運(yùn)動(dòng)預(yù)處理結(jié)合電針對(duì)血管性癡呆大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞極化及TREM2/DAP12蛋白表達(dá)的影響

[摘要]目的觀察運(yùn)動(dòng)預(yù)處理結(jié)合電針對(duì)血管性癡呆（VD）大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞極化、髓系細(xì)胞觸發(fā)受體2（TREM2）/銜接蛋白DNAX激活蛋白12（DAP12）的影響，探討運(yùn)動(dòng)預(yù)處理結(jié)合電針改善VD大鼠認(rèn)知功能的可能機(jī)制。方法將90只雄性SD大鼠隨機(jī)均分為非運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組和運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組，非運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組又均分為假手術(shù)組（Sham組）、模型組（Model組）和電針組（EA組），運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組又均分為運(yùn)動(dòng)預(yù)處理假手術(shù)組（EP-Sham組）、運(yùn)動(dòng)預(yù)處理模型組（EP-Model組）和運(yùn)動(dòng)預(yù)處理電針組（EP-EA組），每組15只。運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組所有大鼠在造模前行不負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練4周，每周5d，每天 30min Model組EP-Model組EA組和EP-EA組通過雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性雙重結(jié)扎法制備VD模型，Sham組和EP-Sham組只分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈不作結(jié)扎。造模后第7天，EP-EA組和EA組大鼠進(jìn)行為期4周的電針治療（電針百會(huì)、大椎和雙側(cè)腎俞），每周6d，每天 30min 于運(yùn)動(dòng)預(yù)處理前、運(yùn)動(dòng)預(yù)處理后及電針干預(yù)后，采用Momis水迷宮測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，羅克沙爾堅(jiān)牢藍(lán)染色觀察大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘脫失情況，免疫熒光雙標(biāo)染色法檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Argl）與離子鈣結(jié)合適配器分子1（Ibal）共表達(dá)水平，Westem blot法檢測(cè)大鼠海馬組織中TREM2、DAP12的表達(dá)水平。結(jié)果與Sham組比較，Model組大鼠平均逃避潛伏期延長(zhǎng)、穿越平臺(tái)次數(shù)減少 （Plt;0.05） ；海馬CA1區(qū)完整髓鞘數(shù)量明顯降低，髓鞘組織海綿狀空泡樣改變嚴(yán)重，小膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見大量髓鞘碎片；髓鞘脫失評(píng)分顯示海馬CA1區(qū)髓鞘脫失增多（ Plt;0.05） ;海馬CA1區(qū)中iNOS與小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Iba1共表達(dá)水平增加（ Plt; 0.05），Arg1與小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Iba1共表達(dá)水平減少（ Plt;0.05） ；海馬中TREM2、DAP12蛋白表達(dá)下降 （Plt;0.05） 。與Model組比較，EA組、EP-Model組和EP-EA組大鼠平均逃避潛伏期縮短、穿越平臺(tái)次數(shù)增多（ Plt;0.05） ；海馬CA1區(qū)髓鞘較為完整，排列較為整齊和均勻；髓鞘脫失評(píng)分顯示海馬CA1區(qū)髓鞘脫失減少（ Plt;0.05） ;海馬CA1區(qū)中iNOS與Ibal共表達(dá)水平減少（ Plt;0.05） ，Arg1與Ibal共表達(dá)水平增加 （Plt;0.05） ；海馬中TREM2、DAP12蛋白表達(dá)升高 （Plt;0.05） 。與EP-Model組比較，EP-EA組大鼠平均逃避潛伏期縮短、穿越平臺(tái)次數(shù)增多 Plt;0.05） ；髓鞘脫失評(píng)分顯示海馬CA1區(qū)髓鞘脫失減少 Plt;0.05） ；大鼠海馬CA1區(qū)中iNOS與Ibal共表達(dá)水平減少（ Plt;0.05 ），Arg1與Ibal共表達(dá)水平增加 （Plt;0.05） ；海馬中TREM2、DAP12蛋白表達(dá)升高 Plt;0.05 。結(jié)論運(yùn)動(dòng)預(yù)處理結(jié)合電針可改善VD大鼠的學(xué)習(xí)和記憶功能，其機(jī)制可能是通過調(diào)控TREM2、DAP12蛋白表達(dá)，促進(jìn)海馬小膠質(zhì)細(xì)胞極化為M2型，增強(qiáng)M2型小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬功能，促進(jìn)髓鞘碎片的清除。

[關(guān)鍵詞]血管性癡呆；小膠質(zhì)細(xì)胞極化；運(yùn)動(dòng)預(yù)處理；電針；髓系細(xì)胞觸發(fā)受體2；銜接蛋白DNAX激活蛋白12

[中圖分類號(hào)]R245.9 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A [文章編號(hào)]doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.06.008

Effects of exercise pretreatment combined with electroacupuncture on microglial polarization and TREM2/DAP12 protein expression in the hippocampus of rats with vascular dementia

CHEN Pan'， XIE Ziwei'，LI Na'， HUANG Chaofei'， ZHANG Hong'， YANG Qingjun2， ZOU Yingjie'， YUAN Si'， TAN Jie1*

1.CollegeofAcupunctureMoxibustion-TuinaandRehabilitation，Hunan UniversityofChineseMedicine，Chngsha，Hunan410208，China;2.epartmentofehabilitationXingyaoaiehabilitationHospital，angshaHunanina

