牛病毒性腹瀉/黏膜病的流行病學(xué)特征及綜合防控策略研究

牛病毒性腹瀉/黏膜病是由牛病毒性腹瀉病毒感染引發(fā)的一種接觸性、傳染性疾病，不同年齡和不同抗病能力的牛群受到病毒入侵之后，表現(xiàn)出來的臨床癥狀會存在一定差異性，大多呈現(xiàn)急慢性感染，導(dǎo)致牛群出現(xiàn)嚴(yán)重的繁殖障礙、免疫功能抑制和生長發(fā)育遲緩的現(xiàn)象，會給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。近年來，隨著牛養(yǎng)殖規(guī)模的逐漸擴大，牛病毒性腹瀉/黏膜病已經(jīng)成為全球范圍內(nèi)牛養(yǎng)殖中最常見的疾病之一，并隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷向前推進和對外貿(mào)易的不斷發(fā)展，該種病例的數(shù)量也呈現(xiàn)出逐年增加的趨勢，注重做好病毒性腹瀉/黏膜病的科學(xué)防范，對更好地保障牛養(yǎng)殖業(yè)的現(xiàn)代化發(fā)展具有十分重要的現(xiàn)實意義。本文主要結(jié)合實際工作經(jīng)驗，探討了牛病毒性腹瀉/黏膜病的流行病學(xué)和相應(yīng)的防控措施，希望對更好地提高該類疾病的防控成效、降低感染率有所幫助。

一、牛病毒性腹瀉/黏膜病的病原學(xué)

牛病毒性腹瀉/黏膜病（BovineViralDiarrhea Mucosal Dis-ease，簡稱BVD-MD）是由牛病毒性腹瀉病毒（BovineViral Di-arrheaVirus，簡稱BVDV）引起的一種高度傳染性病毒性疾病，病毒屬于黃病毒科（Flaviviridae）瘟病毒屬（Pestivirus），與其他瘟病毒屬成員如豬瘟病毒（ClassicalSwineFeverVirus，CSFV）有共同的抗原。從病毒形態(tài)來看BVDV病毒粒子為直徑 50～80nm 的球形顆粒，具有囊膜，囊膜表面有 10～12nm 的刺突，內(nèi)含直徑約 30nm 的電子致密內(nèi)核。BVDV主要在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，通過侵入細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并釋放新的病毒粒子，特別是對腸道、呼吸道和生殖道的上皮細(xì)胞。對乙醚、氯仿、胰酶等脂溶性物質(zhì)敏感，耐低溫， 56^°C 可滅活。從病毒的致病機制來看，病毒侵入宿主細(xì)胞后，在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并釋放新的病毒粒子，隨后機體出現(xiàn)嚴(yán)重的病毒血癥，這一環(huán)節(jié)病毒可通過血液和淋巴管進入淋巴組織，導(dǎo)致淋巴組織損害，上皮細(xì)胞變性和壞死及黏膜脫落而形成黏膜糜爛是本病的特征。感染后宿主會產(chǎn)生中和抗體，但免疫力可能不完全，部分感染牛可能形成免疫耐受，導(dǎo)致病毒持續(xù)感染。

二、牛病毒性腹瀉/黏膜病的流行病學(xué)

1、牛病毒性腹瀉/黏膜病的傳染源

牛病毒性腹瀉/黏膜病的主要傳染源包括感染BVD病毒的牛只，尤其是持久感染牛（PersistentInfected，PI牛）。PI牛在胎兒期感染BVD病毒，生下來后終身攜帶病毒，并持續(xù)排毒。除此之外，急性感染牛在感染初期也會大量排毒，是另一重要傳染源，感染牛的分泌物、排泄物、胎盤、胎兒以及污染的飼料、飲水等均可成為傳播媒介。

2、牛病毒性腹瀉/黏膜病的傳播途徑

BVD-MD的傳播途徑主要包括直接接觸和間接接觸。直接接觸主要是通過牛只之間的鼻腔分泌物、唾液、尿液、糞便等進行傳播。間接接觸包括通過污染的飼料、飲水、器具、環(huán)境以及人類操作傳播。此外，BVD病毒還可以通過胎盤傳播，導(dǎo)致胎兒感染，在一些情況下，昆蟲和其他動物也可能成為病毒的機械傳播者。

