基于Bax/Bcl-2信號通路探究鉤藤提取物對實驗兔復發性單純皰疹病毒性角膜炎的作用

[關鍵詞]I型單純皰疹病毒;單純皰疹病毒性角膜炎;鉤藤提取物;Bcl-2相關X蛋白;B細胞淋巴瘤因子-2；胱天蛋白酶-3

[中圖分類號]R285.5 [文獻標志碼]A [文章編號]doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.06.004

Effects of Uncaria rhynchophylla extracts on recurrent herpes simplex keratitis in experimental rabbits via the Bax/Bcl-2 signaling pathway

JIA NG Zhi ^I，2 ，WANG Lei， LIU Xuewu2， ZHANG Xiaodong2， PENG Dongdong2，CHEN Xiangchi2， WANG Xiaoqing2， JIA NG Dejian2， XIA Xinhua'*

1.Schoolof Pharmacy，Hunan UniversityofChinese Medicine，Changsha，Hunan41O2O8，China;2.HunanKeyLaboratoryof PharmacodynamicsandSafety Evaluationof New Drugsamp; HunanPrima Drug Research CenterCo.，Ltd.，Changsha，Hunan 410331，China; 3.Xiangya Schol ofBasicMedical Sciences，CentralSouth University， Changsha， Hunan41Ool3，China

[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectsofUncariarhynchophyllextractsonrecurentherpessimplexkeratitis （HSK）inexperimentalabbitsbasedontecl-2asoiatedXprotein（BaxBcellympoafactor2（Bcl-2）signalingpathway MethodsFortycommon-gradebig-earedwhiterabitswererandomlydividedintonormalcontrol group，modelcontrol group， acyclovirgroupaqueousextractof Uncariarhchophyllagroup，andalcoolicextractofUncariahychophyllagroup，witheight rabbits ineachgroup.Exceptforthenormalcontrol group，allothergroups were infectedocularlywithherpessimplexvirus typeI （HSV-I.Twentyonedaysafterinfection（henocularinfectionsymptomshadresolved），recuentinfectionwasinducedusing ultravioletlighttoestablisharecurentHSKmodelThemodelcontrolgroupwasadministeredanequalvolumeofnormalsaline viaoculardrops，theacyclovirgroupreceivedoralgavageofacyclovirdaily，andTheaqueousextractof Uncaria rhynchophyla groupandthealcohlicextractof Uncariahynchophyllgroupweretreatedwiththecorrespondingextractsviaoculardropsdaily for14consecutivedays.Comeal fluorescencestainingscoreswereassessedonthedayafterrecurrnce induction （before administration），onthe7thand14thdayofadministration.Tearviralitersweremeasuredbeforeadministrationandonthe14th dayofdmistaalopatologialaioseducedndeoteinpesilevelsofad Caspase-3incoealtisue werecheckedbyWestern blotonthe14thdayafteradministration.Results Comparedwiththenormal control group，themodel control group showed a significant increase in cornealfluorescein staining scores （ Plt; O.O1），tearviral titers，and corneal histopathological scores （ Plt; O.01）.After 14 days of administration，compared with the model control group，the alcoholic extract ofUncariarhynchophyllgroup，andtheacyclovirgoupallexhibiteddecreasedcornealfluoresceinstainingscoresandtearviral titers （ P lt;0.05or P?0.01 ）.The acyclovir group and the alcoholic extract of Uncaria rhynchophylla group had significantly reduced corneal histopathological scores （ P lt;0.01）.Compared with the normal control group，the model control group showed significantly increased protein expression levels of Bax and Caspase- ³ （ Plt;0.01 ）and significantly decreased protein expression level of Bcl-2（ Plt; （20 0.01） ntecornea.Comparedwiththe modelcontrolgroup，theaqueous extractof Uncaria rhynchophyll groupandthealcoholic extractof Uncaria rhynchophylla group had significantlyreduced protein expression levelsof Caspase-3and Bax （ P lt;0.05， Plt;0.01） and significantly increased protein expression level of Bcl-2 （ Pe O.05） in the cornea Compared with the water extract group of Uncaria， the alcoholicextractgroupof Uncariashowedsignificantlylowercorealfluoresceinstaiingscoresat7and14daysofadministration（ Plt; （204號 O.01）.Thealcoholicextract groupof Uncariahadsignificantlylower tear virus titersandcormeal tisue pathological scores |P_- lt;0.01）. ConclusionDfereneractsofUnciahchohyllvesiicanttrapeutcfctsnurrentHSKandtepacolical mechanismmayberelatedtoeirregulationof teBaxBcl-2Caspase-3apoptoticsignalingpathaytherebyiibitingvirusduced cornealcllapoptosis.Moreover，thealcoholicextractofUncariarhychophylldemonstratesstrongerpharmacologicaleficacy.