[Abstract]Objective To investigate theefects of exercisepretreatment combined with electroacupunctureon hippocampal microglialpolarzatioandtrigeingreeptrexpressdonyeidcells2（EM2DAX-activatigprotin12（DAP12） invascular dementia（VD）ratsandtoexploretheposiblemechanismsbyhichexercisepretreatmentcombiedwithelectroacupunctureimproves cognitivefunctioninVDrats.MethodsNinetymaleSDratswererandomlydividedintonon-exercisepretreatmentgroupand exercise pretreatmentgroup.Thenon-exercisepretreatmentgroupwas furtherdividedintosham-operated group（Sham group），model group，adelectroacupuncturegroup （Egroup）.Theexercisepretreatment groupasfurtherdividedintoexercisepretreatmentham operationgroup（EP-hamgoup）exercisepretreatmentoelgropEP-odelgoup）andexecisepretreatmentelectroacctre group（EP-EAgoup），with15ratsineachgroup.Allatsintheexercisepretreatmentgroupweresubjectedtounloadedswiming exercisetrainingfor4wekspriortomodelestablishment，withtrainingbeingconductedfor5dperweekandlasting3Ominutes each day.VDmodelswere establishedinthemodel group，EP-Modelgroup，EAgroup，andEP-EAgroupthrough permanent bilateralcommoncarotidarterydoubleligation，whileinthe ShamgroupandEP-Sham group，onlythebilateralcommoncarotid arteries wereisolatedwithoutligation.Onthe7thdayafter modelestablishment，ratsintheEP-EAgroupandEAgroup were subjected toa4weekcourseofeletroacupuncturetreatment[electroacupunctureat\"Baihui （GVO）\"，\"Dazhui（GV4）\"，andbilateral \"Shenshu（BL23）\"acupoints]，withthetreatmentbeing administered6daweek，3Ominuteseachday.Moris water mazetestwas usedtotestthelearningandmemoryabilitiesofratsbeforeexercisepretreatment，afterexercisepretreatmentandafter electroacupunctureintervention.Luxolfastbluestainingwasusedtoobservethedemyelinationinthe hippcampalCAlregionof therats.Immunofluorescencedoublestainingwasused tomeasuretheco-expresionlevelsofinduciblenitricoxidesynthase NOS）arginase1（Argl），ndedalbidingdapteroecule1（al）inthippocampalCgiooftetste blot wasused tomeasuretheexpresion levelsof TREM2and DAP12inthe hippocampaltissueof theratsResultsCompared withthe Sham group，the model grouprats showed prolonged meanescape latencyanddecreased numberof platformcrossings（ Plt; （ 0.05）.ThenumberofintactmyelinsheathsinthehipocampalCA1regionsignificantlyreduced，withseverespongifovacular changesinthemyelinsheath tissueandalargeamountof visible myelin debrisinthecytoplasmof microgliaThe myelin los score indicated an increase in myelin loss in the hippocampal CA1 region （ P lt;0.05）.The co-expression levels of iNOSand the microglial marker Ibal in the hippocampal CA1 region increased P lt;0.05），while those of Argl and Ibal decreased （ P lt;0.05）. The protein expressions of TREM2 and DAP12 in the hippocampus decreased （ P： O.05）. Compared with the model group，rats in the EA， EP-Model，andEP-EA groupsshowed shortened mean escape latencyand increased number of platform crossings （ P lt;0.05）. The myelinsheathsinthehipocampalCA1regionwererelativelyintact，withcomparativelyregularanduniformarrngementThe myelin loss score indicated a decrease in myelin loss in the hippocampal CA1 region （ P lt;0.05）.The co-expression levels of iNOS and Ibal in the hippocampal CA1 region decreased （P lt;0.05），while those of Argl and Ibal increased （P lt;0.05）. Theprotein expressions of TREM2 and DAP12 in the hippocampus were elevated P lt;0.05）. Compared with the EP-Model group， the EP-EA group rats showed shortened mean escape latency and increased number of platform crossings （ P lt;0.05）. The myelin loss score indicated a decrease in myelin loss in the hippocampal CA1 region P lt;0.05）. The co-expression levels of iNOS and Ibal in the hippocampal CA1 region decreased （ P lt;0.05），while those of Argl and Ibal increased （ P lt;0.05）. The protein expressions of TREM2 and DAP12 in the hippocampus were elevated （ P lt;0.05）. Conclusion Exercise pretreatment combined with electroacupuncture can improve learmingand memory functions inVDrats，andtheunderlying mechanismmayinvolveregulatingtheTREM2andDAP12 proteinexpressions，promoting thepolarizationof hippocampalmicrogliatowardtheM2phenotype，enhancingthephagocytic capacity of M2 microglia，and facilitating the clearance of myelin debris.

[Keywords]vasculardementia;microglialpolarization;exercisepretreatment;electroacupuncture；triggeringreceptor expressed on myeloid cells 2; DNAX-activating protein 12

血管性癡呆（vasculardementia，VD）是一種由各種腦血管危險(xiǎn)因素引起的以認(rèn)知障礙和記憶喪失為特征的進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病，在全球癡呆病例中僅次于阿爾茨海默病。目前，對(duì)VD的防治尚無特效處理方式，西醫(yī)治療血管性癡呆缺乏特效藥，現(xiàn)有藥物僅能延緩病情進(jìn)展，且部分患者對(duì)藥物反應(yīng)不佳，還可能產(chǎn)生不良反應(yīng)。隨著腦卒中存活率的不斷提高和人口老齡化的加劇，VD患病率逐年上升，且發(fā)病隱匿，早期不易被發(fā)現(xiàn)，其發(fā)生發(fā)展給患者家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)，WHO已將其防治列為21世紀(jì)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域重點(diǎn)研究項(xiàng)目之—[45]。

VD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及中樞神經(jīng)炎癥、興奮性氨基酸毒性、氧化應(yīng)激等病理改變。其中，慢性腦血流灌注不足后海馬組織缺血缺氧誘發(fā)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)已成為VD發(fā)病的關(guān)鍵因素之一。作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的免疫細(xì)胞，小膠質(zhì)細(xì)胞具有介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)、吞噬凋亡壞死細(xì)胞和髓鞘碎片等功能，在VD中被激活8-]。在特定的環(huán)境或者誘導(dǎo)條件下，小膠質(zhì)細(xì)胞可在M1型和M2型之間進(jìn)行功能切換，M1型對(duì)VD起加劇作用，M2型對(duì)VD起保護(hù)作用[12-13]，故促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞由M1型向M2型轉(zhuǎn)化有望成為VD 治療的新靶點(diǎn)。最新的神經(jīng)免疫學(xué)研究顯示，髓系細(xì)胞觸發(fā)受體 2（triggering receptor expressed onmyeloidcells2，TREM2）與銜接蛋白DNAX激活蛋白12（DNAX-activating protein of 12kDa ，DAP12）結(jié)合參與小膠質(zhì)細(xì)胞表型變化、功能改變和吞噬作用等多種病理生理過程，已成為影響VD發(fā)病的重要靶點(diǎn)[14-15]

