蘆丁改善經前煩躁障礙肝氣郁證抑郁癥狀的機制研究

經前綜合征（premenstrual syndrome，PMS）是指女性在月經周期的黃體期（即月經來潮前7～14 d）出現、月經來潮后自然消失的一系列身體、心理和行為癥狀[1]。其中，經前煩躁障礙（premenstrual dysphoric disorder，PMDD）是PMS的嚴重類型，可引發焦慮、抑郁、易怒等情緒變化以及乳房脹痛、頭痛等身體癥狀，且上述癥狀在黃體期出現，月經來潮1 周后消失[2]。在全球范圍內，有3%～8% 的女性符合PMDD診斷標準，這對其工作和生活造成嚴重影響[3]。Qiao 等[4]基于中醫角度深度剖析認為，PMDD主要分為肝氣郁證和肝氣逆證2 種亞型，其中PMDD肝氣郁證的典型精神癥狀包括精神萎靡、抑郁等。PMDD發病機制復雜且尚不完全明確，涉及卵巢激素學說、中樞神經遞質學說、自主神經系統學說、遺傳學說、心理和社會學說等多個方面[5]。臨床PMDD的治療方法主要包括行為認知療法、卵巢摘除術、藥物療法。認知療法的效果極不穩定，卵巢摘除術對患者身體傷害較大。藥物療法主要包括激素類藥物、五羥色胺再攝取抑制劑等，其中激素類藥物雖可明顯改善PMDD患者的相關癥狀[6]，但長期服用可增加患者乳腺癌和卵巢癌的發生風險[7]；五羥色胺再攝取抑制劑長期攝入會引發頭暈、嗜睡，并會出現停藥反應，副作用明顯[8]。因此，尋找安全、有效的PMDD治療藥物至關重要。

蘆丁又稱為蕓香苷，屬于黃酮類化合物，廣泛存在于蕓香、煙葉、棗、杏、橙皮、番茄、蕎麥等植物中，具有抗炎、抗氧化、抗菌等功效[9]。本課題組前期研究發現，蘆丁能夠減少PMDD肝氣逆證模型大鼠的攻擊行為，改善PMDD肝氣郁證模型大鼠的抑郁癥狀和學習記憶能力障礙[10―11]，但具體機制尚不清楚。現有研究指出，蘆丁可通過減輕神經元損傷來緩解抑郁癥狀[12]，但PMDD與神經元損傷之間的關系以及蘆丁能否通過減少神經元損傷來緩解PMDD肝氣郁證尚未可知。基于此，本研究首先采用網絡藥理學和分子對接技術，預測蘆丁保護神經元、緩解PMDD 肝氣郁證的潛在作用機制和關鍵靶點；再通過構建大鼠模型來評價蘆丁對PMDD肝氣郁證相關癥狀的改善作用，并初步驗證潛在靶點及機制，以期為蘆丁治療PMDD肝氣郁證提供藥理學依據。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括MK-Ⅱ型大鼠發情周期檢測儀（日本Muromachi 公司）、SuperMaze 型動物行為采集分析系統（上海欣軟信息科技有限公司）、7000smz-2型振動切片機（英國Campden 公司）、BX53 型正置熒光顯微鏡（日本Olympus 公司）、SpectraMax i3x 型多功能酶標儀（美國Molecular Devices 公司）、FluorChem M型凝膠成像儀（美國ProteinSimple公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

蘆丁對照品（批號B20771，純度＞98%）購自上海源葉生物科技有限公司；孕酮、雌二醇、苯甲酸雌二醇、戊巴比妥鈉（批號分別為Y0001524、1250008、Y0000852、F20160721，純度分別不低于99%、98%、98%、97%）均購自美國Sigma-Aldrich 公司；鹽酸氟西汀分散片[批號22533A，規格20 mg（以氟西汀計）]購自Patheon France公司；快速高爾基體染色試劑盒（批號PK401）購自美國FD NeuroTech 公司；小鼠腦源性神經營養因子（brainderivedneurotrophic factor，BDNF）酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒、兔抗β-微管蛋白（β-tubulin）抗體、辣根過氧化物酶（HRP）標記的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批號分別為EK0308、BM3877、BA1054）均購自武漢博士德生物工程有限公司；兔抗BDNF 抗體（批號ab108319）購自英國Abcam 公司；鼠抗突觸核蛋白（synuclein，Syn）抗體、兔抗突觸后密度蛋白95（postsynapticdensity protein 95，PSD95）抗體、兔抗酪氨酸激酶受體B（tyrosine kinase receptor type B，TrkB）抗體（批號分別為2644、3450、4603）均購自美國CST公司。