[Keywords]herpessimplexvirustypeI;herpessimplexkeraitis；Uncariarhynchophyllaextracts;Bcl-2-associatedX protein;B-cell lymphoma factor 2;Caspase-3

I型單純皰疹病毒（herpes simplex virus typeI，HSV-I）主要感染面部，可通過直接接觸或體內重復侵襲感染眼部導致單純皰疹病毒性角膜炎（herpessimplex keratitis，HSK）HSV-I因其具有較強的免疫逃逸能力[I-3]，在急性感染后常潛伏于宿主的三叉神經元3-5]，使其在體內不易被徹底清除，并導致條件性的反復發作性感染[4-，最終造成角膜白斑而致盲，是引起全球致盲的主要原因[4-5]。臨床治療藥物以DNA多聚酶抑制劑、糖皮質激素、免疫抑制劑為代表，且多聯合用藥。但藥物聯用增加了不良反應和毒性反應的發生風險，如長期口服抗病毒藥物存在腎毒性等不良反應，長期局部使用糖皮質激素可能引起眼壓升高、白內障、黃斑變性等并發癥8]。因此，同時兼具多重藥理活性的藥物將具有更高的開發價值。鉤藤作為我國傳統中藥，具有清熱平肝、熄風定驚的功效，藥理作用研究主要集中于降壓、抗氧化應激、抗神經細胞調亡、抗炎和抗纖維化、抗抑郁等，較少有研究涉及直接抗菌及抗病毒作用[9-10]。本研究通過觀察鉤藤提取物對復發性HSK模型的治療作用，為鉤藤提取物的新用途和進一步的開發提供實驗參考。

1材料與方法

1.1 實驗動物

普通級日本大耳白兔40只，雌雄各半，體質量2.5～3.0kg ，動物質量合格證號：42010000006435；實驗動物生產許可證號：SCXK（鄂）2021-0011，購于武漢市萬千佳興生物科技有限公司。在普瑞瑪藥物研究中心有限公司普通環境生物安全實驗室飼養，實驗動物使用許可證號：SYXK（湘）2020-0015，生物安全實驗室備案編號：[202405312]BSL2-04。動物實驗經普瑞瑪藥物研究中心有限公司實驗動物管理倫理委員會批準，倫理審批號：IACUC-2021（2）045，實驗過程遵循3R原則

1.2主要藥品及試劑

鉤藤飲片（通道湘春中藥材專業合作社，批號：20210506）；阿昔洛韋片（廣東彼迪藥業有限公司，批號：20210502）。

中性紅染色液（北京索萊寶科技有限公司，批號：20210813）；熒光素鈉（上海麥克林生化科技有限公司，批號：C10642034）;兔抗胱天蛋白酶-3（Caspase-3）抗體（愛博泰克生物科技有限公司，貨號：A0214）;兔抗B細胞淋巴瘤因子-2（B-celllymphoma-2，Bcl-2）抗體、兔抗Bcl-2相關X蛋白（Bcl-2-associated Xprotein，Bax）抗體（美國 Cell Signaling Technology，貨號：2872S、277S）；人胚胎腎細胞293（HEK293T）（武漢普諾賽生命科技有限公，批號：202017）；HSV-I（美國模式菌種收集中心，編號：ATCCVR-773）。

1.3 主要儀器

HOPE-MED8130B型皮膚光毒性實驗檢測儀（天津開發區合普工貿有限公司）；KJ5S1型手持裂隙燈顯微鏡（蘇州康捷醫療股份有限公司）；3111型CO₂ 培養箱（美國ThermoFisher公司）;DMIL型倒置顯微鏡、DFC420C型病理成像系統（德國Leica公司）；YXQ-50A型立式壓力滅菌器（上海博訊醫療生物儀器股份有限公司）。