臨床上，VD目前尚未建立國際認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)化治療方案，但該病卻是癡呆類疾病中唯一可以預(yù)防的類型[4。其預(yù)防和早期干預(yù)具有重要意義，與中醫(yī)學(xué)“治未病\"理念中“未病先防，既病防變\"的思想契合。對(duì)VD病理機(jī)制及治療方法的研究，既往多聚焦于對(duì)VD發(fā)病后的治療，僅體現(xiàn)“既病防變\"的單一階段。而將“未病先防，既病防變”思想貫穿，動(dòng)態(tài)持續(xù)觀察VD演變過程和治療效果，尚未見相關(guān)研究。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，電針可通過多種途徑促進(jìn)VD大鼠認(rèn)知功能的恢復(fù)，改善學(xué)習(xí)記憶能力；運(yùn)動(dòng)預(yù)處理亦可預(yù)防及延緩VD的發(fā)生發(fā)展[16-20]。但兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)VD的治療效應(yīng)，及與海馬小膠質(zhì)細(xì)胞極化的關(guān)系尚不清楚。本研究旨在觀察運(yùn)動(dòng)預(yù)處理結(jié)合電針對(duì)VD大鼠海馬組織中小膠質(zhì)細(xì)胞極化、TREM2蛋白和DAP12蛋白表達(dá)的影響，探討運(yùn)動(dòng)預(yù)處理結(jié)合電針可能發(fā)揮的腦保護(hù)作用機(jī)制，為VD的臨床防治策略提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

6＼～8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠90只，體質(zhì)量為180～200g ，購自斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004]，于中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。室溫 24～26°C ，相對(duì)濕度50%～70% ， 12h/12h 明暗交替環(huán)境，自由攝食，適應(yīng)性喂養(yǎng) 3d 將90只大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法均分為非運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組和運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組，運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組進(jìn)行4周無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練結(jié)束后，將非運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組（Sham組）模型組（Model組）和電針組（EA組），運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組大鼠隨機(jī)均分為運(yùn)動(dòng)預(yù)處理假手術(shù)組（EP-Sham組）運(yùn)動(dòng)預(yù)處理模型組（EP-Model組）和運(yùn)動(dòng)預(yù)處理電針組（EP-EA組），每組15只。本實(shí)驗(yàn)所有操作均符合中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)要求并經(jīng)批準(zhǔn)（審批號(hào)：HNUCM21-2310-14）。

1.2 主要試劑及儀器

2% 戊巴比妥鈉（批號(hào)：P3761，西格瑪奧德里奇生化科技有限公司）；羅克沙爾堅(jiān)牢藍(lán)（luxolfastblue，LBF）染色試劑盒（批號(hào)：PKM0320，武漢普美克生物技術(shù)有限公司）；一氧化氮合酶（inducibleni-tric oxide synthase，iNOS）抗體、精氨酸酶1（arginase1，Arg1）抗體、離子鈣結(jié)合適配器分子1（ionizedcal-ciumbindingadaptormolecule1，Ibal）抗體、酪氨酸信號(hào)放大熒光染料、DAP12抗體（批號(hào)：AF02914、AF01565、AF301643、AFIHC024、AFW14794，艾方生物科技有限公司）；TREM2抗體（批號(hào)：510482，成都正能生物技術(shù)有限責(zé)任公司）； β -actin抗體（批號(hào)：66009-1-Ig，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）。

Morris水迷宮系統(tǒng)（型號(hào)：MT-200，成都泰盟公司）； 0.35mm×13mm 華佗牌悅臻無菌針灸針、華佗牌電針治療儀（型號(hào)：平柄針、SDZ-I，蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；脫水機(jī)、包埋機(jī)（型號(hào)：JT-12P、JB-P5，武漢俊杰電子有限公司）；切片機(jī)（型號(hào)：JJQ-P3016，上海徠卡儀器有限公司）；化學(xué)發(fā)光凝膠成像儀（型號(hào)： ChemiDoCXRS+ ，上海伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司）；超純水儀（型號(hào)：ZWM-WLS1-20，美國密理博公司）。

1.3模型制備方法

手術(shù)前禁食 ^12h 、禁水 ⁴h ，采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性雙重結(jié)扎法制備VD大鼠模型[2]。 2% 戊巴比妥 0.3mL/100g 腹腔注射麻醉，麻醉后消毒備皮，先后于頸正中線左右旁開 0.5cm 切口，鈍性分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，以4-0縫合線分別于近心端與遠(yuǎn)心端行雙重結(jié)扎，從中間剪斷，縫合皮膚前在傷口處給予青霉素抗感染。手術(shù)期間動(dòng)作應(yīng)輕柔，避免過分牽拉迷走神經(jīng)而影響呼吸。Sham組分離頸總動(dòng)脈但不結(jié)扎，其余操作與Model組一致。術(shù)中保持無菌環(huán)境并進(jìn)行倫理關(guān)懷，術(shù)后及時(shí)將大鼠置于電熱毯上保持體溫直至蘇醒。術(shù)中或術(shù)后因造模而致大鼠死亡缺失，重新進(jìn)行模型制備補(bǔ)充入組。

成模標(biāo)準(zhǔn)：造模4周后，所有大鼠行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，分別計(jì)算出Sham組大鼠逃避潛伏期平均值（A）和Model組大鼠逃避潛伏期平均值（B），算出B與A的差值并與B比較得出比值（C），若 C? 20% ，即為造模成功[1

1.4干預(yù)方法

1.4.1運(yùn)動(dòng)預(yù)處理干預(yù)方法 （1）運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組：造模前，訓(xùn)練大鼠在桶壁光滑的水桶中進(jìn)行無負(fù)重游泳訓(xùn)練，水溫為（31±2） C ，水深超過大鼠身長(zhǎng)，游泳訓(xùn)練分為適應(yīng)期和訓(xùn)練期（適應(yīng)期為3d，分別游泳 10，20，30min ;訓(xùn)練期持續(xù)4周，每周5d，每天30min^[17，22]， ；游泳后，將大鼠用熱風(fēng)機(jī)吹干并放回籠中；在游泳訓(xùn)練期間，嚴(yán)密觀察大鼠游泳狀態(tài)以防溺水并定時(shí)清理水桶中的大鼠糞便。（2）非運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組：造模前，將大鼠放入 5cm 淺水中， 30min 后將大鼠用熱風(fēng)機(jī)吹干并放回籠子中，與運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組相同的時(shí)間和條件飼養(yǎng)。