1.3 實驗動物

SPF級雌性未育Wistar 大鼠60 只，體重130～170 g，6～8 周齡，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，生產許可證號為SCXK（京）2021-0006。所有大鼠隨機分籠（每籠5 只）并晝夜顛倒（每天晚上8：00 開燈，早上8：00 關燈）飼養，溫度為22～26 ℃，相對濕度為40%～70%，自由攝食、飲水。本研究方案經山東第一醫科大學附屬中心醫院實驗動物福利倫理審查委員會批準（批準文號JNCHIACUC2021-79）。大鼠均適應性喂養7 d再進行后續實驗。

2 方法與結果

2.1 網絡藥理學分析

以“premenstrual dysphoric disorder”為關鍵詞，檢索GeneCards 數據庫（https：//www.genecards.org/）、OMIM數據庫（https：//www.omim. org/）、TTD 數據庫（http：//bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/），獲得PMDD疾病靶點。通過SwissTargetPrediction 數據庫（http：//www.swisstargetprediction.ch/）、Super-PRED 數據庫（https：//prediction.charite. de/index. php）、SEA 數據庫（https：//sea. bkslab.org/）、PharmMapper 數據庫（https：//lilab-ecust.cn/pharmmapper/index. html）、TargetNet 數據庫（http：//targetnet.scbdd. com/）、DrugBank 數據庫（https：//go. drugbank.com/）等獲取蘆丁的作用靶點。取上述疾病靶點和成分作用靶點，經UniProt 數據庫（https：//www.uniprot.org/）轉換為標準名稱，再導入歐易云生信分析平臺（https：//cloud.oebiotech.com/）以獲取交集靶點并繪制韋恩圖。將交集靶點導入STRING 數據庫（https：//string-db.org/），構建蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網絡，隱藏網絡中無關聯的節點，導出“TSV”文件，并利用Cytoscape 3.10.1 軟件進行可視化展示。以節點度值來評估靶點的重要性，取度值排前5 位以及與神經元損傷相關的靶點作為關鍵靶點。利用歐易云生信分析平臺對交集靶點進行基因本體（gene ontology，GO）功能、京都基因和基因組數據庫（Kyoto Encyclopediaof Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析。

結果顯示，通過GeneCards、OMIM、TTD 數據庫獲得PMDD疾病靶點1 410 個；通過SwissTargetPrediction、Super-PRED、SEA、PharmMapper、TargetNet、DrugBank等數據庫獲得蘆丁作用靶點844 個；取交集獲得PMDD和蘆丁交集靶點60 個。將上述交集靶點導入STRING數據庫，所得PPI 網絡結果顯示，腫瘤壞死因子（tumornecrosis factor，TNF）、單胺氧化酶A（monoamine oxidaseA，MAOA）、TrkB、羥色胺受體2A（hydroxytryptaminereceptor 2A，HTR2A）、BDNF 是核心靶點（節點度值分別為72、65、58、58、56）；此外，神經損傷標志物PSD95、Syn 在PPI 網絡中也較為重要（節點度值分別為26、12）。GO功能富集分析結果（圖1A）顯示，交集靶點的生物過程（biological process，BP）包括化學突觸傳遞、內皮細胞增殖的正向調控等；細胞組分（cellular component，CC）主要涉及突觸后膜、樹突棘密度等；分子功能（molecular function，MF）主要涉及神經遞質受體活性、類固醇結合等。KEGG通路富集分析結果（圖1B）顯示，鈣信號通路、神經活性配體-受體相互作用、神經營養素信號通路、5-羥色胺能突觸信號通路是交集靶點的主要富集通路。

