冬櫻花組培快繁技術研究

中圖分類號：S685.99 文獻標志碼：A 文章編號：1002-2910（2025）03-0013-05

Research on tissue culture and rapid propagation technology of Cerasus cerasoides

XULi1，ZHANGBing2，TANYuel，ZONGXiaojuan1， ZENG Peiyuan1，WEI Hairongl （1.ShandongInstituteofomologyai'an，handong2oo，China;.iyueistrictForestryProtectiod DevelopmentCenter，Tai’anCity，Tai'an，Shandong27ooo，China）

Abstract：A rapid in vitro propagation system was successfully established for Cerasus cerasoides（D.Don）Sok.using semi-lignified stem segments as explants.The optimal surface sterilization method involved sequential treatment with 75% ethanol for 30s and 5% sodium hypochlorite solution for 10min .Theinitial culturemediumwasMS basal medium supplemented with 1.0mg/L 6-benzylaminopurine（6-BA）and 0.1mg/L indole -3- butyricacid（IBA）.The optimal proliferation medium was MS containing 0.3mg/L 6-BAand 0.2mg/L IBA，yielding a multiplication coefficient of 4.6.Rooting was optimally induced in half-strength MS medium supplementedwith 0.5mg/L α-naphthalene acetic acid（NAA），resulting in 84% rooting rate with an average of 6.24 roots per plantlet.The survival rate of transplanting using perlite + peat soil + vermiculite （volume ratio 1：3：2 ）substrateis 92%

Key words：Cerasus cerasoides;proliferation culture;rooting cultivation; transplant

冬櫻花[Cerasuscerasoides（D.Don）Sok.]為薔薇科（Rosaceae）櫻屬（Cerasus）落葉喬木，又名冬海棠，小陽春，因冬季開花而得名，是中國野生櫻花資源中唯一在冬季開花的櫻花種類[1]。冬櫻花是云南特有的野生鄉土樹種，抗逆性強，耐干旱，耐貧瘠，具有很強的適應性，主要分布于高海拔地區的山坡、山谷、溪邊和叢林[2]。除了作為觀賞樹種，還可用作櫻屬植物的砧木，嫁接親和力強，成活率高，因此，冬櫻花是一種十分優良的櫻屬種質資源[3]。

目前，關于冬櫻花的研究主要集中在冬櫻花群落學特征、生態地理學、開花習性、物候及觀賞期和繁殖等方面[4-6]。冬櫻花的繁殖主要是通過種子繁殖，也可以通過捍插、嫁接等無性方式進行繁殖[7-10]。但是受種子本身質量，播種條件以及管理情況的影響，種子繁殖存在發芽率低和出苗不整齊的問題。捍插繁殖受季節限制，同時需要大量的枝條，還存在捍插技術難度大等問題，不能短時間內獲得大量苗木，無法滿足市場需要。與傳統繁殖方式相比，組培快繁技術不受季節影響，能縮短繁育周期，提高繁殖系數，滿足生產推廣的需求，而且能確保冬櫻花的穩定遺傳。盡管冬櫻花的應用價值極高，但關于冬櫻花組培快繁的相關研究較少。僅有的報道是以冬櫻花的花梗、花托、子房、葉片和花苞等為外植體，研究了激素濃度對外植體出愈率的影響以及抑制褐化的措施[11]。筆者以冬櫻花半木質化莖段為外植體，研究了不同培養基和植物生長調節劑在冬櫻花繼代培養以及生根培養過程的作用，建立了冬櫻花的穩定組培快繁體系，可為冬櫻花的進一步開發利用提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗材料為冬櫻花半木質化新梢，一般于4月取自金牛山試驗示范基地。

1.2試驗方法

1.2.1外植體消毒處理 春季剪取冬櫻花的半木質化新梢，去除葉片，剪成單芽莖段作為外植體，用洗潔精攪拌浸泡 20min ，在自來水下沖洗 40～60min 轉移至超凈工作臺，用 75% 酒精處理 30s 、無菌水沖洗，再用 5% 的次氯酸鈉分別浸泡 5min 、 8min 、10min 和 15min ，無菌水清洗5～6次，用無菌濾紙吸干莖段表面水分，將帶芽莖段接種到初代培養基，誘導腋芽萌發。

1.2.2初代培養初代培養基以MS為基本培養基，添加 糖和6.5g/L 瓊脂， pH 值為5.8。根據櫻屬植物常用初始培養基，預實驗證明該激素配比下，腋芽分生組織能夠啟動分化，苗端發育正常。培養溫度為（ 25± 1） C ，光/暗周期 16h/8h. 。28d后統計其污染數和成活數，計算污染率和成活率。