1.4.2電針干預(yù)方法課題組前期研究顯示，運(yùn)動(dòng)預(yù)處理組VD大鼠造模后3＼～7d為腦血流量恢復(fù)高峰期[。因此，造模后第7天開始進(jìn)行電針干預(yù)。EA組和EP-EA組選擇百會(huì)、大椎及雙側(cè)腎俞，定位參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》23]。大鼠進(jìn)行俯臥位捆綁，四肢固定于鼠板上，針刺穴位消毒，以 0.35mm×13mm 一次性無菌針灸針斜刺百會(huì) 2mm ，直刺大椎 5mm 及雙側(cè)腎俞 3mm 。連通SDZ-Ⅱ型華佗牌電針儀，左腎俞與右腎俞分別與百會(huì)和大椎連接1組電極。刺激參數(shù)為疏密波，頻率 10Hz/50Hz ，以大鼠針刺局部出現(xiàn)輕微抖動(dòng)為宜（ 1～2mA ）[19-20]。其余組以同等方法抓取、捆綁。各組每次干預(yù) 30min ，每天1次，每周6次，連續(xù)干預(yù)4周。

1.5 觀察方法及檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力所有大鼠于運(yùn)動(dòng)預(yù)處理前、運(yùn)動(dòng)預(yù)處理后和電針干預(yù)后采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。在水池正上方安裝小動(dòng)物定位追蹤攝像頭，記錄大鼠游泳軌跡與時(shí)長(zhǎng)。水迷宮實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)部分：（1）定位航行試驗(yàn)（5d）：每天在固定時(shí)間內(nèi)將大鼠面向池壁按順時(shí)針方向依次從I＼～Ⅳ象限中點(diǎn)入水，以 內(nèi)大鼠從入水到在平臺(tái)停留3s的時(shí)間作為逃避潛伏期，若大鼠在 2min 內(nèi)未找到平臺(tái)，則人為引導(dǎo)其上平臺(tái)并停留 10s ，則該大鼠的逃避潛伏期為 120s ，以第3＼～5天的平均耗時(shí)作為最終逃避潛伏期。（2）空間探索實(shí)驗(yàn)（1d）：第6天撤平臺(tái)，記錄大鼠 內(nèi)穿越目標(biāo)象限平臺(tái)的次數(shù)。

1.5.2標(biāo)本采集與處理于最后1次Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)后第2天完成各組大鼠取材。每組隨機(jī)取6只大鼠腹腔注射 2% 戊巴比妥鈉（ （0.3mL/100g） 麻醉，于冰上迅速分離并采集雙側(cè)海馬組織，迅速裝入凍存管中，液氮暫存后置于 -80‰ 冰箱低溫保存，用于Westernblot檢測(cè)。另隨機(jī)取3只大鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈采血后，迅速斷頭取全腦組織，使用 4% 多聚甲醛進(jìn)行灌注固定，石蠟包埋后進(jìn)行切片（厚度約 4μm ），60°C 烘烤1h備用，用于LBF和免疫熒光雙標(biāo)染色。1.5.3LBF染色檢測(cè)觀察大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘脫失水平按LBF染色試劑盒說明書進(jìn)行脫蠟、染色、脫水后封片，置于光學(xué)顯微鏡下觀察海馬CA1區(qū)髓鞘脫失情況。組織切片髓鞘脫失評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)22：0分，未見髓鞘損傷；1分，偶見髓鞘損傷；2分，輕度少量散在分布脫髓鞘改變中度；3分，較大片區(qū)域髓鞘脫落；4分，嚴(yán)重大面積髓鞘受損。

1.5.4免疫熒光雙標(biāo)染色檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)iN-OS、Arg1與Iba1共表達(dá)水平取上述石蠟?zāi)X切片經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)和封閉后，分別滴加一抗鼠抗iNOS抗體（1：2000）、鼠抗Arg1（1：3000）、兔抗Iba1（1：100），4℃孵育過夜，分別滴加相應(yīng)的二抗。用酪氨酸信號(hào)放大熒光染料進(jìn)行標(biāo)記顯色，在熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。

1.5.5Westernblot法檢測(cè)海馬TREM2、DAP12蛋白表達(dá)水平每組隨機(jī)取6只大鼠的海馬組織，加入裂解液及研磨鋼珠于組織勻漿機(jī)中勻漿，于冰上裂解 30min ，離心取上清液，使用BCA試劑盒檢測(cè)蛋白濃度并配制上樣緩沖液，蛋白變性、SDS-PAGE電泳、濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜， 5% 脫脂奶粉室溫封閉 2h ，一抗4℃冰箱搖床孵育過夜，二抗室溫孵育 2h ，最后利用ECL發(fā)光顯影液在顯影儀上成像。使用ImageJ軟件分析各條帶灰度值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用SPSS25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用GraphpadPrism10.0進(jìn)行繪圖。符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)用“ ”表示。多組間比較若滿足正態(tài)性和方差齊性采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用LSD檢驗(yàn)；若方差不齊，用TamhaneT2檢驗(yàn)；若不符合正態(tài)分布時(shí)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)。不同時(shí)間點(diǎn)重復(fù)測(cè)量資料若滿足正態(tài)性、方差齊性和球?qū)ΨQ性采用重復(fù)測(cè)量方差分析；若不滿足球?qū)ΨQ性則采用Geenhouse-Geisser法或者Lower-bound法進(jìn)行調(diào)整。均以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力比較

組間比較發(fā)現(xiàn)，不同分組之間大鼠的平均逃避潛伏期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （F=24.11，Plt;0.05） ，不同時(shí)間點(diǎn)的變化趨勢(shì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （F=5.761，Plt; 0.05），兩者不存在明顯交互作用（ F=2.821，Pgt;0.05） ;不同分組之間大鼠的穿越平臺(tái)次數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （F=31.225，Plt;0.05） ，不同時(shí)間點(diǎn)的變化趨勢(shì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （F=1.649，Pgt;0.05） ，兩者不存在明顯交互作用 ^′F=2.591，Pgt;0.05） 。

