大花海棠炭疽病病原菌鑒定、生物學特性測定及防治藥劑室內毒力測定

摘要：【目的】明確大花海棠炭疽病的病原菌種類及其生物學特性，篩選出適用于防治該病害的殺菌劑，為大花海棠炭疽病的發生、發展規律以及防治措施研究打下基礎。【方法】采用組織分離法對采集自云南省昆明市世界園藝博覽園園區內具有典型炭疽病癥狀的大花海棠病株進行病原菌分離，根據柯赫氏法則驗證分離菌株的致病性；采用形態學特征觀察結合ITS、TUB2、HIS3、CHS-1、GAPDH和ACT多基因聯合分析的方法，確定大花海棠炭疽病病原菌的分類學地位；以菌絲致死溫度及不同培養基、碳源、氮源、溫度、光周期、pH條件下菌絲生長情況探究病原菌的生物學特性；采用菌絲生長速率法測定8種殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用。【結果】從大花海棠發病植株上分離純化得到13株菌株，根據菌落形態及顯微形態將13株菌株歸為同一種菌，選取代表性菌株SWBG5進行后續試驗。形態學特征觀察結合多基因系統發育進化樹分析確定大花海棠炭疽病病原菌菌株SWBG5為奧特阿羅刺盤孢菌（Colletotrichum aotearoa）。生物學特性測定結果顯示，PDA培養基有利于菌株SWBG5的菌絲生長，在以蛋白胨為氮源、可溶性淀粉為碳源、溫度25℃時菌絲生長最快；24 h光照或24 h黑暗環境下菌株SWBG5菌絲均能較好地生長，最適pH為6，致死溫度為54℃。殺菌劑室內毒力測定結果顯示，供試的8種殺菌劑對菌株SWBG5的菌絲生長均有抑制作用，其中30%吡唑醚菌酯SC的抑制作用最好，抑制中濃度（EC50）為1.6959μg/mL。【結論】云南省昆明市世界園藝博覽園園區內的大花海棠炭疽病病原菌為奧特阿羅刺盤孢菌，后續防治中可首選30%吡唑醚菌酯SC。

關鍵詞：大花海棠；炭疽病；病原菌；分離鑒定；生物學特性；毒力測定

中圖分類號：S436.81文獻標志碼：A文章編號：2095-1191（2025）02-0508-12

Identification of the pathogen causing Begonia×benariensis an?thracnose，detection of the biological characteristics andindoor toxicity determination of control fungicides

LIU Mian1，2，XIAO Yu-hui1，GOU Chao-jin1，GU Xu3，LU Jun-jia1*

（1Landscape Architecture and Horticulture Sciences College，Southwest Forestry University，Kunming，Yunnan650224，China；2Key Laboratory of Forest Disaster Warning and Control in Yunnan，Kunming，Yunnan650233，China；3Yunnan Academy of Biodiversity，Kunming，Yunnan 650233，China）