1.4 藥液制備

取鉤藤帶鉤莖枝，按1：1加水或 75% 乙醇浸泡30min 制備鉤藤水提取物或醇提取物，加熱煮沸提取 2h ，得到提取液，過濾，60 C 減壓濃縮成水提取浸膏（每克浸膏含 4.1385g 生藥材）或醇提取浸膏（每克浸膏含 2.9835g 生藥材），均采用生理鹽水溶解配制成每毫升藥液含 0.1g 生藥材，置于4℃冰箱保存備用[]。

1.5 造模方法

參考文獻[1O]培養方法進行HSV-I的培養，并制備成半數組織細胞感染劑量為 10^-4.88/0.1mL （相當于 5.3×10⁵PFU/mL ）的病毒液，用于大耳白兔眼部感染。參照文獻[12-13]建立兔復發性HSK模型。日本大耳白兔采用乙醚吸入輕微麻醉，用 6mm 環鉆在左眼角膜中央作一壓痕，并以6.5號針頭在壓痕內作“#\"劃痕（深度僅限上皮層），向兔左眼結膜囊內滴入單純性皰疹病毒原液 100μL/ 眼 5.3×10⁴PFU/眼）誘導原發性感染，以眼部出現感染癥狀（眼臉腫脹，淚液及分泌物增加）為原發性感染造模成功的標準[3，10]

于原發性感染后繼續觀察21d（D1＼～D21），直至眼部感染癥狀均消失。于觀察期結束后當天（D21）采用紫外線（光源TW20，波長 302nm ，照射劑量 照射角膜 3min ，以誘導HSK復發[12-13]。于誘導復發后次日進行角膜熒光染色評分和淚液病毒滴度檢測，以角膜熒光染色評分顯著增大，且淚液中能檢出病毒即判定成功制備復發性HSK模型[12-13]

1.6 分組及給藥方法

選用檢疫合格日本大耳白兔40只，雌雄各半，按體質量隨機分為正常對照組、模型對照組、阿昔洛韋組、鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組，每組8只。除正常對照組外，其余各組均建立復發性HSK模型。正常對照組不予干預，模型對照組經眼滴入等量生理鹽水，鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組均于誘導復發后次日開始連續 14d（D22～D35） 經眼滴入鉤藤提取物藥液 50μL 眼，阿昔洛韋組灌胃阿昔洛韋 46.7mg/kg^[14] 。分別于誘導復發后次日（D22，給藥前）、給藥7d、給藥14d后（D29、D36）進行角膜熒光染色評分；于誘導復發后次日和給藥 14d 進行淚液采集和病毒滴度檢測。進一步于給藥結束后解剖，取眼球，分離角膜組織，分別進行組織病理學檢查和組織蛋白表達檢測

1.7熒光染色法觀察角膜損傷情況

采用熒光素鈉 0.1mL/ 只滴注眼部，進行角膜熒光素染色，并采用裂隙燈進行角膜損傷的病變評分，具體評分標準如下[7，15-16]：0分，正常的透明角膜；0.1＼～0.9分，角膜熒光素鈉染色呈點狀，上皮病變數為1到9個；1分，角膜熒光素鈉染色呈點狀，點狀上皮病變10個以上，或小潰瘍面積在 25% 以下；2分，角膜熒光素鈉染色呈片狀，角膜潰瘍面積在 25% 250% ；3分，角膜熒光素鈉染色呈片狀，角膜潰瘍面積在 50%～75%;4 分，角膜熒光素鈉染色呈片狀，角膜潰瘍面積在 75%～100% 。得分越高，表明角膜損傷程度越嚴重。

1.8 空斑法觀察淚液病毒滴度

采用蘸有DMEM培養液的棉簽擦拭左右兩側角膜，將其放人裝有 1mL DMEM的無酶EP管中，將3次擦拭液均勻混合后，按10倍梯度稀釋5個稀釋度，采用空斑計數法進行病毒滴度檢測，觀察空斑形態并記錄空斑數，計算病毒滴度（ =（每孔平均空斑個數 × 病毒稀釋度倒數）/每孔病毒接種量（mL）。病毒滴度越大，表明淚液中的病毒數量越多，角膜感染病毒程度越嚴重。