運(yùn)動(dòng)預(yù)處理前后，各組大鼠平均逃避潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ （Pgt;0.05） 。電針干預(yù)后，與Sham組比較，Model組大鼠平均逃避潛伏期延長(zhǎng)、穿越平臺(tái)次數(shù)減少（ （Plt;0.05） 。與EP-Sham組比較，EP-Model組大鼠平均逃避潛伏期延長(zhǎng)、穿越平臺(tái)次數(shù)減少 （Plt;0.05） 。與Model組比較，EA組、EP-Model組和EP-EA組大鼠平均逃避潛伏期縮短、穿越平臺(tái)次數(shù)增多 （Plt;0.05） 。與EP-Model組比較，EP-EA組大鼠平均逃避潛伏期縮短、穿越平臺(tái)次數(shù)增多（ Plt;0.05） ，EA組大鼠平均逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Pgt;0.05） 。詳見圖1—3。

2.2各組大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘脫失情況比較

Sham組和EP-Sham組髓鞘完整，LFB染色較為均勻且排列緊致；Model組完整髓鞘數(shù)量明顯降低，海馬脫髓鞘表現(xiàn)為藍(lán)色背景下片狀淡染區(qū)，其中可見髓鞘組織海綿狀空泡樣改變嚴(yán)重，小膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見大量髓鞘碎片；EP-Model組、EP-EA組和EA組大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘較為完整，排列較為整齊和均勻。髓鞘脫失組織學(xué)評(píng)分顯示：與Sham組比較，Model組大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘脫失增多（ Plt; 0.05）；與Model組比較，EA組EP-Model組和EP-EA組大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘脫失減少（ （Plt;0.05） ；與EP-Sham組比較，EP-Model組大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘脫失增多（"_Plt;0.05）"；與EP-Model組比較，EP-EA組大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘脫失減少 （Plt;0.05） ，EA組大鼠海馬CA1區(qū)髓鞘脫失差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Pgt;0.05） 。詳見圖4—5。

注：與Sham組比較， ^*Plt;0.05 ;與Model組比較， ^?Plt;0.05 ；與 EP-Sham組比較， ^*Plt;0.05 ;與EP-Model組比較， ^ΔPlt;0.05， 0

2.3各組大鼠海馬CA1區(qū)iNOS、Arg1與Iba1共表 達(dá)水平比較

與Sham組比較，Model組大鼠海馬CA1區(qū)中iNOS與Iba1共表達(dá)水平增加（ Plt;0.05） ，Arg1與Ibal共表達(dá)水平減少 （Plt;0.05） 。與Model組比較，EA組、EP-Model組和EP-EA組大鼠海馬CA1區(qū)中iNOS與Iba1共表達(dá)水平減少（ Plt;0.05 ），Arg1與Iba1共表達(dá)水平增加（ Plt;0.05） 。與EP-Sham組比較，EP-Model組大鼠海馬CA1區(qū)中iNOS與Iba1共表達(dá)水平增加（ （Plt;0.05） ），Arg1與Ibal共表達(dá)水平減少（ Plt; 0.05）。與EP-Model組比較，EP-EA組大鼠海馬CA1區(qū)中iNOS與Ibal共表達(dá)水平減少（ （Plt;0.05） ，Arg1與Iba1共表達(dá)水平增加（ （Plt;0.05） ；EA組海馬CA1區(qū)中iNOS與Iba1共表達(dá)水平和Arg1與Iba1共表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Pgt;0.05 ）。詳見圖6—8。

Fig.8Comparison of the co-expression levels of iNOS，Arg1 and Ibal in the hippocampal CA1 region of ratsin each group

注：與Sham組比較， ^*Plt;0.05 ；與Model組比較， ^?Plt;0.05 ；與EP-Sham組比較， ^*Plt;0.05 ；與EP-Model組比較， ^ΔPlt;0.05 9

2.4各組大鼠海馬組織TREM2、DAP12蛋白表達(dá)比較

與 Sham組比較，Model組大鼠海馬TREM2、DAP12蛋白表達(dá)下降 （Plt;0.05） 。與EP-Sham組比較，EP-Model組大鼠海馬TREM2、DAP12蛋白表達(dá)下降 （Plt;0.05） 。與Model組比較，EA組、EP-Model組和EP-EA組大鼠海馬TREM2、DAP12蛋白表達(dá)升高 （Plt;0.05） 。與EP-Model組比較，EP-EA組大鼠海馬TREM2、DAP12蛋白表達(dá)升高（ Plt;0.05 ）;EA組大鼠海馬TREM2、DAP12蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ）。詳見圖9—10。

3討論

VD是由多種腦血管病變?cè)斐傻哪X實(shí)質(zhì)損傷，主要臨床癥狀為學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能減退24，給家庭和社會(huì)帶來巨大的負(fù)擔(dān)，成為亟須解決的公共衛(wèi)生問題。作為目前唯一可以預(yù)防的癡呆類型，大量研究表明，有氧運(yùn)動(dòng)可以通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、促進(jìn)神經(jīng)再生、抑制氧化應(yīng)激等，改善VD的發(fā)生發(fā)展[I7，25-26]。運(yùn)動(dòng)預(yù)處理是指在疾病發(fā)生前進(jìn)行適度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，激活個(gè)體內(nèi)在自我修復(fù)與適應(yīng)能力，預(yù)防VD大鼠認(rèn)知功能下降，屬于中醫(yī)學(xué)“治未病\"中“未病先防\"的范疇。