3、牛病毒性腹瀉/黏膜病的流行季節(jié)

很多養(yǎng)殖場中現(xiàn)實中BVD-MD的流行具有一定的季節(jié)性，通常在春季和秋季較為高發(fā)，這與牛舍環(huán)境、氣候變化以及牛群的密度等因素有關(guān)。春季和秋季的氣溫和濕度適中，病原體更容易在環(huán)境中存活和傳播。此外，牛群在這兩個季節(jié)的頻繁調(diào)動，增加了病毒傳播的機會。夏季和冬季由于外界溫度相對較高，再加上環(huán)境光照充足，病毒在環(huán)境中的存活率較低，流行程度相對較輕。

4、牛病毒性腹瀉/黏膜病的傳播原因

BVD-MD的傳播原因復(fù)雜多樣，其中持久感染牛是BVD病毒的主要傳染源，它們終身排毒，持續(xù)污染環(huán)境和其他牛只。另外，在養(yǎng)殖過程中牛群管理不善，未能及時隔離感染牛、未能采取有效的消毒措施以及未能及時處理病死牛等，都會導(dǎo)致病毒在牛群中迅速傳播。在一些地區(qū)，由于疫苗覆蓋率不高，導(dǎo)致牛群免疫水平低，也很容易發(fā)生BVD病毒感染和傳播。牛舍衛(wèi)生環(huán)境差，飼料和飲水污染嚴(yán)重，病毒也可以通過上述諸多途徑進行進一步的傳播蔓延，同時在污染的環(huán)境當(dāng)中病毒也能夠長時間存在，增加了牛只感染的風(fēng)險。另外，人類在操作過程中，如果未能嚴(yán)格遵守消毒和防疫措施，獸醫(yī)在未消毒的情況下從一個發(fā)病牛場到另一個牛場，可能會帶來病毒傳播的風(fēng)險，成為病毒的傳播媒介。

三、牛病毒性腹瀉/黏膜病的臨床癥狀

急性型潛伏期一般為7～21d，發(fā)病期間患病牛體溫突然升高至 40～42% ，持續(xù)2～3d，精神萎靡，不愿意活動，食欲下降，甚至完全拒食，隨后唇、腭、齒齦、口腔黏膜上出現(xiàn)淺表性爛斑，大量流涎，呼氣惡臭。然后患病牛出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，最初呈水樣，后期帶血和黏液，并排出成片的黏膜，嚴(yán)重脫水，皮膚失去彈性，口鼻部表皮出現(xiàn)爛斑，蹄冠發(fā)炎，趾間壞死和糜爛，跛行，有的患病牛還會出現(xiàn)鼻漏、結(jié)膜炎等。慢性型潛伏期更長，能夠達到21～30d，患病牛的發(fā)熱不明顯，鼻鏡糜爛，眼有分泌物，蹄葉炎，趾間皮膚壞死、糜爛，跛行，并表現(xiàn)出間歇性腹瀉，糞便惡臭，混有蛋清樣白色黏液，或帶血，甚至排出繩索狀的纖維素性管狀物。隨著腹瀉時間的延長病牛高度消瘦，反應(yīng)遲鈍，妊娠牛感染后常發(fā)生流產(chǎn)，或產(chǎn)出先天性缺陷性犢牛，如小腦發(fā)育不全、瞎眼、共濟失調(diào)等。急性型病程從幾天到1個月，發(fā)病率為 2%～50% ，特牛的死亡率可達 90% ，慢性型病程較長，多數(shù)病牛于2～6個月內(nèi)死亡。

四、牛病毒性腹瀉/黏膜病的病理學(xué)變化

牛病毒性腹瀉/黏膜病病理學(xué)變化主要涉及多個器官系統(tǒng)，病死牛口腔打開之后可以發(fā)現(xiàn)口腔、食管和胃腸黏膜出現(xiàn)出血、水腫和糜爛，其中食管黏膜的縱行小糜爛是特征性病變，瘤胃黏膜偶見出血和糜爛，第四胃炎性水腫和糜爛，腸壁水腫增厚，腸淋巴結(jié)腫大，小腸急性卡他性炎癥，空腸、回腸較為嚴(yán)重，盲腸、結(jié)腸、直腸有卡他性、出血性、潰瘍性以及壞死性等不同程度的炎癥。肺部出現(xiàn)大片出血病灶，腎臟包膜下、腎皮質(zhì)多有出血斑變化。淋巴結(jié)腫大，切口外翻，有渾濁液體流出，特征性損害為食道黏膜糜爛，呈大小不等形狀與直線排列。