污染率 （%）= （污染外植體數/接種外植體數）×100

成活率 （%）= （成活外植體數/接種外植體數）×100 。

1.2.3繼代培養基篩選誘導出的腋芽長 1.0cm 以上時，剪取長勢一致的莖尖，分別以MS、WPM和QL為基礎培養基，添加 0.5mg/L6-BA 、 30g/L 蔗糖和 6.5g/L 瓊脂， pH 值為5.8，共計3個處理，每處理15株，重復3次。培養條件同初代培養， 28d 后觀察統計植株的生長表現及增殖系數。

1.2.4植物生長調節劑篩選以篩選出的MS為繼代基本培養基，添加不同濃度的6-BA和IBA。6-BA濃度設置為 0.2， 0.3， 0.5， 0.8mg/L ，IBA濃度設置為0.05、0.1、 0.2mg/L ，共12個處理，每個處理20株，重復3次。培養條件同初代培養，培養28d后調查組培苗的增殖情況，并記錄其生長狀況，計算增殖系數。

增殖系數 Σ=Σ 增殖總株數/接種株數。

1.2.5生根培養基篩選選取長勢一致的繼代苗，以1/2MS為基本培養基，分別添加不同濃度的IBA（0.5、 1.0mg/L ）和NAA（0.5、 1.0mg/L ）誘導生根。共4個處理，每個處理5瓶，每瓶接種6株，每處理重復3次。25d后統計生根情況，計算生根率、平均生根數和平均根長。

生根率 （%）= （生根株數/接種株數） ×100 平均生根數 總根數/生根植株總數；

平均根長（cm） Σ=Σ 總根長/植株總根數

1.2.6煉苗與移栽將不定根長度約 2cm 的健壯冬櫻花組培苗，進行煉苗馴化。移栽時，用鑷子輕輕取出組培苗，清水洗掉根部培養基，然后多菌靈500倍液蘸根處理 2～3min ，移栽到滅菌的育苗基質中，覆膜保濕。育苗基質為珍珠巖 + 草炭土 + 蛭石（體積比 1：3：2 ）。生長30d統計植株成活株數，計算成活率。

成活率 （%）= （成活株數/移栽株數） ×100

1.3 數據統計及分析

數據采用Excel和SPSS20統計軟件進行數據的統計分析和差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1初代苗的建立

在溫室播種冬櫻花種子，獲得實生苗（圖1-A），然后取冬櫻花半木質化莖段接種到初代培養基（圖1-B），2周后腋芽萌發（圖1-C），4周后腋芽伸長形成綠梢（圖1-D）。MS培養基添加1.0mg/L 6-BA 和 0.1mg/L IBA適合冬櫻花莖段腋芽啟動和分化，新芽無玻璃化現象。

由圖2可知，次氯酸鈉不同消毒時間對冬櫻花的莖段污染和成活率有明顯的影響，隨著次氯酸鈉消毒時間的延長，污染率降低，成活率呈先上升再下降的趨勢。冬櫻花外植體最佳消毒方法為先用75% 的酒精消毒30s，再用 5% 次氯酸鈉消毒 10min 。

2.2.1基本培養基對繼代培養的影響分析了MS、WPM和QL3種基本培養基對冬櫻花組培苗繼代培養的影響，結果顯示以MS為基本培養基增殖系數最高，組培苗成簇增殖，但有些植株弱小。以QL和WPM為基本培養基，增殖系數較低，在QL培養基上組培苗葉片綠色，長勢好，而在WPM培養基上組培苗生長緩慢，植株矮小。因此選擇增殖系數高的MS培養基為基本培養基進行后續試驗。

2.2.2不同生長調節劑對增殖培養的影響以MS為基本培養基，當IBA濃度一定時，隨著6-BA濃度增加，增殖系數呈下降趨勢，6-BA濃度為 0.2mg/L 或 0.3mg/L 時，增殖系數比 0.5mg/L 或 0.8mg/L 的高，表明添加低濃度6-BA（ 0.2mg/L 或 0.3mg/L ）的MS培養基有利于冬櫻花增殖，高濃度的6－BA會抑制其增殖（表1）。當6-BA濃度一定時，添加IBA有助于增殖，增殖系數隨IBA濃度增加呈現上升趨勢。6-BA濃度為 0.2mg/L ，IBA為0.05、0.1、 0.2mg/L 時，增殖系數分別為 2.63，2.50，4.40 06-BA濃度為 0.3mg/L ，IBA為 0.05，0.1，0.2mg/L 時，增殖系數分別為1.90、4.20、4.60（表1）。選擇適宜濃度配比的6-BA和IBA，可以提高冬櫻花增殖系數和改善其健壯程度。綜上，冬櫻花適宜的增殖培養基為 MS+0.3mg/L6-BA+0.2mg/L IBA，植株生長健壯，葉片較大，顏色綠色。