Abstract：【Objective】To clarify the pathogenic species of Begonia×benariensis anthracnose and its biological chara-cteristics，to screen out the fungicides suitable for the control of this disease，which could lay the foundation for the re-search on the occurrence and development regulation of Begonia×benariensis anthracnose as well as the control measures.【Method】Pathogenic fungi were isolated from Begonia×benariensis plants showing typical anthracnose symptoms col-lected from the Kunming World Horticultural Expo Garden in Yunnan using the tissue isolation method.The pathogenicity of the isolated strains was confirmed according to Koch’s law.The taxonomic identity of the anthracnose pathogen was de-termined by combining morphological observations"with a multigene analysis of ITS，TUB2，HIS3，CHS-1，GAPDHand ACT.The biological characteristics of the pathogen were investigated by examining mycelial lethal temperature and myce-lial growth under different conditions，including various culture media，carbon sources，nitrogen sources，temperatures，illumination periods and pH levels.The inhibitory effects of 8 fungicides on the growth of the pathogen colony were as-sessed using mycelial growth rate method.【Result】Thirteen strains were isolated and purified from the pathogenic plants of Begonia×benariensis，and the thirteen strains were categorized as the same species according to colony morphology and microscopic morphology，and the representative strain SWBG5 was selected for the subsequent experiments.Accor-ding to morphological observations combined with multigene phylogenetic tree，the anthracnose pathogen SWBG5 was identified as Colletotrichum aotearoa.Biological experiments showed that PDA medium was beneficial for the growth of SWBG5 strain，with the fastest mycelial growth occurring when peptone was used as the nitrogen source，soluble starch as the carbon source，and at a temperature of 25℃.The mycelia of strain SWBG5 could grow well under 24 hlight or 24 h darkness.The optimal pH was found to be 6，and the lethal temperature was 54℃.Indoor fungicide toxicity tests re-vealed that all the 8 fungicides inhibited the mycelial growth of strain SWBG5，with 30%pyraclostrobin SC exhibiting the strongest inhibitory effect，with an inhibitory concentration（EC50）value of 1.6959μg/mL.【Conclusion】The patho-gen of anthracnose of Begonia×benariensis in the Kunming World Horticultural Expo Park in Yunnan is Colletotrichum aotearoa，and 30%pyrazoxystrobin can be recommended for controlling this disease in future treatment.

Key words：Begonia×benariensis；anthracnose；pathogen；isolation and identification；biological characteristics；toxicity test

Foundation items：National Natural Science Foundation of China（32060695）；Yunnan Agricultural Fundamental Research Joint Special Project（202301BD070001-091）

