細胞蠟塊技術在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的應用

[摘要] 目的 探討細胞蠟塊（cell block，CB）技術在甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid cancer，PTC）診斷中的應用。方法 回顧性選取2023年2月至2024年12月于鄭州大學附屬洛陽中心醫院診治的甲狀腺結節患者86例，患者術前均接受超聲引導下細針穿刺活檢，穿刺后標本分別進行細胞涂片（cell smear，CS）和CB病理檢查。以術后病理為金標準，評估CS、CB、BRAF^V600E基因檢測及聯合檢測在PTC術前診斷中的應用價值。結果 納入86例患者，術后病理診斷PTC 42例，良性病變44例。CB術前診斷PTC的敏感度（73.81%）、特異性（97.73%）、陽性預測值（96.88%）、陰性預測值（79.63%）、準確率（86.05%）均顯著高于CS。Kappa一致性檢驗結果顯示，CB病理結果與術后病理結果的一致性優于CS。受試者操作特征曲線表明CB診斷PTC的曲線下面積（area under the curve，AUC）顯著高于CS（0.858 vs. 0.743，Z＝2.391，P＝0.017）。CB聯合BRAF^V600E基因檢測可進一步提高術前診斷效能，其與術后病理結果的一致性（Kappa值＝0.837）優于其他檢查方法，且AUC（0.918）顯著高于其他檢查方法。結論 CB在PTC術前診斷中具有重要的臨床應用價值，其診斷效能顯著優于CS，進一步聯合BRAF^V600E基因檢測可顯著提高術前診斷的準確率。

[關鍵詞] 甲狀腺乳頭狀癌；超聲引導下細針穿刺活檢；細胞涂片；細胞蠟塊；BRAF^V600E基因檢測；診斷

[中圖分類號] R736.1" """"[文獻標識碼] A """""[DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2025.25.010

Application of cell block technique in the diagnosis of papillary thyroid carcinoma

WANG Yanpei¹， CHEN Haiyan¹， LI Junhong²， LIU Yifei¹， ZHAO Wenyu¹， HE Liang³， ZHANG Yanfang¹

1.Department of Endocrinology， Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University， Luoyang 471099， Henan， China; 2.Department of Pathology， the Second Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology， Luoyang 471099， Henan， China; 3.Department of Breast and Thyroid Surgery， Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University， Luoyang 471099， Henan， China

[Abstract] Objective To explore the application of cell block （CB） technology in the diagnosis of papillary thyroid carcinoma （PTC）. Methods A total of 86 patients with thyroid nodules who were treated at Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University from February 2023 to December 2024 were retrospectively selected. Before the operation， all patients underwent ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy. After the biopsy， the specimens were respectively subjected to cell smear （CS） and CB pathological examinations. Using postoperative pathology as the gold standard， the clinical application value of CS， CB， BRAF^V600E gene detection， and combined detection in the preoperative diagnosis of PTC was evaluated. Results A total of 86 patients were included. Among them， 42 cases were diagnosed as PTC by postoperative pathology， and 44 cases were benign lesions. The sensitivity （73.81%）， specificity （97.73%）， positive predictive value （96.88%）， negative predictive value （79.63%）， and accuracy （86.05%） of CB in the preoperative diagnosis of PTC were significantly higher than those of CS. The Kappa consistency test results showed that the consistency between CB pathological results and postoperative pathological results was better than that of CS. Receiver operating characteristic curve analysis indicated that the area under the curve （AUC） of CB was significantly higher than that of CS （0.858 vs. 0.743， Z＝2.391， P＝0.017）. Furthermore， the combination of CB and BRAF^V600E gene detection further improved preoperative diagnostic performance， with a consistency with postoperative pathological results （Kappa＝0.837） superior to other examination methods， and an AUC （0.918） significantly higher than other examination methods. Conclusion CB has significant clinical application value in the preoperative diagnosis of PTC， with diagnostic performance significantly superior to CS. Further combination with BRAF^V600E gene detection can significantly improve preoperative diagnostic accuracy.