1.9 HE染色觀察角膜組織的病理變化

大耳白兔按 15mg/kg 靜脈注射 10mg/mL 丙泊酚乳狀注射液麻醉，解剖取角膜組織，福爾馬林固定，石蠟包埋、切片、HE染色，置于光鏡下觀察角膜組織病理學變化，分別按角膜上皮細胞壞死和缺損、上皮細胞增生、基質炎癥細胞浸潤程度進行分級和評分，并將總分進行加和作為角膜病變的整體病變評分。具體評分標準如下[7：無異常（NSL），計0分；輕度病變 （+） ，計1分；中度病變 （++） ，計2分；重度病變 （+++） ，計3分。病理評分越高，表示角膜病變越嚴重。

1.10Westernblot檢測角膜組織中的相關蛋白表達

取新鮮的角膜組織，在預冷的RIPA緩沖液中進行勻漿，離心去除未裂解的組織，收集離心上清液總蛋白，進行蛋白濃度檢測。取角膜總蛋白 50μg 上樣，進行SDS-PAGE凝膠電泳。用一抗（Caspase-3、Bax ）按1：1O00稀釋，并與PVDF膜 4°C 孵育過夜，TBST洗3次，每次 15min 。用HRP標記的二抗室溫孵育 90min ，TBST洗3次，每次 15min ，ECL化學發光法曝光掃描拍照，用QuantityOne4.6.8軟件定量灰度值，以 β -actin為內參對照，測量各組的Caspase- ³?Bax，Bcl-2 蛋白表達水平。

1.11 統計學分析

采用SPSS23.0軟件進行統計學處理，體外試驗采用Bliss法進行 IC₅₀ 和 EC₅₀ 的計算。各組數據在分析前進行正態性檢驗和方差齊性檢驗，正態分布數據以‘ ”表示，非正態分布數據用中位數表示。兩組均數比較采用 χ_t 檢驗，多組均數比較采用單因素方差分析，以 Plt;0.05 為差異有統學意義。

2結果

2.1 各組角膜熒光染色評分情況

正常對照組大耳白兔給藥期間的眼部均未見異常，模型對照組、阿昔洛韋組、鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組大耳白兔在誘導復發后次日的角膜均可見片狀染色，且各組動物間的染色面積基本一致。鉤藤醇提取物組和阿昔洛韋組給藥7d和14d的角膜可見點狀染色；鉤藤醇提取物組給藥7d和 14d 的角膜仍可見片狀染色，但染色面積顯著減小。詳見圖1A＼～E。

與正常對照組比較，模型對照組、阿昔洛韋組、鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組在誘導復發后次日均可見角膜熒光染色評分顯著升高 （Plt;0.01） 。與模型對照組比較，阿昔洛韋組和鉤藤醇提取物組給藥7d和 14d 后的角膜熒光染色評分均降低（ Plt; 0.05，Plt;0.01 ，鉤藤水提取物組給藥14d后的角膜熒光染色評分降低（ （Plt;0.05 ）。與阿昔洛韋組比較，鉤藤水提取物組給藥7d的角膜熒光染色評分升高（Plt;0.05） ；與鉤藤水提取物組比較，鉤藤醇提取物組給藥7d和14d后的角膜熒光染色評分均顯著降低 （Plt;0.01） 。詳見圖 1F 。

Fig.1Changes in corneal fluorescein sodium staining and corneal scoring in recurrent HSK model of experimental rabbits

注：A、B、C、D、E分別為正常對照組、模型對照組、阿昔洛韋組、鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組的角膜熒光素鈉染色圖，箭頭指向處顯示為熒光染料聚集；F為角膜評分柱形圖。與正常對照組比較， ⁺⁺Plt;0.01 ；與模型對照組比較， ^*Plt;0.05 **Plt;0.01 ;與阿昔洛韋組比較， ^?Plt;0.05 ；與鉤藤水提取物組比較， ^##Plt;0.01 。