0引言

【研究意義】秋海棠屬（Begonia L.）作為被子植物中的第六大屬，其種類繁多，截至2024年12月2日全球范圍內已知2164種（http：//padme.rbge.org.uk/begonia/），由于其葉片形態各異，花色多樣，可花葉共賞，被廣泛應用于室內盆栽和園林綠化，擁有巨大的園藝價值（高洋洋等，2023）。大花海棠（Begonia×benariensis）隸屬于秋海棠屬，是由德國班納利種子公司以四季秋海棠和竹節秋海棠為親本選育出的雜交1代品種（Tebbitt，2005；Dewitte et al.，2009），因其花色艷麗、花期長及環境適應力強等優點被重點應用于城市景觀配置中（翟懿銘等，2022）。炭疽病是由炭疽菌屬（Colletotrichum Cda.）引起的一種常見的植物真菌病害，在世界范圍內均有發生（劉麗萍等，2020）。大花海棠炭疽病主要危害大花海棠莖和葉，初期在感病部位形成白色至淺褐色病斑，中后期病斑擴大連接成片導致葉片焦枯、莖干斷裂，嚴重時造成植株死亡。目前僅有少部分秋海棠炭疽病病原菌被發現，其中平頭炭疽菌（Colletotrichum trun-catum）可侵染包括四季秋海棠在內的40余種植物（Zhai et al.，2018），喀斯特炭疽菌（Colletotrichum karsti）也能導致秋海棠發生炭疽病（Wu et al.，2022），對于大花海棠炭疽病未發現有單獨報道，因此，開展大花海棠病害病原菌鑒定、病原菌生物學特性探究及防治殺菌劑篩選，對大花海棠產業的可持續發展具有重要意義。【前人研究進展】隨著秋海棠在園林景觀中的大量運用，枯萎病、白粉病、細菌性葉斑病、灰霉病、炭疽病及根莖腐爛病等土壤或空氣傳播的病害被發現嚴重侵害秋海棠的根、莖、葉（Serdani etal.，2023；Wahyuniet al.，2023）。孫會仙（2020）使用60%百菌清1000倍液或10%粉銹寧3000倍液對秋海棠屬患白粉病植物進行噴霧，可較好地達到治療效果。張寶清等（2021）采用生長速率法探究14種植物提取物對四季秋海棠炭疽病菌的抑制作用，結果發現丁香的抑制效果最好。此外，鮮見對秋海棠屬植物其他病害防治措施的文獻報道。目前對大花海棠的研究主要集中在栽培管理（蘇敏惠，2019）、離體繁殖（陳彩霞等，2023）、園林景觀（王寧，2023）及多倍體誘導（Xie et al.，2024）等方面，缺乏對植物病害方面的系統性研究。當前化學殺菌劑仍被廣泛用于植物炭疽病防治。姚錦愛等（2022）發現福建省的62株草莓炭疽菌菌株對吡唑醚菌酯均具有較好的敏感性，且吡唑醚菌酯與多種殺菌劑之間不存在交互抗性。鄭婕等（2022）對引起廣東省韶關市南雄市辣椒種植區的辣椒炭疽病菌進行分離鑒定，確定造成該病害的病原菌是斯高威爾刺盤孢菌（Colletotri-chum scovillei）；利用12種殺菌劑進行室內毒力測定，結果顯示咪鮮胺作用效果最強，可作為該地區辣椒炭疽病防治的首選藥劑。侯秀明等（2023）分離鑒定了白及炭疽病病原菌Colletotrichum orchidophi-lum，藥效試驗發現肟菌·戊唑醇可顯著抑制該菌的菌絲生長。于世成等（2023）研究結果表明，50%多菌靈WP對燕麥炭疽病菌禾谷炭疽菌（Colletotri-chum cereale）菌絲生長的抑制作用最強，其次是430 g/L戊唑醇SC、10%醚甲環唑WG、450 g/L咪鮮胺EW和250 g/L嘧菌酯SC；對禾谷炭疽菌孢子萌發抑制作用較強的是250 g/L嘧菌酯SC、50%多菌靈WP、19%啶氧·丙環唑ME和80%代森錳鋅WP。劉錦霖等（2024）研究發現，導致哈斯油梨果實炭疽病的病原菌為暹羅炭疽菌（Colletotrichum siamense）；殺菌劑室內毒力測定結果顯示，9種供試殺菌劑中以咪鮮胺的毒力最強，其次是嘧菌酯、苯醚甲環唑、吡唑醚菌酯、吡噻菌胺和多菌靈。阮宏椿等（2024）在測定福建省112株大豆膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）對吡唑醚菌酯的敏感性時發現，該菌對吡唑醚菌酯具有顯著的敏感性，但存在中等抗性風險，在日常生產中可與其他殺菌劑復配使用。楊光等（2024）以菌絲生長速率法測定紅麻炭疽病菌黑線炭疽菌（Colletotrichum dematium）對咪鮮胺、苯醚甲環唑、吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈和嘧菌酯的敏感性，發現黑線炭疽菌對前3種藥劑均具有較高的敏感性，但在田間防治中咪鮮胺效果最好。【本研究切入點】目前對秋海棠屬植物炭疽病的研究報道較少。【擬解決的關鍵問題】采用組織分離法對感病大花海棠病原菌進行分離，通過柯赫氏法則驗證病原菌的致病性，結合形態特征及多基因序列聯合分析確定病原菌的分類地位，進一步進行病原菌生物學特性測定及防治藥劑室內毒力測定，以期為大花海棠炭疽病的發生、發展規律以及防治措施研究打下基礎。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試植株2023年8月5日自云南省昆明市世界園藝博覽園園區內隨機采集5株具有典型炭疽病發病癥狀的大花海棠病株，放入自封袋中，注明采集日期、地點及編號。