2.2 分子對接

根據網絡藥理學結果，本研究選取關鍵核心靶點TNF、BDNF、TrkB、MAOA、HTR2A 和神經元損傷標志物Syn、PSD95 進行分子對接驗證，具體操作如下：從PDB數據庫（https：//www.rcsb.org）中獲取關鍵靶點的蛋白模型，種屬選擇“人源”；采用Schr?dinger Maestro 12.8軟件的“Protein Preparation Wizard”板塊對蛋白模型的結構進行優化，即對蛋白模型加氫并在優化液體模擬全原子勢場4.0 版力場下分配蛋白模型質子化狀態和形式電荷。從PubChem 數據庫（https：//pubchem. ncbi. nlm.nih. gov/）獲取蘆丁的小分子結構，使用Schr?dingerMaestro 12.8 軟件的“LigPrep”板塊對其進行結構優化，使用“Receptor Grid Generation”板塊定義結合位點，格點的產生均保持默認設置。使用“標準精度打分模式”進行分子對接，對接得分越小表示親和力越大、結合能力越強[13]。結果顯示，Syn、BDNF、TrkB、PSD95、MAOA與蘆丁的分子對接得分分別為－6.099、－5.936、－5.940、－5.887、－3.184 kcal/mol（1 kcal＝4.19 kJ），表明結合能力較強；而TNF、HTR2A與蘆丁無結合位點。

綜合網絡藥理學和分子對接結果可知，蘆丁可以通過作用于核心靶點BDNF、TrkB 和神經損傷標志物PSD95、Syn（結合能均小于－5 kcal/mol）來改善PMDD癥狀。

2.3 動物實驗驗證

2.3.1 動情周期的人工誘導

雌性性成熟大鼠規律的動情周期一般為4 d，分為動情前期、動情期、動情后期、動情間期，其中動情前期、動情后期、動情間期又稱非接受（non-receptive，NR）期，動情期又稱接受（receptive，R）期[14]。由于每只大鼠所處的動情周期不完全一致，且動情周期規律性難以保證，故本研究通過手術摘除大鼠卵巢后統一進行人工激素誘導，以保證所有大鼠動情周期規律保持一致。

大鼠適應性飼養7 d 后，予戊巴比妥鈉麻醉后摘除卵巢。待大鼠恢復7 d，再進行激素誘導，具體誘導方法為：（1）NR 期（動情后期）首日中午12：00，皮下注射0.012 5 μg/μL苯甲酸雌二醇0.04 mL；（2）NR期（動情間期）次日晚上8：00，皮下注射0.012 5 μg/μL 雌二醇0.04mL；（3）NR 期（動情前期）第3 天上午8：00，皮下注射0.012 5 μg/μL 孕酮0.04 mL；（4）R 期不進行任何干預。通過激素連續誘導2 個動情周期，同時于每天下午1：00－3：00 進行陰道電阻篩查（大鼠NR期的陰道電阻值＜3 kΩ，R期的陰道電阻值≥3 kΩ[15]），當連續3 d 出現NR期、1 d 出現R 期時，視為一個規律的周期。篩選至少連續2 個動情周期規律的大鼠進行后續實驗。

2.3.2 造模、分組與給藥

將篩選所得大鼠分為正常組（n＝10）和造模組（n＝50）。采用擇時束縛應激法構建PMDD肝氣郁證大鼠模型，具體操作如下：于NR期，大鼠每天以束縛筒（管狀塑料筒，長20 cm、直徑6 cm）束縛5 h（下午2：00－7：00）。于束縛的第3 個動情周期的動情間期和動情期進行強迫游泳實驗和曠場實驗，作為大鼠造模后NR期和R期的數據。將上述造模后NR期和R期強迫游泳懸浮不動時間的差值從小到大進行排序，剔除差值較小的前30% 大鼠，其余大鼠視為PMDD肝氣郁證模型構建成功[10]，最終篩選出造模成功的大鼠36 只。本研究將造模成功的大鼠隨機分為模型組、氟西汀組（陽性對照）、蘆丁組，每組12 只。每天上午9：00，氟西汀組大鼠灌胃氟西汀2.7mg/kg（以生理鹽水為溶劑，為成人臨床劑量的8 倍）[15]，蘆丁組大鼠灌胃蘆丁8.65 mg/kg（以生理鹽水為溶劑）[11]，正常組和模型組大鼠灌胃生理鹽水，灌胃體積均為10 mL/kg。灌胃2 個動情周期后進行行為學測試。灌胃期間除正常組外的其余各組大鼠均持續進行擇時慢性束縛應激干預。