2.2 各組淚液病毒滴度情況

與正常對照組比較，模型對照組、阿昔洛韋組、鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組誘導復發后次日的淚液病毒滴度均顯著升高 （Plt;0.01） ；與模型對照組比較，阿昔洛韋組、鉤藤水提取物組和鉤藤醇提取物組淚液病毒滴度均顯著降低 （Plt;0.01） ；與阿昔洛韋組比較，鉤藤水提取物組淚液病毒滴度顯著升高（Plt;0.01） ；與鉤藤水提取物組比較，鉤藤醇提取物組淚液病毒滴度顯著減少 （Plt;0.01） 。詳見圖2。

2.3 各組角膜組織病理變化

正常對照組動物角膜未見上皮細胞缺損、變性壞死、增生和基質炎癥細胞浸潤；模型對照組角膜可見中度角膜病變，包括角膜上皮細胞變性壞死、缺損和增生，以及基質的炎癥細胞浸潤，上皮缺損發生率為 100% ;阿昔洛韋組角膜可見輕度角膜病變，但病變類型僅包括輕度的上皮增生和少量的基質炎癥細胞浸潤；鉤藤水提取物組角膜上皮細胞可見輕度的變性和增生，伴有大量的基質炎癥細胞浸潤；鉤藤醇提取物組角膜僅見輕度的上皮增生和少量的基質炎癥細胞浸潤。詳見圖 3A～E □

與正常對照組比較，模型對照組角膜病理評分顯著增大（ （Plt;0.01） ；與模型對照組比較，阿昔洛韋組和鉤藤醇提取物組角膜病理評分均顯著減小（ Plt; 0.01）；與阿昔洛韋組比較，鉤藤水提取物組角膜病理評分增加（ _{（Plt;0.05）} ；與鉤藤水提取物組比較，鉤藤醇提取物組的角膜病理評分顯著降低（ （Plt;0.01）. 。詳見圖 3F 。

2.4各組角膜組織相關蛋白表達水平情況

與正常對照組比較，模型對照組角膜的Bax和Caspase-3蛋白表達均顯著增加（ Plt;0.01 ），Bcl-2蛋白表達顯著減少 （Plt;0.01） ；與模型對照組比較，鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組Caspase ^-3 Bax蛋白表達減少 （Plt;0.05，Plt;0.01 ），Bcl-2蛋白表達增加（ Plt; 0.05）。詳見圖4。

3討論

HSK是由HSV-I感染引起的病毒性角膜病變[1，15]，其病變類型包括上皮型、基質型和內皮型，其中基質型HSK通常分為基質免疫型和基質壞死型[15-17]。基質免疫型HSK由角膜基質對HSV-I抗原的遲發超敏反應引起，其角膜上皮通常完好無損；基質壞死型HSK在基質炎癥浸潤的基礎上伴有角膜上皮細胞的缺損、壞死，可能是由HSV-I活動性感染和免疫性炎癥共同引起的[18]

Fig.2Tear virus titers in recurrent HSK model of experimental rabbits（ ?×100^? 注;A、B、C、D、E分別為正常對照組、模型對照組、阿昔洛韋組、鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組的淚液病毒空斑法培養圖；F為淚液病毒滴度計數的柱形圖。與正常對照組比較， ⁺⁺Plt;0.01 ;與模型對照組比較， ^**Plt;0.01 ；與阿昔洛韋組比較，p＜ 0.01；與鉤藤水提取物組比較， ^##Plt;0.01 。

Fig.3Pathological examinationofcorneal tissueinrecurrent HSKmodel of experimental rabbits（ ×200 ））注：A、B、C、D、E分別為正常對照組、模型對照組、阿昔洛韋組、鉤藤水提取物組、鉤藤醇提取物組的角膜組織病理圖，B圖的橢圓形框為角膜缺損部位;F為角膜病理評分柱形圖。與正常對照組比較， ^++Plt;0.01 ；與模型對照組比較， **P_lt; 0.01；與阿昔洛韋組比較， ^?Plt;0.05 ；與鉤藤水提取物組比較， ^##Plt;0.01 。