五、牛病毒性腹瀉/黏膜病的實驗室診斷

1、瓊脂擴散試驗

試驗之前使用具有代表性的OregonC24牛病毒性腹瀉病毒株，在犢牛腎、辜丸（初代或次代）或鼻甲骨細(xì)胞上繁殖，待75% 細(xì)胞出現(xiàn)典型病變時收毒，凍融2次，測定毒價，分裝于小瓶內(nèi)低溫保存。培養(yǎng)細(xì)胞選用犢牛原代腎細(xì)胞、辜丸細(xì)胞、鼻甲骨細(xì)胞或MDBK細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)液是細(xì)胞加入 10% 特牛血清，細(xì)胞維持液為細(xì)胞加入 2%～3% 犢牛血清；血清稀釋液為細(xì)胞中不加血清。瓊脂擴散試驗板是24孔平底帶蓋塑料培養(yǎng)板，新的密封的培養(yǎng)板可直接使用；重復(fù)使用的培養(yǎng)板需經(jīng)重鉻酸鉀清潔液浸泡24h，再依次用自來水和雙蒸水沖洗干凈，烘干，紫外線照射1h備用， 50～200μL 調(diào)節(jié)加樣器。在試驗操作過程中取適量病毒，用細(xì)胞維持液稀釋至適當(dāng)濃度，在24孔塑料培養(yǎng)板上加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液，每孔 100μL ，將細(xì)胞接種在第一、第二和第三排的每個孔中，第四排作為空白對照，將培養(yǎng)板放入37% CO₂ 的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48h，收集培養(yǎng)后的細(xì)胞培養(yǎng)液，分裝到干凈的離心管中， 4^°C 保存?zhèn)溆谩Ｈ∫粋€孔的細(xì)胞培養(yǎng)液，加入第一排的每個孔中，每孔 50μL ，然后用加樣器將病毒抗原加入第二排的每個孔中，每孔 50μL 。最后用加樣器將細(xì)胞培養(yǎng)液加入第三排的每個孔中，每孔 50μL ，注意第四排孔不加任何物質(zhì)，作為空白對照，將培養(yǎng)板放入 的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng) 72h 在第一排的孔中，如果出現(xiàn)明顯的沉淀線，說明細(xì)胞對該病毒株敏感，第二排的孔中出現(xiàn)明顯的沉淀線，說明病毒抗原具有擴散性，在第三排的孔中如果出現(xiàn)明顯的沉淀線，說明細(xì)胞感染了病毒，可以判定為陽性結(jié)果。如果第一排和第二排的孔中均未出現(xiàn)明顯的沉淀線，或者沉淀線不明顯，說明病毒抗原擴散性差或細(xì)胞對病毒不敏感，需要更換病毒株或細(xì)胞進行檢測。

2、RT-PCR檢測

收集疑似感染動物的血液、組織或糞便樣本，使用RNA提取試劑盒提取病毒RNA，驗證RNA質(zhì)量，A260/A280比值應(yīng)在1.8～2.0之間。使用包含引物、探針和反應(yīng)混合物的熒光定量RT-PCR試劑盒，設(shè)計針對BVDV基因組的特異性引物和探針，預(yù)變性 95^°C，5min ，循環(huán) 95^°C，30s;60^°C，30s;72^°C，45s. 共40個循環(huán)，解鎖 95^°C，15s;60^°C，1min 。使用熒光定量PCR儀進行實時監(jiān)測，記錄每個樣本的Ct值（循環(huán)閾值）。如果樣本的Ct值高于陽性對照的Ct值，或者沒有Ct值（無擴增），則判定為陰性，如果樣本的Ct值低于陽性對照的Ct值，則判定為陽性，樣本的Ct值與陽性對照的Ct值相近，需要重復(fù)檢測或進行進一步的實驗驗證。