2.3.3 行為學測試

分別在動情周期的NR、R 期進行行為學評價。在開始給藥的第3個動情周期的動情間期和動情期給藥1 h后進行曠場實驗、強迫游泳實驗和Y迷宮實驗。每只大鼠測試前均進行陰道電阻測試以確定其所處周期。

（1）曠場實驗：曠場實驗箱的長、寬、高分別為50、50、40 cm。將各組大鼠放置在曠場的中央區域，使用動物行為采集分析系統記錄其6 min 內的運動總距離、中央區域運動距離、中央區域停留時間。采用GraphPadPrism 8.0 軟件對數據進行統計分析；實驗數據以x±s 表示，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；檢驗水準α＝0.05（統計方法下同）。

（2）強迫游泳實驗：強迫游泳實驗裝置為高50 cm、直徑20 cm的透明圓筒。曠場實驗結束后，將大鼠放入加有（23±1）℃水的圓筒中，讓其進行6 min 的適應練習。正式實驗時，使用動物行為采集分析系統記錄其開始實驗后2～6 min內的懸浮不動時間。

（3）Y迷宮實驗：Y迷宮箱體由相鄰夾角為120°的3個等長支臂組成。強迫游泳實驗結束后，將大鼠置于Y迷宮任一支臂末端，使用動物行為采集分析系統記錄其8 min 內自由探索的視頻圖像，統計最大輪流次數、順序輪流次數，并計算自發輪流行為得分：自發輪流行為得分＝順序輪流次數/最大輪流次數×100%。

結果（表1）顯示，在NR期和R期曠場實驗中，各組大鼠的運動總距離、中央區域運動距離、中央區域停留時間比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。在NR期強迫游泳實驗中，與正常組比較，模型組大鼠的懸浮不動時間顯著延長（P＜0.05）；與模型組比較，氟西汀組和蘆丁組大鼠的懸浮不動時間均顯著縮短（P＜0.05）。在NR期Y迷宮實驗中，與正常組比較，模型組大鼠的自發輪流行為得分顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，氟西汀組和蘆丁組大鼠的自發輪流行為得分均顯著升高（P＜0.05）。在R期強迫游泳實驗和Y迷宮實驗中，各組大鼠相關指標比較的差異均無統計學意義（P＞0.05）。

2.3.4 樣本采集

行為學測試結束后，分別取正常組NR期和R期大鼠5 只，取模型組、氟西汀組、蘆丁組NR期和R期大鼠6只，予戊巴比妥鈉麻醉后于腹主動脈采血5 mL。血樣靜置30 min 后，于4 ℃下以3 000 r/min離心15 min，取上層血清，于－80 ℃下保存，備檢。采血后，迅速將大鼠斷頭處死，在冰上鈍性分離其全腦和海馬組織，進行高爾基染色；腦海馬組織稱重后，于－80 ℃下保存，備檢。

2.3.5 血清BDNF水平檢測

采用ELISA 法檢測。取“2.3.4”項下各組NR、R 期大鼠血清樣品適量，參照相應試劑盒說明書操作，使用多功能酶標儀檢測其血清BDNF水平。

結果（表2）顯示，在NR期，與正常組比較，模型組大鼠的血清BDNF 水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，蘆丁組大鼠的血清BDNF水平顯著升高（P＜0.05），而氟西汀組大鼠血清BDNF水平無顯著變化（P＞0.05）。在R 期，各組大鼠血清BDNF 水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.3.6 神經元形態觀察與相關指標檢測

采用高爾基染色法觀察。取“2.3.4”項下各組NR、R期大鼠腦組織，洗去表面血液后浸泡于4% 多聚甲醛溶液，固定24 h 后，將腦組織置于高爾基染色液中避光染色14 d，浸泡48 h 后轉移至新的高爾基染色液中，之后每3 d 更換1 次染色液；取出腦組織，依次進行梯度乙醇脫水、二甲苯透明；脫水后使用振動切片機切取100 μm厚的切片，以甘油明膠封片。使用光學顯微鏡觀察其腦海馬組織神經元形態并拍照（神經元呈黑褐色）。采用Image J 軟件統計神經元樹突棘數量和樹突長度，并計算平均每10 μm樹突上的樹突棘密度。

