CD19-CAR慢病毒生產方法的比較分析與優化

［摘 要］ 為優化CD19-CAR慢病毒的生產方法，以獲得更優的生產條件，采用慢病毒三質粒包裝系統（pLVX，psPAX2，pMD2.G），并利用轉染試劑（lipo8000TM，Lipofectamine 3000，PEIpro）進行慢病毒的包裝，通過超速離心和超濾技術對慢病毒進行濃縮。并利用流式細胞儀測定慢病毒滴度。研究發現，使用Lipofectamine 3000轉染試劑包裝的慢病毒原液滴度最高；在pLVX、psPAX2與pMD2.G質量比為4∶3∶1，質粒總量為5 μg，質?？偭浚╩/μg）與轉染試劑體積比（V/μL）為1∶5時，慢病毒的滴度達到最高。此外，使用超濾方法濃縮的慢病毒滴度高于超速離心法。盡管使用Lipofectamine 3000包裝慢病毒原液滴度最高，但考慮到擴大生產的成本，選擇性價比更高的PEIpro更為適宜。因此，本研究得出的最佳慢病毒生產方法是：使用轉染試劑PEIpro包裝慢病毒，在pLVX、psPAX2與pMD2質量比為4∶3∶1，質?？偭繛? μg，質?？偭浚╩/μg）與轉染試劑體積比（V/μL）為1∶5，收集48 h和72 h的病毒上清液，并通過超濾方法對慢病毒進行濃縮。

［關鍵詞］ 慢病毒； 病毒包裝； 病毒濃縮； 滴度

［中圖分類號］ R153 ［文獻標識碼］ A

嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）是一種通過基因工程技術改造的T細胞，使其能夠表達嵌合抗原受體，從而靶向并殺傷具有特定抗原的腫瘤細胞[1]。CAR-T細胞因其在臨床中顯示出的有效和持久反應而備受關注，[2]。特別是針對B淋巴細胞CD19抗原的CAR-T細胞，在臨床試驗中已證明對多種血液瘤具有顯著療效，這些血液瘤包括急性淋巴細胞白血?。ˋLL）和慢性淋巴細胞白血?。–LL）[3]。值得注意的是，諾華公司的Kymriah和凱特制藥公司的Yescarta這兩種靶向CD19的CAR-T細胞產品，已被美國 FDA 批準用于治療 B 細胞急性淋巴細胞白血?。˙-ALL）和彌漫性大B細胞淋巴瘤 （DLBCL）[4]。……