本研究結果顯示，HSV-I以 5.3×10⁴ PFU/眼的感染造模劑量能構建至少持續時間14d的兔HSK模型，表現為角膜呈點狀和樹枝狀熒光染色，且淚液中病毒滴度顯著增加，提示角膜存在組織缺損和活動性的病毒感染，角膜損傷符合基質壞死型HSK的病變特征，病變類型包括角膜上皮細胞變性壞死、缺損和增生，以及基質的炎癥細胞浸潤β，15-1σ]。鉤藤水提取物和鉤藤醇提取物能降低HSK家兔模型的角膜熒光染色評分，降低模型的淚液病毒滴度。鉤藤醇提取物能顯著改善角膜組織病變，鉤藤水提取物對角膜組織病變的改善作用不明顯，提示鉤藤提取物對家兔HSK模型具有顯著治療作用，且鉤藤醇提取物的治療作用顯著優于鉤藤水提取物。

角膜上皮細胞（corneal epithelial cells，CEC）是角膜的初始防御層，對于防止HSV-1穿透更深并與基質神經叢相互作用至關重要[7-19]。感染后，HSV-I觸發CEC凋亡，破壞上皮屏障并加重感染[10，19-21]。鉤藤及其提取物則能抑制不同疾病的組織細胞凋亡，如寨旭等22的研究顯示，異鉤藤堿能通過胞外信號調節激酶信號通路調控大鼠急性胰腺炎細胞的炎癥和凋亡。侯叢嶺等[23研究顯示，異鉤藤堿通過上調miR-19205p調控腫瘤壞死因子- σ_?∝ 誘導人支氣管上皮細胞凋亡。因此，本研究將鉤藤提取物針對HSK的機制研究聚焦于細胞凋亡，通過檢測角膜組織中經典的凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表達量探索鉤藤不同工藝提取物對角膜細胞凋亡的影響[24-25]。本研究結果顯示，與正常對照組比較，模型對照組角膜組織的Bax、Caspase-3蛋白表達增加，Bcl-2蛋白表達減少；經鉤藤提取物干預后，與模型對照組比較，鉤藤水提取物組和醇提取物組的促凋亡Bax、Caspase-3蛋白表達減少，抑凋亡Bcl-2蛋白表達增加，且醇提取物對上述3個蛋白的調節程度更強。上述結果提示，實驗兔HSK模型的角膜損傷可能與角膜組織Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信號通路改變有關，而鉤藤提取物改善HSK角膜病變的作用機制可能與其調節Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表達水平來抑制角膜細胞凋亡有關。

綜上所述，鉤藤不同工藝提取物對復發性HSK具有治療作用，其藥理作用機制可能與其調節Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信號通路，抑制病毒感染引起的角膜細胞凋亡有關，且鉤藤醇提取物的藥效作用更強。

參考文獻

[1] AVITABILEE，MENOTTI L，GIORDANI B，et al.Vaginal lac-tobacilli supernatants protect from herpes simplex virus type 1infection in cell culture models[J]. International Journal of Molec-ular Sciences，2024，25（5）：2492.

[2]張晶晶，李琦涵.單純皰疹病毒I型感染的天然免疫反應及其逃逸機制[J].生物技術通訊，2020，31（4）：478-485.

[3] YIND，LING SK，WANG D W，et al. Targeting herpes sim-plexviruswith CRISPR-Cas9 cures herpetic stromal keratitisinmice[J].Nature Biotechnology，2021，39（5）：567-577.

[4] SHRESTHA P， PAUDEL S. Stromal keratitis among herpes sim-plex keratitis patients in a tertiary eye hospital： A descriptivecross-sectional study[J]. JNMA，2022，60（256）：1008-1010.

[5] RANI A，ERGUN S，KARNATI S， et al. Understanding the linkbetween neurotropic viruses，BBB permeability，and MSpatho-genesis[J]. Journal of Neurovirology，2024，30（1）：22-38.

[6]BELLO-MORALES R， ANDREU S， LOPEZ-GUERRERO JA. Theroleof herpes simplex virus type1 infection in demyelinationofthecentral nervoussystem[J]. International Journal of MolecularSciences，2020，21（14）：5026.

[7] 李鵬偉，劉江川，盧萍，等.藥物治療單純皰疹病毒基質型角膜炎的研究進展[J].眼科學報，2022，37（8）：651-657.