[Key words] Papillary thyroid carcinoma; Ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy; Cell smear; Cell block; BRAF^V600E gene detection; Diagnosis

甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲狀腺癌最常見的病理類型，占80%以上^[1]。大多數PTC患者預后良好，但部分具有高侵襲性，早期即可發生頸部淋巴結轉移或甲狀腺外侵犯，嚴重影響患者預后，因此PTC的早期診斷具有重要的臨床意義^[2]。大多數PTC起病隱匿，術前診斷主要依賴超聲、超聲引導下細針穿刺活檢（ultrasound- guided fine needle aspiration biopsy，US-FNAB）及基因檢測等方法^[3]。國內外指南明確指出US-FNAB具有微創、經濟、報告迅速及準確率高等特點，是術前診斷PTC的金標準^[4-5]。目前，臨床常用的細胞病理學檢查方法包括細胞涂片（cell smear，CS）和液基細胞學（liquid-based cytology，LBC）檢查。CS操作便捷，但受操作者影響較大，涂片人員的技術影響涂片質量；標本內富含血液，遮蓋異常細胞，增加閱片及病理診斷的難度；同時，無法充分利用標本^[6]。研究顯示CS的不合格率高達34%^[7]。與CS相比，LBC可充分收集穿刺標本，具有細胞分布均勻、染色背景干凈等優勢，但對組織形態結構的保留效果欠佳^[8]。細胞蠟塊（cell block，CB）技術充分結合CS和LBC技術的優點，具有標本利用率高、細胞形態清晰、染色背景干凈及組織結構保留良好等優勢。CB技術不僅能為細胞病理學診斷提供更加完整的信息和清晰的形態結構，在標本量充足的情況下，還可用于免疫組織化學檢測及分子檢測等輔助檢測手段^[9-10]。此外，研究表明BRAF^V600E基因檢測對診斷PTC具有高度特異性，但敏感度相對較低^[11]。術前US-FNAB聯合BRAF^V600E基因檢測可有效降低漏診率，顯著提高診斷準確率。本研究旨在探討CB技術對PTC術前診斷的效能，并進一步探討CB技術聯合BRAF^V600E基因檢測在PTC術前診斷中的臨床應用價值。

1 "資料與方法

1.1 "研究對象

回顧性選取2023年2月至2024年12月于鄭州大學附屬洛陽中心醫院診治的甲狀腺結節患者86例。納入標準：①年齡18～80歲；②術前行US-FNAB；③于本院行甲狀腺手術，術后病理為PTC或甲狀腺良性腫物；④均行BRAF^V600E基因檢測。排除標準：①既往有甲狀腺手術史；②合并其他系統惡性腫瘤。本研究經鄭州大學附屬洛陽中心醫院倫理委員會審批通過（倫理審批號：LWLL-2025-03-10-03）。

1.2" 方法

1.2.1" US-FNAB" 根據《甲狀腺結節和分化型甲狀腺癌診治指南（第二版）》^[4]對符合穿刺標準的患者行US-FNAB。在超聲引導下將穿刺針刺入目標結節，到達結節中心后反復提拉穿刺針完成取材。每個結節穿刺2針：第1針標本用于制備CS，將標本快速推至載玻片上，取另一載玻片均勻推開后置于95%乙醇溶液中固定；第2針標本用于制備CB，將標本推至含1ml 95%乙醇溶液中固定，應用細胞蠟塊制備試劑盒（購自濟南天燦醫療科技有限公司）制備CB，具體步驟：①標本3000轉/min離心10min后傾倒上清液；②將細胞與試劑A（含微量甲醛、海藻酸及其鈉鹽的水溶液）按1∶1混合；③按1∶10加入試劑B（含氯化鈣的水溶液），混勻后使用吸管吹打，形成絮狀沉淀后捏成團塊；④濾紙包埋后放入包埋盒，95%乙醇浸泡10min以上；⑤在全封閉組織脫水機中進行脫水、透明與浸蠟，用石蠟包埋機制備成CB，常規切片后行蘇木精-伊紅染色（hematoxylin and eosin staining，HE染色）。

1.2.2 "BRAF^V600E基因檢測" 采用北京雅康博公司人BRAF基因突變檢測試劑盒對穿刺洗脫液進行基因檢測，將BRAF^V600E基因檢測結果陽性定義為BRAF^V600E基因突變。

1.3 "細胞病理學診斷標準

依據甲狀腺細胞病理學Bethesda報告系統（the Bethesda system for reporting thyroid cytopathology，TBSRTC）^[12]進行細胞病理學診斷，本研究將TBSRTC Ⅰ～Ⅳ類結節定義為良性結節，Ⅴ、Ⅵ類結節定義為惡性結節。

1.4" 統計學方法

采用SPSS 26.0軟件對數據進行統計分析。以術后病理結果為金標準，計算CS、CB、BRAF^V600E基因檢測及聯合檢測的敏感度、特異性、陽性預測值、陰性預測值、準確率，Kappa一致性檢驗比較各種檢查方法結果與術后病理的一致性，繪制受試者操作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC曲線）計算各種檢查方法的曲線下面積（area under the curve，AUC），Delong檢驗比較各組AUC有無統計學意義。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2" 結果