臨床治療中，VD屬于中醫(yī)學(xué)“癡呆病\"范疇，針灸是本病主要的中醫(yī)療法，電刺激亦是廣泛應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療方式。已有研究表明，電針具有調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)、抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡和促進(jìn)腦血液循環(huán)等重要作用[27-29]。歷代醫(yī)家認(rèn)為，“病變?cè)谀X，首取督脈”，因而本病多從督脈論治。本課題組結(jié)合臨床療效、文獻(xiàn)研究以及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以百會(huì)、大椎、腎俞為本研究干預(yù)腧穴。其中，百會(huì)為三陽五會(huì)之所，針刺百會(huì)具有醒神開竅、升陽固脫等效果[30。大椎為諸陽之會(huì)，以百會(huì)、大椎相配，具有回陽救逆、疏通氣血、平衡陰陽之效。中醫(yī)理論認(rèn)為，腎藏精，精生髓，髓充腦，VD與腎密切相關(guān)，故腎俞為臨床治療VD的常用穴位。針刺百會(huì)、大椎、腎俞能有效抑制腦梗死患者血清中促炎因子的表達(dá)，保護(hù)腦組織細(xì)胞，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)3。前期研究已證實(shí)，電針百會(huì)、大椎、腎俞可改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能[9-20]。研究發(fā)現(xiàn)，VD患者早期電針介入可減少腦缺血損傷，提高患者的認(rèn)知功能3。且課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)預(yù)處理后的VD大鼠第3＼～7天為造模腦血流量恢復(fù)高峰期[1。因此，本研究選取造模后第7天作為電針介入時(shí)間，揭示“治未病\"中“既病防變\"早期介入的重要性。

本研究采用小切口雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性雙重結(jié)扎法制備VD模型，具有生理病理模型穩(wěn)定、手術(shù)死亡率低等特點(diǎn)[2，是較為理想的VD模型。電針干預(yù)后，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Model組大鼠平均逃避潛伏期延長(zhǎng)、穿越平臺(tái)次數(shù)減少，提示VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力下降，雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎術(shù)可制定較穩(wěn)定可靠的VD模型，與課題組先前的研究一致[18.21I;EA組、EP-Model組和EP-EA組VD大鼠與Model組大鼠比較，平均逃避潛伏期縮短、穿越平臺(tái)次數(shù)增多，提示電針、運(yùn)動(dòng)預(yù)處理及其兩者聯(lián)合治療均能減輕VD大鼠腦損傷程度，改善其學(xué)習(xí)記憶能力；且與EA組和EP-Model組比較，EP-EA組平均逃避潛伏期縮短、穿越平臺(tái)次數(shù)增多，提示運(yùn)動(dòng)預(yù)處理和電針的治療效果沒有顯著差異，而運(yùn)動(dòng)預(yù)處理聯(lián)合電針治療能明顯改善VD大鼠的認(rèn)知功能，對(duì)VD大鼠腦缺血的保護(hù)作用更加顯著，效果優(yōu)于單純運(yùn)動(dòng)預(yù)處理和單純電針治療。

現(xiàn)代研究表明，在VD中，全腦或局部腦區(qū)長(zhǎng)期慢性低灌注不足會(huì)引起腦屏障功能障礙、脫髓鞘病變、氧化應(yīng)激及神經(jīng)炎癥反應(yīng)等發(fā)生，最終導(dǎo)致神經(jīng)元損害和相應(yīng)的認(rèn)知功能缺損[6，3-34]。研究發(fā)現(xiàn)，在VD后小膠質(zhì)細(xì)胞獨(dú)立或與其他神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、其他免疫細(xì)胞配合共同發(fā)揮作用，有望成為VD病理機(jī)制研究及臨床研究的關(guān)鍵突破口之[35-36]。作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的主要免疫細(xì)胞，小膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)炎癥的關(guān)鍵調(diào)控者[3。慢性腦缺血發(fā)生后，小膠質(zhì)細(xì)胞被激活為兩種表型：M1型小膠質(zhì)細(xì)胞釋放促炎因子，主要發(fā)揮擴(kuò)大神經(jīng)炎癥范圍及加重神經(jīng)組織損傷等神經(jīng)毒性作用，可通過iNOS標(biāo)記；而M2型小膠質(zhì)細(xì)胞通過釋放抑炎因子和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)，發(fā)揮加速神經(jīng)再生修復(fù)等神經(jīng)保護(hù)作用，促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)，可通過Arg1標(biāo)記[38-39]。此外，M2型小膠質(zhì)細(xì)胞可聚集于損傷部位，迅速吞噬凋亡的神經(jīng)元及髓鞘碎片，為髓鞘再生提供有利的條件[40]。研究表明，M2型小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基與少突膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)可加快少突膠質(zhì)細(xì)胞的分化，而在缺乏M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)基中，少突膠質(zhì)細(xì)胞分化減弱[4。因此，M2型小膠質(zhì)細(xì)胞在髓鞘碎片清除及髓鞘分化成熟的過程中扮演重要角色，是髓鞘再生的關(guān)鍵步驟42]。故在慢性腦缺血后適度對(duì)M1型小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行抑制并且促進(jìn)M2型激活，可有效抑制神經(jīng)炎癥、加速髓鞘碎片的清除，從而促進(jìn)認(rèn)知功能的恢復(fù)[7.43-44]。本研究采用免疫熒光雙標(biāo)染色法評(píng)估VD大鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞極化情況，與Model組比較，EA組EP-Model組和EP-EA組VD大鼠海馬CA1區(qū)中iNOS與小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Iba1共表達(dá)水平減少，Arg1與Iba1共表達(dá)水平增加，提示運(yùn)動(dòng)預(yù)處理、電針及兩者聯(lián)合治療均能促進(jìn)VD模型大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化，其中運(yùn)動(dòng)預(yù)處理聯(lián)合電針較單純運(yùn)動(dòng)預(yù)處理和單純電針治療更能促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化。LBF染色觀察到VD發(fā)生后，大鼠海馬CA1區(qū)存在明顯髓鞘脫失形態(tài)學(xué)改變，髓鞘組織海綿狀空泡樣改變嚴(yán)重，小膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見大量髓鞘碎片，而EP-Model組、EP-EA組和EA組髓鞘較為完整，排列較為整齊和均勻，提示運(yùn)動(dòng)預(yù)處理、電針及兩者聯(lián)合治療均能促進(jìn)VD大鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化，增加對(duì)髓鞘碎片的清除，改善認(rèn)知功能障礙，且聯(lián)合治療的效果最好。