2.3不同生根培養基對冬櫻花組培苗生根的影響

冬櫻花增殖組培苗在含IBA或NAA的1/2MS生根培養基上均能生根。添加IBA時的主根較長，且能產生側根，但生根率和生根數都不高（圖3-A），IBA濃度為 0.5mg/L 和 1.0mg/L （圖3-B）時生根率和生根數均無明顯差異。添加NAA時，冬櫻花組培苗的生根率和生根數優于添加IBA的培養基（表2）。NAA濃度為 0.5mg/L 時，生根率最高為 84% ，根粗壯（圖3-C）；當NAA濃度增加到1.0mg/L 時，生根率下降，根較短，且根部出現愈傷組織（圖3-D）。綜合分析生根率、生根數和根的生長狀況，冬櫻花的最適生根培養基為1/2MS添加 0.5mg/LNAA 。

2.4移栽成活情況

選用基質珍珠巖 + 草炭土 + 蛭石（體積比 1：3： 2）時，移栽成活率為 92% ，且移栽苗生長健壯，葉片綠色，生長狀況良好。

3小結與討論

櫻花具有重要的觀賞價值和經濟價值，全世界約有150種，主要分布在北半球溫暖地區的中國及東北亞等地[12]。隨著櫻花產業的發展，櫻花組培快繁技術日益受到人們的關注。中國櫻花的組培快繁取得成功的有高盆櫻桃[13]，迎春櫻和華中櫻的優良品系[14]，天津野生山櫻花[15]，御殿場櫻[16]，郁金櫻[17]，福建山櫻花[18]，鐘花櫻[19]等。盡管櫻花的組培快繁研究取得了較大進展，但目前關于冬櫻花的組培快

繁還沒有成功的報道。

組織培養建立無菌體系外植體的處理至關重要。春季萌發新長出的半木質化莖段表面微生物少，選擇半木質化莖段作為外植體能夠減少污染。但半木質化莖段比較幼嫩，消毒時間的選擇比較關鍵，太長容易受傷，太短消毒不徹底。本研究對4個消毒時間進行比較，發現先用 75% 的酒精消毒 30s ，再用 5% 次氯酸鈉消毒 10min 效果最佳。

植物組織培養常用的培養基有MS、WPM、DKW和QL等。在櫻花組織培養中，MS是應用較為廣泛的培養基。御殿場櫻、郁金櫻、染井吉野櫻、山櫻花和紅花高盆櫻不定芽增殖均適合采用MS為基本培養基[16，17，20]，迎春櫻、華中櫻和喜馬拉雅櫻花增殖宜采用 WPM^[14，21] 。本研究對MS、WPM和QL培養基進行比較，以MS培養基誘導冬櫻花增殖效果較好。

生長調節劑類物質對植物的生長發育起著至關重要的作用。通過調整生長調節劑的種類、濃度和配比，可調控植物的生長發育進程。櫻屬植物常用的生長調節劑有6-BA、IBA、NAA、TDZ和GA3等[22]。不同基因型的櫻花對細胞分裂素的敏感性存在差異，郁金櫻宜采用6-BA，濃度 2.0mg/L^[17] ，御殿場櫻和鐘花櫻宜采用6-BA，濃度3.0mg/L[16，19]。本研究中較高濃度 6-BA（0.5，0.8mg/L ）不利于冬櫻花增殖培養，低濃度6-BA（0.2、0.3mg/L ）可獲得較高的增殖率，表明冬櫻花對6-BA較敏感，高濃度6-BA會抑制冬櫻花增殖。這與陳劍勇關于河津櫻[23]、李水根關于喜馬拉雅櫻花[21]的研究結果一致，采用低濃度的6-BA更利于不定芽增殖。此外添加IBA可以促進冬櫻花增殖，隨著IBA濃度增加，增殖系數增加。冬櫻花適宜的增殖培養基為 MS+0.3mg/L6-BA+0.2mg/LI BA。

IBA和NAA是誘導木本植物形成不定根的常用生長調節劑。較低濃度的IBA和NAA配合使用可以促進天津野生山櫻花不定根的形成[15]。本研究以 1/2MS 為基本培養基，選擇不同濃度的NAA或IBA進行冬櫻花組培苗的生根試驗，結果發現使用NAA生根的效果優于IBA， 0.5mg/L NAA生根效果最好，組培苗的生根率最高，生根苗最健壯。生根苗移栽成活率 92% 。

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