六、牛病毒性腹瀉/黏膜病的治療措施

目前牛病毒性腹瀉/黏膜病沒有針對性的治療藥物，在對患病牛進行治療過程中，需要根據(jù)牛群的臨床嚴(yán)重程度對病情做出進一步的判定，對于沒有治療價值的牛群，應(yīng)該立即進行淘汰處理，有治療價值的牛群主要實施抗病毒抗菌消炎治療手段，并結(jié)合患病牛的外在癥狀實施對癥治療。抗病毒治療患病牛可以肌內(nèi)注射板藍根注射液，使用劑量為 40mL，1 次用量，必要時可以間隔3～5d再用藥1次，在此基礎(chǔ)上使用鹽酸土霉素進行肌內(nèi)注射治療，預(yù)防繼發(fā)感染，使用劑量為 10mg/kg?bw，2 次/d，連續(xù)使用3d為1個療程。在使用上述藥物進行治療的同時，還需要加強對癥治療，對于腹瀉癥狀較為嚴(yán)重的患病牛可以選擇使用5% 的葡萄糖氯化鈉注射液 500mL ，維生素C注射液 2g，20% 的安鈉咖注射液 20mL 混合之后靜脈注射，強心補液，同時讓患病牛口服白頭翁口服液，每頭牛每次服用 250mL，1 次/d，連續(xù)使用5～7d，達到澀腸止瀉的效果。另外患病牛還可以使用維生素B6注射液和維生素B12注射液，上述兩種藥物的使用劑量分別為 5g 和 2mg 與生理鹽水 500～800mL 混合之后，緩慢靜脈滴注，1次用量，一般按照上述的綜合預(yù)防方案對患病牛進行為期2～3個療程的治療，病情能夠得到很好地控制，但需要注意的是恢復(fù)健康的牛群不能夠和未發(fā)病身體健康的牛群進行混合養(yǎng)殖，應(yīng)該將發(fā)病牛群立即進行育肥淘汰，這樣能夠防范患病牛攜帶病毒持續(xù)向外排出病毒，導(dǎo)致該種疾病在養(yǎng)殖場中周期性地傳播蔓延。

七、牛病毒性腹瀉/黏膜病的預(yù)防措施

1、強化免疫節(jié)奏

疫苗免疫接種是防范該種疾病發(fā)生流行最有效最簡單的手段之一，現(xiàn)階段牛病毒性腹瀉/黏膜病已經(jīng)有了商品化的疫苗，在疫苗免疫接種過程中需要結(jié)合養(yǎng)殖場的發(fā)病情況，實施針對有效的疫苗免疫接種。推薦使用牛病毒性腹瀉/黏膜病滅活疫苗，3月齡以上的健康牛，每頭牛只有 2mL ，并在首次接種21d之后使用同等劑量的疫苗進行第2次強化免疫接種，肌肉注射，免疫期6個月。對于養(yǎng)殖場來講應(yīng)該在每年的春季3一4月和秋季的10—11月分別進行一次疫苗免疫接種，并在接種14～21d之后采集牛群的新鮮血液進行血清抗體檢測，對于多次檢測抗體不達標(biāo)的牛群可以將其作為隱性帶毒牛直接淘汰處理，這樣能夠?qū)崿F(xiàn)對養(yǎng)殖場病毒的有效凈化。