全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)，TREM2基因突變是癡呆的主要危險(xiǎn)因素之一[45]。在VD中，TREM2與DAP12相互作用，可促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化，誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞向髓鞘碎片遷移，提高其吞噬髓鞘碎片的能力[43.46]。HU等[47研究表明，下調(diào)TREM2的表達(dá)可抑制M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬能力，而增強(qiáng)TREM2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可恢復(fù)小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬能力。本研究Westernblot結(jié)果顯示，造模后VD模型大鼠海馬中TREM2、DAP12表達(dá)下降，與既往研究結(jié)果一致[48。運(yùn)動(dòng)預(yù)處理、電針及聯(lián)合治療均可上調(diào)VD大鼠海馬組織中TREM2、DAP12蛋白的表達(dá)，特別是聯(lián)合治療后，TREM2、DAP12蛋白的表達(dá)較單純運(yùn)動(dòng)預(yù)處理、單純電針治療明顯升高，提示運(yùn)動(dòng)預(yù)處理結(jié)合電針可能通過上調(diào)TREM2、DAP12表達(dá)，促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為M2型，提高其吞噬功能，促進(jìn)髓鞘碎片的清除，進(jìn)而減輕腦損傷。

綜上，運(yùn)動(dòng)預(yù)處理結(jié)合電針可改善VD大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，其機(jī)制可能是通過上調(diào)機(jī)體TREM2、DAP12蛋白表達(dá)，促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞極化為M2型，增強(qiáng)M2型小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬功能，促進(jìn)髓鞘碎片的清除。

參考文獻(xiàn)

[1]YANB，LIAO P， CHENGFY，et al. Identification of toll-like receptor2 as a key regulator of neuronal apoptosis in vascular de mentiaby bioinformatics analysis and experimental validation[J]. Experimental Gerontology，2024，193：112464.

[2] WOLTERS FJ，ARFAN IKRAM M. Epidemiology of vascular dementia[J].Arteriosclerosis，Thrombosis，andVascularBiology， 2019，39（8）： 1542-1549.

[3] 李會(huì)婷，譚子虎，周劍杰，等．熟地黃-何首烏藥對(duì)治療血管性 癡呆機(jī)制研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2025，10（4）：1-18.

[4] ALLADI S，KAUL S， MEKALA S. Vascular cognitive impairment： Current concepts and Indian perspective[J]. Annals of Indian Academy of Neurology，2010，13（Suppl 2）： S104-S108.

[5] GU X Z， SHI Z H，LIU S，et al.Incidence and risk factors of dementia and the primary subtypes in northern rural China[J]. Medicine，2021，100（13）： e25343.

[6] DU S Q，WANG X R， XIAO L Y，et al. Molecular mechanisms ofvasculardementia： What can be learned fromanimal models ofchronic cerebral hypoperfusion？[J]. Molecular Neurobiology， 2017， 54（5）： 3670-3682.

[7] TIAN Z M，JI X M，LIU J. Neuroinflammation in vascular cognitive impairment and dementia： Current evidence，advances，and prospects[J]. International Journal of Molecular Sciences，2022，23 （11）： 6224.

[8]HANISCH U K，KETTENMANN H. Microglia： Active sensor and versatileeffector cells in the normal and pathologic brain[J]. Nature Neuroscience，2007，10（11）：1387-1394.

[9] DAVALOS D， GRUTZENDLER J， YANG G，et al. ATP mediatesrapid microglial response to local brain injuryin vivo[J]. Nature Neuroscience， 2005， 8（6）： 752-758.

[10]吳娟，劉沖，張艷.小膠質(zhì)細(xì)胞表面 TREM2受體對(duì)缺血 性腦卒中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制[J].西南國防醫(yī)藥，2021，31（3）：257- 259.

[11]袁曉捧，姜希娟，李悠悠，等．小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)參 與腦缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展[J].中華老年心腦血管病雜志， 2019，21（10）： 1112-1114.

[12] 朱健敏，陳煒，匡龍嬌，等.益肺宣肺降濁方調(diào)控小膠質(zhì)細(xì) 胞極化改善血管性癡呆神經(jīng)炎癥的機(jī)制研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥， 2024，35（5）： 1132-1137.

[13] 馬璐瑤，李彥杰，秦合偉．小膠質(zhì)細(xì)胞極化介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥在 血管性癡呆中的作用機(jī)制[J]．中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)， 2024，40（7）： 907-913.

[14] GRATUZE M， LEYNS C E G， HOLTZMAN D M. New insights into the role of TREM2 in Alzheimer's disease[J].Molecular Neurodegeneration， 2018，13（1）： 66.

[15] JAY TR，VON SAUCKEN VE，LANDRETHG E. TREM2 in neurodegenerative diseases[J].Molecular Neurodegeneration，2017， 12（1）： 56.

[16]陳丹鳳，張泓，謝菊英，等．從“腦病治腸\"探討電針對(duì)血管 性癡呆大鼠腸道菌群及血清 IL-1β及IL-18 的影響[J].針刺研 究，2022，47（3）：216-223.

[17]唐鑫，陳婕，田浩梅，等.不同時(shí)長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)預(yù)處理對(duì)血管性 癡呆大鼠腦血流量及小膠質(zhì)細(xì)胞活化相關(guān)蛋白的影響[J].中國 康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2024，39（1）：15-23.

r10 -1+ 扎法建立血管性癡呆模型探討腦血流量變化規(guī)律及對(duì)血管新 生相關(guān)蛋白的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2023，31（11）：1423- 1430.

[19]鄧暢，鄒瑩潔，張泓，等.電針對(duì)血管性癡呆大鼠血腦屏 障及海馬促炎細(xì)胞因子的影響[J].針刺研究，2022，47（10）：885- 890.

[20]仇蓉蓉，張泓，鄧暢，等.電針對(duì)血管性癡呆大鼠海馬活 性氧-NOD 樣受體蛋白3炎性通路及自噬相關(guān)蛋白的影響[J]. 針刺研究，2022，47（4）：298-304.

[21]譚潔，韓國棟，張泓，等.改良大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎方 式建立血管性癡呆模型的評(píng)價(jià)研究[J].中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2017， 32（3）： 264-268.