1.1.2供試培養基馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）：馬鈴薯200 g、瓊脂15～20 g、葡萄糖20 g、蒸餾水1000 mL，自然pH。牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基（BEPA）：牛肉膏3 g、蛋白胨5 g、NaCl 10 g、瓊脂15～20 g、蒸餾水1000 mL，pH 7.0～7.2。玉米粉瓊脂培養基（CMA）：玉米粉20～30 g、瓊脂15～20 g、蒸餾水1000 mL，自然pH。水瓊脂培養基（WA）：瓊脂10 g、蒸餾水1000 mL，自然pH。高氏1號培養基（Gause）：KNO3 1 g、NaCl 0.5 g、K2HPO4 0.5 g、MgSO4 0.5 g、FeSO4 0.01 g、瓊脂20 g、蒸餾水1000 mL，pH 7.2～7.4。胡蘿卜培養基（CA）：胡蘿卜200 g、瓊脂15～20 g、蒸餾水1000 mL，pH 7.0。查氏培養基（Czapek）：NaNO3 2 g、K2HPO4 1 g、KCl 0.5 g、MgSO4 0.5 g、FeSO4 0.01 g、蔗糖30 g、瓊脂15～20 g、蒸餾水1000 mL，pH 7.0。

1.1.3供試殺菌劑70%甲基硫菌靈WP（上海滬聯生物藥業夏邑股份有限公司）、30%吡唑醚菌酯SC（河南勇冠喬迪農業科技有限公司）、25%嘧菌酯SC（江蘇省鹽城利民農化有限公司）、80%代森錳鋅WP（利民責任化學有限公司）、70%噁霉靈WP（天津市綠亨化工有限公司）、40%腈菌唑WP（山東省聯合農藥工業有限公司）、24%噻呋酰胺SC（江蘇省鹽城利民農化有限公司）、45%咪鮮胺SC（江西正邦作物保護股份有限公司）。

1.1.4主要儀器GXM-358A智能光照培養箱（寧波江南儀器廠）、RND-300B頂置LED人工氣候箱（寧波楊輝儀器有限公司）、CS601超級恒溫水浴（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）、A300基因擴增儀（杭州朗基科學儀器有限公司）、Universal HoolⅡ型凝膠成像系統（美國Bio-Rad公司）、Hoefer PS300-B型電泳儀（美國Hoefer公司）。

1.2試驗方法

1.2.1炭疽病病原菌分離從感病的5株大花海棠植株上分別選取具有典型病狀的3片葉及莖干組織，利用組織分離法（劉志剛等，2023）對其進行炭疽病病原菌分離。用無菌手術刀切取病葉、病莖病健交界處組織塊大小約0.5 cm×0.5 cm各5塊，經75%酒精30 s消毒后無菌水中漂洗1次，再于5%次氯酸鈉中45 s消毒處理，最后利用無菌水對消毒后的組織塊進行3次漂洗，用無菌濾紙吸干水分，放置于PDA培養基上，每個培養皿放5塊組織塊。于25℃恒溫培養箱中倒置培養約7 d。培養結束后，用滅菌接種針挑取邊緣菌絲接種于新的PDA培養基上進行純化培養，直到分離純化出無污染的完整菌落。

1.2.2分離物致病性測定根據柯赫氏法則，參考董漢松（2012）的方法，選取10株健康大花海棠植株，每株選取上、中、下各1片葉及莖干進行回接處理。先用無菌水浸透脫脂棉清洗葉片及莖干，再用75%酒精浸透脫脂棉擦拭葉表及莖干表面進行表面消毒，最后用無菌水擦拭3次，晾干后用無菌接種針刺傷健康葉片及莖干，以直徑5mm的分離物菌餅菌絲面緊貼傷口處作為回接試驗組；另選取3株健康大花海棠植株進行相同處理后在傷口處放置相同規格PDA培養基作為對照組。所有處理后植株于25℃、相對濕度80%的人工氣候箱中培養，24 h后去除菌餅及培養基，觀察并記錄發病情況。至健康葉片顯現病狀后再次進行組織分離，比對分離物與原分離菌株形態特征，若一致，則該菌株為病原菌。