2、規(guī)范檢疫行為

在引進牛群之前，需要詳細(xì)了解牛群的來源地、養(yǎng)殖場的情況、疫病歷史等信息，根據(jù)國家相關(guān)法律法規(guī)，引進牛群需要辦理檢疫審批手續(xù)，向所在地動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)提交申請，并提供牛群來源、數(shù)量、品種、年齡等詳細(xì)信息。正式牛群引進前動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)應(yīng)派遣專業(yè)人員進行現(xiàn)場檢疫，重點檢查牛群的生長發(fā)育、精神狀態(tài)、外貌、排泄物等，觀察是否有異常，對養(yǎng)殖場的衛(wèi)生狀況、防疫設(shè)施、飼料和飲水等進行檢查。現(xiàn)場檢疫后，需要對牛群進行血清學(xué)檢測，主要檢測牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）抗體，如果養(yǎng)殖場未免疫接種滅活疫苗但是牛群中存在BVDV抗體陽性個體，說明牛群曾經(jīng)接觸過BVDV，可能會攜帶病毒，如果養(yǎng)殖場免疫接種了滅活疫苗，當(dāng)抗體水平低下，則表明牛群可能受到病毒入侵，對于血清抗體檢測不達標(biāo)的流程，需要進行病毒分離，以確定是否攜帶活的BVDV，根據(jù)血清學(xué)檢測和病毒分離的結(jié)果，判斷牛群是否攜帶BVDV。如果牛群攜帶病毒，應(yīng)予以淘汰、隔離或進行無害化處理，如果牛群不攜帶病毒，可以辦理引進手續(xù)。引進牛群后，需要進行嚴(yán)格的防疫措施，設(shè)置30d以上的隔離觀察期，并在隔離觀察過程中對牛群進行免疫接種，以確保牛群的健康和防止疫病擴散。

3、嚴(yán)格衛(wèi)生消毒

對于受到牛病毒性腹瀉/黏膜病威脅的養(yǎng)殖場，需要嚴(yán)格落實衛(wèi)生消毒方案，殺滅環(huán)境當(dāng)中殘余的病毒，防范該種病毒大范圍傳播蔓延，在進行消毒處理過程中應(yīng)該堅持全面消毒、分級消毒、定期消毒的原則，對于養(yǎng)殖場的不同環(huán)節(jié)，實施不同的消毒措施。物體表面消毒推薦用 2% 氫氧化鈉溶液或 1% 漂白粉溶液或者使用 0.1% 苯扎溴銨溶液擦拭物體表面。地面消毒可以使用2% 氫氧化鈉溶液或 1% 漂白粉溶液或者 0.1% 苯扎溴銨溶液噴灑地面。空氣消毒使用紫外線消毒燈照射牛舍，每次照射時間為30min ，也可以使用臭氧發(fā)生器進行空氣消毒，每次消毒時間為1h。水源消毒使用氯制劑對水源進行消毒，濃度控制在 0.5～1mg/L 有條件的養(yǎng)殖場可以使用臭氧發(fā)生器對水源進行消毒。員工進入牛場前，需更換工作服、鞋帽，并使用消毒液洗手，員工離開牛場后，需更換衣物，并徹底洗手。在疫病發(fā)生期間，堅持消毒1～2次/d，疫病解除后繼續(xù)進行定期消毒，每周至少2次，并逐漸過渡到常規(guī)消毒方案。牛舍消毒過程中應(yīng)該明確相應(yīng)的操作注意事項，要嚴(yán)格按照消毒操作規(guī)程規(guī)范使用消毒劑，避免過量或不足。消毒環(huán)節(jié)注意通風(fēng)換氣，確保空氣質(zhì)量，同時要認(rèn)識到大多數(shù)消毒劑對人體有一定刺激性，操作時需佩戴防護用品，避免消毒劑與金屬、塑料等物品接觸，消毒劑使用后，需用清水沖洗干凈，避免殘留。

綜上所述，隨著牛養(yǎng)殖規(guī)模逐漸擴大以及廣大消費者對食品質(zhì)量安全的重視度逐漸增加，對畜牧養(yǎng)殖監(jiān)管也日益嚴(yán)格，要求飼養(yǎng)人員在發(fā)展養(yǎng)殖規(guī)模過程中將關(guān)注重點放置在動物疫病的科學(xué)防范方面，要保證整個養(yǎng)殖業(yè)的穩(wěn)定健康發(fā)展。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷推進，牛病毒性腹瀉/黏膜病的防控工作也將得到進一步的加強和完善，通過借助現(xiàn)代化的技術(shù)措施和技術(shù)方案，能夠更加高效更加科學(xué)地開展動物防疫，再加上通過有效的疫苗免疫接種，增強牛群身體抵抗力，從而降低牛病毒性腹瀉/黏膜病的侵染率保證牛養(yǎng)殖安全，為推動牛養(yǎng)殖業(yè)的現(xiàn)代化發(fā)展奠定堅實基礎(chǔ)。

（作者單位：662200云南省紅河州石屏縣畜牧技術(shù)推廣站）