[22] 張嘉泳．基于Neurogranin 調(diào)控海馬突觸可塑性探討游泳運(yùn)動(dòng) 改善慢性低灌注腦缺血致空間記憶障礙的機(jī)制[D].福州：福建 中醫(yī)藥大學(xué)，2020.

[23]郭義.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].新世紀(jì)4版.北京：中國中醫(yī)藥出版社， 2016： 170-178.

[24] DENG C J， CHEN H Z， MENG Z Y， et al. Gastrodin and vascular dementia： Advances and current perspectives[J].Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2022， 2022（1）：2563934.

[25] CODD L N， BLACKMORE D G， VUKOVIC J， et al. Exercise reverses learning deficits induced by hippocampal injury by promoting neurogenesis[J]. Scientific Reports，2020，10（1）：19269.

[26] KHERAVI M T， NAYEBIFAR S，ALETAHA S M， et al. The effect of two types of exercise preconditioning on the expressionof TrkB，TNF-α，and MMP2 genes in ratswith stroke[J]. BioMed Research International，2021， 2021（1）： 5595368.

[27]張茜，張闖，張佳音，等.電針對(duì)血管性癡呆大鼠海馬谷 氨酸、鈣離子含量及N-甲基-D-天冬氨酸受體表達(dá)的影響[J]. 針刺研究，2016，41（6）： 509-514.

[28] 陳英華，王浩宇.針刺對(duì)VD 模型大鼠腦組織細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋 白 Caspase-3、NFK-βp65及 PTEN mRNA 表達(dá)水平的影響[J]. 針灸臨床雜志，2019，35（3）：51-55，89.

[29] 劉佩，劉喆，魏居瑞，等.電針對(duì)血管性癡呆大鼠海馬腦 源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子mRNA表達(dá)及學(xué)習(xí)記憶的影響[J].中國康復(fù) 醫(yī)學(xué)雜志，2013，28（9）：822-825.

[30] 張?chǎng)危蠲簦頃匝啵?百會(huì)穴、大椎穴在血管性癡呆治 療中的作用機(jī)制探討[J].遼寧中醫(yī)雜志，2017，44（4）：835-838.

[31]龐勇，李雁，鄒卓成，等.益腎調(diào)督針法對(duì)腦梗塞恢復(fù)期 細(xì)胞因子的影響[J].陜西中醫(yī)，2006，27（2）：213-214.

[32] 昝興淳，唐巍，李斯亮，等.針刺治療血管性癡呆的作用機(jī) 制及針刺方法研究進(jìn)展[J].甘肅中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，35（6）： 97-100.

[33] SEO JH， MIYAMOTO N， HAYAKAWA K，et al. Oligodendrocyteprecursors induce early blood-brain barrier opening after whitematter injury[J]. Journal of Clinical Investigation，2013， 123（2）： 782-786.

[34] ZHAO Z， NELSON A R， BETSHOLTZ C， et al. Establishment and dysfunction of the blood-brain barrier[J].Cell，2015，163 （5）：1064-1078.

[35] IADECOLA C，ANRATHER J. The immunologyof stroke：From mechanisms to translation[J].Nature Medicine，2011，17（7）：796- 808.

[36] ZHUD，PENG T， ZHANG Z W，etal. Mesenchymal stem cells overexpressing XIST induce macrophage M2 polarization and improve neural stem cell homeostatic microenvironment，alleviating spinal cord injury[J]. Journal of Tissue Engineering， 2024，15：20417314231219280.

[37] WITCHER K G，EIFERMAN D S， GODBOUT JP.Priming the inflammatory pump of the CNS after traumatic brain injury[J]. Trends in Neurosciences，2015，38（10）：609-620.

[38] GUO HY，DUMY，YANGY，etal.Spl regulates the M1 polarization of microglia through the HuR/NF-kB axisafter spinal cord injury[J]. Neuroscience，2024， 544： 50-63.

[39] GUO JB，TANG X W，DENG P，et al. Interleukin-4 from curcumin-activated OECsemergesasa central modulator for increasing M2 polarization of microglia/macrophage in OEC anti-inflammatory activity for functional repair ofspinal cord injury[J].Cell Communicationand Signaling，2024，2（1）：162.

[40] BAO Z，HAO JQ，LIY H，et al. Promotion of microglial phagocytosis by tuftsin stimulates remyelination in experimental au toimmune encephalomyelitis[J]. Molecular Medicine Reports， 2019， 20（6）：5190-5196.

[41] WANG JY， WANG JJ， WANG JC，et al. Targeting microglia and macrophages： A potential treatment strategy for multiple sclerosis[J]. Frontiers in Pharmacology，2019，10：286.

[42] CIGNARELLA F，F(xiàn)ILIPELLO F，BOLLMAN B，et al. TREM2 activation on microglia promotes myelin debris clearance and remyelination in a model of multiple sclerosis[J]. Acta Neuropathologica，2020，140（4）： 513-534.

[43] HE Y，AN J，YIN JJ，et al. Ethyl pyruvate enhances spontaneous remyelination by targeting microglia phagocytosis[J]. International Immunopharmacology，2019，77：105929.

[44] YANG Y，ZHAO X Y，ZHU ZR，et al.Vascular dementia：A microglia's perspective[J]. Ageing Research Reviews，2022，81： 101734.

[45] BANDO Y. Roads to formation of normal myelin structure and patho logical myelin structure[J].Advances in Experimental Medicine and Biology，2019，1190：257-264.

[46] DING Z B， HAN Q X， WANG Q， et al. Fasudil enhances the phagocytosis of myelin debris and the expression of neurotrophic factors in cuprizone-induced demyelinating mice [J]. Neuroscience Letters，2021，753：135880.

[47] HU M Y，LIN Y Y，MEN X J， et al. High-salt diet downregulates TREM2 expression and blunts efferocytosis of macrophages afteracute ischemic stroke[J]. Journal ofNeuroinflammation， 2021， 18（1）： 90.

[48] PESHOFF M M，GUPTA P，OBERAI S，et al. Trigering receptor expressed on myeloid cells 2 （TREM2） regulates phagocytosis in glioblastoma[J].Neuro-oncology，2024，26 （5）：826- 839. （本文編輯 匡靜之）