1.2.3病原菌形態學鑒定將生長良好的病原菌接種于PDA培養基上，25℃恒溫培養箱中倒置培養，定期觀察菌落生長情況并記錄菌落形態。利用載片培養法進一步觀察，切取1 mm厚，1 cm×1 cm的察氏培養基放置于載玻片上，用滅菌接種針挑取培養物菌絲接種于培養基一側，蓋上蓋玻片，制成濕室載片培養。3～5 d后觀察菌株分生孢子、分生孢子梗及產孢細胞等，并進行顯微拍照（楊明國等，2024）。

1.2.4病原菌分子生物學鑒定用滅菌的移液槍頭刮取純培養的病原菌菌絲約50 mg于離心管并放入液氮中，研磨棒研磨破壁，采用Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒［生工生物工程（上海）股份有限公司］提取病原菌總DNA。設置PCR擴增程序（Li etal.，2022），以提取的DNA為模版，利用ITS、GAPDH、HIS3、CHS-1、ACT和TUB2進行PCR擴增（表1）。PCR反應體系25μL：DNA模板2μL，上、下游引物（10μmol/L）各1μL、2×Taq PCR Master Mix 10μL，ddH2O 11μL。使用凝膠電泳對擴增后產物進行檢測，檢測完成后委托生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序。測序結果提交至NCBI（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov）的GenBank數據庫獲得登錄號，對測序結果進行BLAST比對，下載同源性高的菌株序列并對同一菌株的不同基因片段進行拼接，利用MEGA 11.0中的鄰接法（Neighbor-joining，NJ）構建系統發育進化樹，Bootstrap設為1000次重復。

1.2.5病原菌生物學特性測定

1.2.5.1不同培養基對病原菌菌絲生長的影響 "選擇培養良好的病原菌，用5mm滅菌打孔器于病原菌邊緣打取菌餅，菌絲面朝下接種于不同培養基（PDA培養基、Gause培養基、BEPA培養基、CMA培養基、WA培養基和Czapek培養基）中，于25℃恒溫培養箱中培養。每處理3次重復，培養7 d后采用十字交叉法測量菌落直徑（下同）。

1.2.5.2不同溫度對病原菌菌絲生長的影響打取直徑為5 mm的病原菌菌餅，菌絲面朝下接種于PDA培養基上，恒溫培養箱設置溫度5、10、15、20、25、30、35和40℃，將接種有病原菌菌餅的PDA培養基放置于8個不同溫度下的恒溫培養箱中培養。

1.2.5.3不同光照對病原菌菌絲生長的影響將直徑為5 mm的病原菌菌餅接種于PDA培養基中，放置于光周期（L∶D）分別為24 h（800 lx）∶0 h、12 h（800 lx）∶12 h、和0 h∶24 h（包裹2層錫箔紙）的培養箱中25℃培養。

1.2.5.4不同pH對病原菌菌絲生長的影響PDA培養基的pH分別設為4、5、6、7、8、9、10和11，不同pH使用濃度1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH進行調節。將直徑為5mm的病原菌菌餅接種于不同pH的培養基上25℃恒溫培養。

1.2.5.5不同碳源和氮源對病原菌菌絲生長的影響基礎培養基選用Czapek培養基，碳源選用甘露醇、乳糖、葡萄糖、可溶性淀粉、麥芽糖、果糖和木糖等量替換Czapek培養基中的蔗糖，配制成不同碳源的培養基；氮源選用硝酸鉀、尿素、硫酸銨、甘氨酸、氯化銨、酵母浸粉和蛋白胨等量替換Czapek培養基中的硝酸鈉，制成不同氮源的培養基。將直徑為5 mm的病原菌菌餅接種于不同碳源及氮源的培養基中25℃恒溫培養。

1.2.5.6病原菌致死溫度測定準備裝有1 mL無菌水的1.5 mL滅菌離心管，打取病原菌菌餅并放入其中，將離心管分別置于35、40、45、50、55、60、65和70℃的恒溫水浴鍋中，保持每個離心管在各自的溫度下恒溫15min后取出冷卻至室溫，接種于PDA培養基中25℃培養。7 d后選取菌株完全不生長的溫度條件及其前一溫度條件，以1℃為梯度，其他處理方法相同，將致死溫度精確到具體溫度。