2.1" CS及CB在術前診斷PTC中的應用價值

2.1.1" CS與CB鏡下病理結果對比" CB鏡下可見細胞分布均勻、結構清晰、染色效果好、核質對比分明、可保留組織學結構；CS鏡下細胞分布欠均勻、數量有限、細胞擁擠重疊、細胞核及核仁模糊。圖1為同一患者US-FNAB的病理結果，其CB病理結果與術后病理結果一致。

2.1.2" CS和CB術前診斷PTC的診斷效能 "術后病理診斷PTC 42例，良性病變44例。CB術前診斷PTC的敏感度（73.81%）、特異性（97.73%）、陽性預測值（96.88%）、陰性預測值（79.63%）、準確率（86.05%）均高于CS，且Kappa一致性檢驗結果顯示CB病理結果與術后病理結果的一致性（Kappa＝0.719，Plt;0.001）優于CS（Kappa＝0.487，Plt;0.001），見表1。ROC曲線表明，CB診斷PTC的AUC大于CS，且兩者的AUC比較差異有統計學意義（0.858 vs. 0.743，Z＝2.391，P＝0.017），見圖2。

2.2 "細胞病理學檢查聯合BRAF^V600E基因檢測在術前診斷PTC中的應用價值

本研究在對穿刺標本采用CS和CB兩種細胞病理學檢查的同時，完善BRAF^V600E基因檢測，聯合診斷中任何一種檢查方法為陽性即診斷PTC。結果顯示CB聯合BRAF^V600E基因檢測可進一步提高術前診斷的敏感度、陰性預測值、準確率；Kappa一致性檢驗結果顯示，CB聯合BRAF^V600E基因檢測結果與術后病理結果的一致性（Kappa＝0.837，Plt;0.001）優于其他檢查方法，見表2。ROC曲線表明，CB技術聯合BRAF^V600E基因檢測的AUC最大，為0.918，診斷效能最佳，見圖3。

3" 討論

甲狀腺結節是內分泌系統最常見的疾病，其中7%～15%為甲狀腺癌^[13]。PTC是甲狀腺癌最常見的病理類型，總體預后良好，但部分具有侵襲性，此類患者術后復發率較高，遠期預后不良^[14]。因此，PTC的早期診斷對減少二次手術、改善患者預后具有極其重要的臨床意義。

US-FNAB是術前診斷PTC的金標準^[15]。然而，傳統的CS及LBC技術存在諸多局限性，如細胞分布不均、背景干擾大、標本利用率低等，限制其在臨床中的應用。近年來，CB技術因其在細胞形態學和組織結構保留方面的獨特優勢逐漸受到關注。目前，CB技術已廣泛應用于肺癌、乳腺癌、淋巴瘤等疾病的篩查與診斷，但在PTC術前診斷的臨床應用仍相對有限^[16-17]。

本研究結果表明CB在PTC術前診斷中的敏感度、特異性、陽性預測值、陰性預測值、準確率及Kappa一致性檢驗結果方面均顯著優于CS。ROC曲線分析顯示CB的AUC顯著高于CS，提示CB對PTC術前診斷的優越性。然而，CB也存在一定的局限性。首先，CB操作相對復雜，需要專門的設備和試劑盒，增加成本和操作難度。其次，CB的敏感度雖然高于CS，但仍有一定的漏診率，尤其在結節體積較小或結節內血流豐富的情況下。因此，未來需進一步優化CB技術的操作流程，提高其敏感度。

然而，由于細針穿刺及人工涂片等因素的影響，US-FNAB后仍有13%的結節性質無法明確，分子檢測成為重要的補充手段^[18]。在眾多與PTC相關的基因突變中，BRAF^V600E是最常見的基因突變^[19]。本研究結果顯示CB聯合BRAF^V600E基因檢測可顯著提高術前診斷的敏感度、陰性預測值及準確率，表明聯合檢測可有效彌補單一檢測方法的局限，進一步提高診斷效能。同時，Kappa一致性檢驗及AUC也進一步證實CB聯合BRAF^V600E基因檢測具有最高的診斷效能。這一發現為PTC的術前精準診斷提供新的臨床依據。

綜上，CB及BRAF^V600E基因檢測在PTC術前診斷中具有極其重要的臨床應用價值。未來可進一步探索CB技術在其他類型甲狀腺癌中的應用，通過多學科合作和技術創新，進一步提高甲狀腺癌的早期診斷準確率，改善患者預后。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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