鲈噭┰俅畏呕卦噭┢恐校瑒t會(huì)造成交叉污染，影響檢測(cè)結(jié)果。

（二）注意事項(xiàng)

1. 試劑液即配即用。酶對(duì)溫度、酸堿度較敏感，儲(chǔ)存條件較為苛刻，保存后其有效性不明，準(zhǔn)確度低，故即配即用最佳，不宜久存后使用。且在實(shí)驗(yàn)中，關(guān)注對(duì)照組結(jié)果，及時(shí)更換新試劑。

2. 控制反應(yīng)時(shí)間。加入底物搖勻后需快速進(jìn)行比色，若反應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)則抑制率偏大。確保準(zhǔn)確放入通道，以免樣品結(jié)果混淆。

3. 正確放置比色皿。比色皿沖洗干凈后，確保其透明側(cè)無(wú)水滴，與光路方向?qū)?zhǔn)。

4. 不可沖洗樣品。一方面，沖洗會(huì)稀釋農(nóng)藥殘留量；另一方面，自來(lái)水會(huì)影響pH，繼而影響酶活性，造成結(jié)果不準(zhǔn)確。

四、結(jié)語(yǔ)

綜上所述，用酶抑制速測(cè)法可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)豇豆農(nóng)藥殘留情況，且不受時(shí)間、地點(diǎn)、場(chǎng)合的限制，在便捷性和經(jīng)濟(jì)性上優(yōu)勢(shì)明顯，可應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品集中交易市場(chǎng)農(nóng)藥殘留檢測(cè)。將其與高效液相色譜法、氣相色譜法或質(zhì)譜聯(lián)用法相結(jié)合，既可定量又可定性，從而大幅提高檢測(cè)效率。

作者簡(jiǎn)介：趙芍芍（1990— ），女，河南舞陽(yáng)人，本科，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)、監(jiān)督抽檢等工作。

（責(zé)任編輯" "程麗紅）