[8]潘志強．合理使用眼局部藥物以避免藥源性眼表損傷[J].中華眼科雜志，2021（8）：561-563.

[9] 譚桂玉，萬凌云，張坤，等.鉤藤的藥理作用及臨床應用研究進展[J].廣西科學，2024，31（1）：1-8.

[10]王珍，梁麗娜，馬群英，等．雙秦眼用凝膠對復發性單皰病毒性角膜炎小鼠的干預研究[J].中國中醫眼科雜志，2022，32（9）：684-690.

[11]胡宇婷，唐欣，劉麗花，等．HPLC 法測定不同商品規格桂林產鉤藤中4種生物堿的含量[J].廣西中醫藥大學學報，2023，26（1）： 40-44.

[12] 朱越峰，陳菊仙，屠叔丹，等．銀翹散對單純皰疹病毒性角膜炎小鼠TNF- σ_-α 和 IFN-γ 表達的影響[J].北方藥學，2024，21（9）：8-11， 15.

[13] 肖書毓，俞瑩，陶津華.BALB/c小鼠單純皰疹病毒性角膜炎復發感染模型的建立及鑒定[J].中華實驗眼科雜志，2021，39（2）：107-112.

[14]趙偉，孫國志．不同種實驗動物間用藥量換算[J].畜牧獸醫科技信息，2010（5）：52-53.

[15] 中華醫學會眼科學分會角膜病學組．我國角膜上皮損傷臨床診治專家共識（2016 年）[J].中華眼科雜志，2016（9）：5.

[16] CHODOSH J. The herpetic eye disease study： Topical corticos-teroid trial for herpessimplexstromal keratitis：Aparadigmshifting clinical trial[J]. Ophthalmology，2020，127（4S）： S3-S4.

[17]孫博強，王瓊艷，潘冬立.單純皰疹病毒潛伏和激活機制研究進展[J].浙江大學學報（醫學版），2019，48（1）：89-101.

[18] KHAN A A， SRIVASTAVA R， CHENTOUFI A A， et al. Ther-apeutic immunization with a mixture of herpes simplex virus1glycoprotein D-derived \"asymptomatic\" human CD8+ T-cell epi-topes decreases spontaneousocular shedding in latently infectedHLA transgenic rabbits：Association with low frequency of localPD-1+ TIM- ?3⁺ CD8+ exhausted Tcels[J].Journal of Virology， 2015，89（13）： 6619-6632.

[19] KALEZIC T， MAZEN M，KUKLINSKI E，et al. Herpetic eyedisease study：Lessons learned[J].Current Opinion in Ophthal-mology，2018， 29（4）： 340-346.

[20] DUTT S， ACHARYA M， GOUR A， et al. Clinical eficacy of oraland topical acyclovir in herpes simplex virus stromal necrotiz-ingkeratitis[J].Indian Journal of Ophthalmology，2016，64（4）：292-295.

[21] CHANG J Y， YAO Y，SUN X H， et al. JAG1 mediates apop-tosis in herpes simplex keratitis by suppressing autophagy viaROS/JAG1/NOTCH1/pULK1 signalingpathway[J].Cell Biologyand Toxicology，2024，41（1）：1-19.

[22] 寨旭，裴紅紅，劉俊，等.異鉤藤堿對大鼠急性胰腺炎細胞的炎癥和凋亡改善及ERK信號通路調控作用[J].山東醫藥，2024， 64（12）： 15-19.

[23]侯從嶺，蘆曉帆，雷小婷，等．異鉤藤堿上調miR-192-5p 對TNF- σ?αα 誘導的人支氣管上皮細胞凋亡和炎癥因子釋放的作用及其機制[J].吉林大學學報（醫學版），2021，47（3）：595-607.

[24] 胡善明，王亞楠，許正茂，等．Bcl-2家族分子在細胞凋亡中的作用研究進展[J].動物醫學進展，2021，42（10）：85-89.

[25]程宇凌，任艷萍.caspase-3 和核因子- ??κB 在細胞凋亡外途徑中的雙向作用研究進展[J].廣東醫學，2016，37（18）：2837-2840.

（本文編輯 田夢妍）