結果（表2、圖2）顯示，在NR期，與正常組比較，模型組大鼠腦海馬組織神經元突觸結構減少，樹突棘密度顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，氟西汀組和蘆丁組大鼠腦海馬組織神經元突觸結構增多，樹突棘密度均顯著升高（P＜0.05）。在R期，各組大鼠腦海馬組織神經元突觸結構相似，其樹突棘密度比較的差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.3.7 相關蛋白表達檢測

采用Western blot 法檢測。取“2.3.4”項下各組NR、R 期大鼠凍存的腦海馬組織適量，勻漿后離心，取上清液；以BCA 法測定蛋白濃度后作變性處理。取變性蛋白，經電泳分離后轉膜，以封閉液于室溫下封閉2 h；用TBST洗膜30 min后，分別加入BDNF、PSD95、Syn、TrkB、β-tubulin一抗（稀釋度分別為1∶1 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000、1∶2 000），于４ ℃下孵育過夜；用TBST洗膜30min 后，加入相應二抗（稀釋度均為1∶5 000），于室溫下孵育2 h；顯色后，于凝膠成像儀下曝光、顯影。使用Image J 軟件，以目的蛋白與內參蛋白（β-tubulin）的條帶灰度值比值表示目的蛋白的相對表達量。

結果（表3、圖3）顯示，在NR期，與正常組比較，模型組大鼠腦海馬組織中BDNF、Syn、TrkB 蛋白的表達均顯著下調（P＜0.05）；與模型組比較，氟西汀組和蘆丁組大鼠腦海馬組織中BDNF、Syn、TrkB 蛋白的表達均顯著上調（P＜0.05）；而各組PSD95 蛋白的表達比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。在R期，各組大鼠上述蛋白的表達比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

PMDD特發于育齡期女性。隨著社會節奏的加快，其發病率呈現逐年升高的趨勢，嚴重影響育齡期女性的身心健康及家庭關系[1]，故研究其病因病機及對癥治療具有重要意義。目前，PMDD的治療手段有限、安全性不佳、患者接受度低，故尋找新的治療策略尤為關鍵。為此，本研究在網絡藥理學、分子對接研究的基礎上，以大鼠為實驗對象，初步探討了蘆丁對PMDD肝氣郁證的干預作用及潛在機制，為該病的治療提供了參考。

3.1 PMDD肝氣郁證大鼠模型的構建

本研究首先通過手術摘除大鼠雙側卵巢+人工注射激素誘導大鼠形成穩定且規律的動情周期，再結合擇時束縛應激制備了PMDD肝氣郁證大鼠模型。隨后，本研究利用曠場實驗、強迫游泳實驗和Y 迷宮實驗評價了NR、R期大鼠的行為學表現，結果顯示，模型大鼠的抑郁樣行為在NR期出現，在R期消失，符合PMDD肝氣郁證軀體和行為癥狀的發作規律，表明造模成功。經蘆丁干預后，PMDD肝氣郁證模型大鼠在NR期的懸浮不動時間顯著縮短，自發輪流行為得分顯著升高，表明其對PMDD肝氣郁證模型大鼠的抑郁癥狀和空間記憶能力障礙有明顯的改善作用。

3.2 PMDD 肝氣郁證的發病機制與海馬神經元損傷有關

研究顯示，PMDD的發生伴隨著神經功能異常及腦區病理改變，主要表現為海馬、杏仁核、前額葉等腦區結構的改變[16―17]。與健康者比較，PMDD患者的海馬皮質密度明顯增加，而海馬旁皮質密度明顯降低[18]。上述研究提供了PMDD發生與神經損傷有關的線索。本研究結合網絡藥理學和分子對接分析發現，蘆丁可能作用于BDNF、TrkB、PSD95、Syn 等靶點，從而緩解PMDD 癥狀。行為學測試結果顯示，NR期PMDD肝氣郁證模型大鼠出現了抑郁癥狀，且空間記憶能力較正常大鼠明顯減弱；進一步的高爾基染色結果顯示，PMDD肝氣郁證模型大鼠腦海馬組織神經元突觸結構減少，樹突棘密度較正常大鼠顯著降低。經蘆丁干預后，上述指標均得以好轉。而R期各組大鼠上述指標均未出現明顯改變。