1.2.6病原菌防治藥劑室內毒力測定參考曾蓉等（2024）的方法，使用菌絲生長速率法測定8種供試殺菌劑對病原菌菌絲生長的抑制作用。分別用二甲基亞砜（DMSO）溶解70%甲基硫菌靈WP、30%吡唑醚菌酯SC、25%嘧菌酯SC、70%噁霉靈WP、40%腈菌唑WP、24%噻呋酰胺SC和45%咪鮮胺SC，用無菌水溶解80%代森錳鋅WP，所有藥劑配制成1000μg/mL的母液，在預試驗基礎上稀釋成不同有效成分濃度的藥液（表2），將稀釋后的藥液與經滅菌處理的PDA培養基按1∶9的比例混合后倒入培養皿制成含藥培養基，PDA培養基與藥液混合時溫度不宜超過45℃。先將病原菌接種于PDA培養基上置于25℃恒溫培養箱中倒置培養10d；培養結束后用打孔器從菌落邊緣打取直徑6mm的病原菌菌餅，菌餅菌絲面朝下接種于含藥培養基中央，以無菌水替代藥液的PDA培養基為對照。將培養皿置于25℃恒溫培養箱中倒置培養，以十字交叉法測量不同處理培養7 d后的菌落直徑。每處理3次重復。記錄數據并計算不同濃度下的8種殺菌劑對菌絲生長的抑制率。以濃度10的對數值為橫坐標（x）、抑制率的機率值為縱坐標（y）計算毒力回歸方程y=ax+b，并求出抑制中濃度（EC50）和相關系數（r）。

抑制生長率（%）=（對照菌落直徑平均值-處理菌落直徑平均值）/（對照菌落直徑平均值-菌餅直徑）×100

1.3統計分析

利用Excel 2016和SPSS 26.0整理試驗數據并對整理后數據進行統計分析，采用Duncan’s新復極差法進行差異顯著性檢驗，利用DPS 9.01計算毒力回歸方程、EC50和r。

2結果與分析

2.1病害癥狀

發病初期，大花海棠莖干上出現淺褐色梭形、近梭形或長橢圓形病斑；后莖部病斑顏色加深并擴大，嚴重時致莖干斷裂（圖1-A、圖1-B）；葉片初期出現不規則褐色病斑，隨時間推移葉部病斑中心變黑并開始焦枯，嚴重時大片病斑連接造成葉片枯死（圖1-C、圖1-D）。

2.2病原菌分離純化及致病性檢測結果

從大花海棠發病植株上分離純化得到13株分離物，觀察其菌落形態及顯微形態，初步將13株分離物劃分為同一種菌。從中選取代表性菌株SWBG5用于后續研究。將菌株SWBG5回接于健康大花海棠植株上驗證其致病性，回接結果顯示，接種菌株SWBG5 7 d后植株上開始顯現病狀，葉部從菌餅放置部位向四周擴散出現淺褐色不規則病斑（圖1-H），接種15 d后莖部出現長橢圓形淺褐色病斑（圖1-G）；對照無明顯變化（圖1-E、圖1-F）；30 d后葉片開始焦枯裂口（圖1-I）。由此確定菌株SWBG5為大花海棠炭疽病病原菌。

2.3病原菌形態學鑒定結果

菌株SWBG5于25℃恒溫條件下培養7～10 d長滿培養皿（直徑9 cm），生長速度中等；菌落無味，絨狀，致密，邊緣纖毛狀；初期表面、背面均為白色，隨后表面轉為灰綠，繼續加深為黑色，背面轉為褐色至黑色（圖2-A和圖2-B）。菌絲有隔膜（圖2-C）；分生孢子梗基部淡褐色，向上減淡至無色，具1～2個隔膜，頂部鈍圓或平截狀（圖2-D）；產孢細胞無色，瓶梗式產孢（圖2-E）；分生孢子單胞，無隔，橢圓形或長橢圓形，兩端鈍圓，大小（11.98～25.84）μm×（3.80～4.75）μm（圖2-F和圖2-G）。綜合上述形態特征，比對《真菌學》（賀運春，2008），初步確定菌株SWBG5為炭疽菌屬真菌。

2.4病原菌分子生物學鑒定結果

菌株SWBG5經ITS、TUB2、HIS3、CHS-1、GAPDH和ACT基因的引物PCR擴增后分別得到長度為565、435、416、300、276和284 bp的基因片段，將其提交至GenBank數據庫獲得登錄號（PQ380202、PQ399850、PQ399852、PQ399851、PQ399853和PQ399854），BLAST比對后選擇參考序列（表3），以ITS-TUB2-HIS3-CHS-1-GAPDH-ACT的順序拼接序列并構建系統發育進化樹。由圖3可知，菌株SWBG5與Colletotrichum aotearoa BL09聚于系統發育進化樹的同一分支上，且分支自舉值為100%。形態學鑒定結果與分子生物學鑒定結果一致，確定菌株SWBG5為奧特阿羅刺盤孢菌（Colletotrichum aotearoa）。

2.5菌株SWBG5生物學特性測定結果

不同培養條件對菌株SWBG5菌絲生長的影響見圖4。6種培養基中菌株SWBG5菌絲在PDA培養基上生長最快，其菌落直徑顯著長于其他培養基處理（Plt;0.05，下同）；BEPA與CMA培養基上菌株SWBG5生長狀態相似，菌落直徑差異不顯著（Pgt;0.05，下同）；在CA培養基上菌絲雖然較稀疏，但生長正常；在WA培養基上菌絲幾乎不能正常生長（圖4-A）。不同溫度條件下，菌株SWBG5生長速度差異較大，菌絲生長最適溫度為25℃，其菌落直徑顯著長于其他溫度處理；其次是30和20℃處理；5、35和40℃下菌株完全不生長（圖4-B）。3種不同光周期下菌株SWBG5均能生長，24 h∶0 h與0h∶24 h條件下菌落直徑相近，差異不顯著，12 h∶12 h條件下菌絲生長緩慢（圖4-C）。當pH 4和pH 11時菌株SWBG5均能正常繁殖，證明該病原菌對pH的適應范圍較廣；菌落直徑隨pH的升高呈先增大后減小的變化趨勢，菌株SWBG5菌絲在pH 6時生長最快，但與pH 5、pH 7和pH 8時菌落直徑差異不顯著（圖4-D）。當Czapek培養基中的碳源為可溶性淀粉時菌株SWBG5菌絲生長最快，其次是葡萄糖，二者間菌落直徑差異不顯著（圖4-E）；以蛋白胨為氮源時菌株SWBG5菌絲生長最快，其菌落直徑顯著大于其他氮源處理（圖4-F）。

病原菌致死溫度測定結果（表4）顯示，菌株SWBG5在35～50℃恒溫水浴保溫15min后均能生長，而處于50～55℃時菌株SWBG5菌絲停止生長，因此，在50～55℃進行1℃梯度試驗，最終確定菌株SWBG5正常生長的溫度極值為54℃，高于54℃菌株SWBG5菌絲停止生長。

2.6殺菌劑室內毒力測定結果

殺菌劑室內毒力測定結果（表5）顯示，8種供試殺菌劑對菌株SWBG5菌絲的生長均有較好的抑制效果，其中，30%吡唑醚菌酯SC的抑制效果最好，EC50為1.6959μg/mL，70%噁霉靈WP的抑制效果最差，EC50為244.0356μg/mL。