3.3 蘆丁可通過調控BDNF/TrkB信號通路緩解海馬神經元損傷

BDNF/TrkB 信號通路能夠調控神經元凋亡、支持神經元生長以及調控突觸功能等。研究指出，BDNF可通過與TrkB 結合而激活下游PI3K/Akt、Ras/促分裂原活化的蛋白激酶信號通路，從而抑制神經元細胞的凋亡、促進軸突和樹突的生長[19―20]。BDNF或TrkB 表達下調后，大鼠會出現空間記憶缺陷，海馬組織CA1、CA3 區樹突形態改變、樹突棘密度降低[21]。Syn 與突觸功能、學習記憶能力密切相關，敲除其編碼基因會致學習記憶障礙，上調其表達能改善抑郁樣行為[22]。研究指出，經BDNF/TrkB 信號通路激活的PI3K/Akt、Ras 信號通路可促進Syn mRNA的表達，BDNF/TrkB 信號通路還可增強神經元膜的穩定性和流動性，進而有助于Syn 與膜的結合，維持突觸正常功能[23]。本研究結果顯示，蘆丁可增加NR期PMDD肝氣郁證模型大鼠血清中BDNF水平并上調腦海馬組織中BDNF、TrkB、Syn 蛋白的表達，但以上指標在R期均無明顯變化。

研究指出，BDNF 與PMDD 的發生密切相關。BDNF 能夠調控5-羥色胺的合成、釋放與再攝取[13]。PMDD患者的抑郁、焦慮等情緒癥狀與5-羥色胺水平顯著相關。臨床研究顯示，PMDD 患者黃體期的血清BDNF水平明顯降低[24]。本研究結果也支持這一觀點，即PMDD肝氣郁證模型大鼠NR期的血清BDNF水平較正常大鼠顯著降低，而蘆丁可使其血清BDNF水平恢復正常；此外，大鼠R 期血清BDNF 水平未出現異常。研究指出，BDNF能促進突觸形成，增強神經可塑性[25]。本研究結果顯示，PMDD肝氣郁證模型大鼠腦海馬組織神經元樹突棘密度較正常大鼠顯著降低，提示神經元發生損傷；而蘆丁可回調其樹突棘密度，緩解神經元損傷。可見，蘆丁上述作用的發揮可能與在NR期激活BDNF/TrkB信號通路、促進Syn蛋白表達有關。

PSD95 可控制突觸的傳遞和可塑性，其表達增加可緩解長期抑郁癥狀[26]。研究發現，BDNF/TrkB 信號通路可通過激活下游轉錄因子環磷酸腺苷反應元件結合蛋白來促進PSD95 的表達；該通路還能增強PSD95 和N-甲基-D-天冬氨酸受體的相互作用，從而促進突觸可塑性的形成[27]。但本研究結果顯示，蘆丁對于PSD95 蛋白的表達無明顯影響。研究指出，重度抑郁癥患者相關區域PSD95 和Syn 水平均明顯降低，藥物可通過激活BDNF/TrkB 信號通路來調節上述蛋白的合成，增加其表達[28]；也有研究指出，認知障礙模型大鼠和慢性強迫游泳應激大鼠海馬組織中PSD95 的含量明顯升高[29―30]。可見，PSD95 的表達與抑郁等疾病的關系較為復雜。筆者結合本研究結果推測，蘆丁可能通過激活BDNF/TrkB 信號通路影響Syn 而非PSD95 蛋白的表達，從而發揮改善PMDD肝氣郁證的作用。

綜上所述，蘆丁可緩解PMDD肝氣郁證模型大鼠的抑郁癥狀，增強其空間記憶能力，減少神經元損傷，上述作用可能與該成分激活BDNF/TrkB 信號通路、上調Syn蛋白的表達有關。但本研究存在一定局限性，缺少蘆丁作用于BDNF/TrkB 信號通路的深入驗證，后續還需增加BDNF/TrkB 信號通路抑制劑，以進一步驗證蘆丁的作用機制。