3討論

炭疽菌屬由許多種類組成，可導致包括木本植物和草本植物在內的多種植物患病（Cannon etal.，2012）。由于炭疽菌的復雜性，單一的形態學觀察不能準確地鑒定炭疽菌，因此本研究以形態學觀察結合分子生物學技術確定從大花海棠感染炭疽病植株上分離出的病原菌為奧特阿羅刺盤孢菌，是Colleto-trichumgloeosporioides的復合種（Weir et al.，2012）。炭疽菌大部分具有宿主特異性，炭疽屬真菌的宿主特異性問題可通過其基因組特征、效應蛋白多樣性、次級代謝產物及植物細胞壁降解酶的差異進行解釋（O’Connell et al.，2012）。奧特阿羅刺盤孢菌的宿主特異性表現為在澳大利亞會引起山龍眼科的銀山龍眼炭疽病（Liu et al.，2013），而在廣東湛江會使蘭嶼肉桂感染炭疽病（易潤華等，2017），同時也作為野海棠屬金石榴及石杉屬蛇足石杉的內生真菌而被用于其他研究（Hsiao et al.，2016；Wu et al.，2019）。本研究中奧特阿羅刺盤孢菌作為病原菌被發現，由此推測，寄生生物從內生狀態轉變為致病狀態可能與環境條件存在緊密聯系，當寄生生物所處的環境條件有利于其生長和繁殖時，這些原本可能存在于宿主體內而不引起疾病的微生物就會轉變為能導致疾病的致病菌。對于本研究中的奧特阿羅刺盤孢菌是否由內生菌轉變而來還需進一步探究。

易潤華等（2017）也對奧特阿羅刺盤孢菌生物學特性進行了研究，但研究結果與本研究結果存在一定差異，原因可能是在長期的共同進化過程中病原菌與不同宿主之間相互適應，這種相互作用導致病原菌形成了具有獨特生物學特征的不同生理類型（薛婧等，2024）。病原菌的生物學特性與其所引起的疾病的發生和發展有著緊密關系（汪漢成等，2023）。本研究發現，菌株SWBG5菌絲在PDA培養基上生長最好；當培養基的碳源為可溶性淀粉、氮源為蛋白胨時更適合菌株SWBG5菌絲生長；完全光照和完全黑暗環境下菌株SWBG5菌絲均能較好地生長；菌株SWBG5菌絲最適生長溫度為25℃、最適pH 6；菌株SWBG5菌絲致死溫度為54℃，證明菌株SWBG5較耐高溫。這些信息對于理解菌株SWBG5在自然環境中的生存能力和傳播機制具有重要意義。

殺菌劑室內毒力測定結果顯示，30%吡唑醚菌酯SC對菌株SWBG5菌絲的生長有較好的抑制效果，EC50為1.6959μg/mL，意味著較低濃度的吡唑醚菌酯SC可有效控制病原菌的生長，從而減少大花海棠炭疽病的發生。吡唑醚菌酯作為一種廣譜殺菌劑能有效對抗多種類型的植物病原真菌，已在多種作物病害上顯現出良好的防效（陳瀟航等，2023；王麗等，2023；劉婕等，2024；王秋月等，2024），本研究進一步證實了其在防治大花海棠炭疽病方面的潛力。

未來的工作將集中于驗證本研究室內毒力測定結果在田間的有效性，并探索更多環境友好型的綜合防控大花海棠炭疽病的管理策略。同時，還需加強對奧特阿羅刺盤孢菌的分子生物學研究，以便更深入地了解其致病機制及抗藥性發展情況，為將來有效地保護和管理大花海棠免受炭疽病侵害提供更堅實的理論支持。

4結論

云南省昆明市世界園藝博覽園園區內的大花海棠炭疽病病原菌為奧特阿羅刺盤孢菌，30%吡唑醚菌酯SC對奧特阿羅刺盤孢菌的毒力最強，可作為該地區大花海棠炭疽病防治的首選藥劑。

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（責任編輯：麻小燕）