人毛乳頭細胞條件培養液治療斑禿的臨床觀察

鐘白玉 宋志強 楊希川

[摘要]目的：人毛乳頭細胞條件培養液治療斑禿患者的臨床觀察。方法：用人毛乳頭細胞條件培養液治療100例斑禿患者，并分別選擇其中53例和30例作去炎松組和空白組自身對照。結果：人毛乳頭細胞條件培養液組、去炎松組和空白組治愈率分別為75％、51％、10％，有效率分別為97％、72％、30％，人毛乳頭細胞條件培養液組其治愈率和有效率均明顯高于去炎松組和空白組(P＜0．05)。結論：人毛乳頭細胞條件培養液對斑禿患者有明顯的治療作用。

[關鍵詞]人毛乳頭細胞條件培養液：斑禿；治療

[中圖分類號]R758．71 [文獻標識碼]A [文章編號]1008—6455(2007)01—0038－04

研究表明，人毛乳頭凝集成團的特性對其功能的發揮有著重要作用，盡管人們目前對毛發生長周期變化的調控機制仍不清楚，但已經注意到毛囊從生長后期轉變為退行期的過程中，毛乳頭也隨之與毛母質脫離、變小，其周圍的血管也萎縮、退化。這提示毛發生長周期有賴于毛乳頭分泌釋放的一些可溶性生長因子，這些因子可能一方面影響毛乳頭本身，另一方面影響其周圍間質，如血管。在過去的研究中，我們發現凝集性生長的人毛乳頭細胞高表達VEGF，條件培養基培養的非凝集生長人毛乳頭細胞VEGF的表達也明顯高于對照組，這進一步證實了這種推論。我們將人毛乳頭細胞條件培養液(dermal papilla cell conditioned mediumDPCCM)初步應用于臨床，觀察DPCCM對斑禿區毛囊的生物學效應，發現DPCCM對斑禿區毛囊有明顯的促生長作用。我們進一步擴大臨床病例，觀察DPCCM對斑禿患者的臨床治療效果。現報道如下。

1 材料和方法

1．1試劑和材料

1．1．1 0．6％利多卡因生理鹽水溶液：將100ml生理鹽水在無菌環境下用一次性注射器抽出30ml，再用一次性注射器無菌注入2％鹽酸利多卡因溶液30ml。

1．1．2 DPCCM凍干粉：4℃保存，用前每支無菌注入3ml 0．6％利多卡因生理鹽水溶液，使用時皮下多點注射。

1．1．3醋酸曲安奈德注射液(丙酮去炎松)：上海通用藥業股份有限公司，本品為5ml混懸液，內含50mg用效成分，使用前按1：3比例與0．6％利多卡因生理鹽水溶液混勻，使用時皮下多點注射。

1．2方法：DPCCM在通過安全性試驗且經本院倫理委員會討論同意臨床使用，使用前經患者同意并簽署知情同意書。

1．2．1 DPCCM治療組：選擇100例年齡在10～68歲的斑禿患者，用3ml 0．6％利多卡因生理鹽水溶液溶解DPCCM，常規消毒患部皮膚后皮下多點注射，每周1次，共4次，治療完成后觀察2月。

1．2．2去炎松治療組：選擇DPCCM治療組中多發性斑禿患者53例，選擇與DPCCM治療患部距離在2cm以上的患部作為去炎松治療部位：用3ml 0．6％利多卡因生理鹽水溶液溶解1ml去炎松懸液，常規消毒患部皮膚后皮下多點注射，每周1次，共4次，治療完成后觀察2月。

1．2．3空白對照組：選擇DPCCM治療組中多發性斑禿患者30例，選擇與DPCCM距離在5cm以上的患部作為空白自身對照患部，用3ml 0．6％利多卡因牛理鹽水溶液，常規消毒患部皮膚后皮下多點注射，每周1次，共4次，治療完成后觀察2月。

1．3統計方法：SPSS10．0分析軟件：各組間治愈率和總有效率的比較用x²檢驗，P值定為0．05，小于0．05為相差顯著。

2 結果

在DPCCM治療組：在100例斑禿患者中治愈75例，治愈率75％，高于去炎松治療組(x²=9．021；P＜0．05)和空白對照組(x²=40．625；P＜0．05)(圖1)；總有效97例，總有效率97％，高于去炎松治療組(x²＝21．363：P＜0．05)和空白對照組(x²=68．817；P＜0．05)，在治療的過程中，DPCCM治療的斑禿區新生毛發的生長先是呈島狀(圖2)，新生的頭發生長速度快、光澤度好(圖3)；而去炎松治療組的新生頭發則是呈現平原狀生長，頭發生長速度慢(圖4)，新生的頭發干燥無光澤。這可能是兩種藥物的作用的靶點不一樣所致，也有可能是毛發的生長與一定濃度的毛乳頭生長相關蛋白相關，或是與毛乳頭細胞的活力平行。在去炎松治療組：在治療的53例中治愈27例，治愈率51％，高于空白對照組(x²=13．914；P＜0．05)；總有效38例，總有效率72％，高于空白對照組(x²=13．561；P＜0．05)。空白對照組：毛發生K狀況較DPCCM治療組和去炎松組均要差(圖5)，在治療的30例中治愈3例，治愈率為10％，總有效9例，總有效率為30％。

3 討論

毛囊在哺乳動物的整個生命過程中具有周期性生長特性，經歷著生長期、退行期和休止期的周期性變化，毛囊生長周期是生物個體固有的特性。通過對毛囊生長的研究發現：在毛囊生長的調控過程中，其中心環節是上皮－間質的相互作用。毛乳頭是毛囊的主要間充質成分，由一群非常獨特的成纖維細胞所組成，這些細胞產生毛囊生長發育所需的獨特的細胞外基質(extracellular matrix ECM)，毛乳頭細胞ECM的變化與毛囊的生長周期密切相關。因此可以推測：毛乳頭構成了毛囊生長的微環境，毛乳頭細胞通過旁分泌或自分泌的機制發送或接收信號，從而調節毛囊的發育和周期性生長。毛乳頭細胞對毛囊發育和周期性生長調控的影響依賴于與毛母質細胞間的持續和緊密的連接(通過天然的ECM)。將毛囊生長期的毛乳頭植入到無毛皮膚，能在體內誘導毛囊的形成，對于誘導效率而言，毛乳頭與相應表皮細胞間的連續和緊密連接是必要的；事實上，在實驗條件下，毛乳頭如果與生長中的毛囊分離，毛囊的生長即停止：毛乳頭細胞在成熟毛囊生長調控中的重要性，在無毛鼠中也得到了充分的體現，無毛鼠出生時毛發生長正常，但換毛后毛發不再生長，其原因在于毛乳頭的不完整性產生了轉錄因子的缺陷，從而不可逆地改變毛囊周期性生長的能力，最終導致毛囊形態的損害。

斑禿是在不可預見的情況下，在不固定區域非創傷性毛發禿失。其發生范圍可為全身毛發所覆蓋的任意一塊皮膚。斑禿曾被認為是T細胞介導的針對毛囊的器官特異性自身免疫，遺傳因素和環境因素可能是其誘因之一，但其真正誘因目前還不十分清楚。毛乳頭功能障礙可能是斑禿的主要原因，對斑禿的病理觀察可發現脫發區頭皮毛乳頭結構松散，毛乳頭細胞有損傷跡象，提示斑禿中毛乳頭細胞不能合成和分泌一些調節因子，從而引起毛囊退化。從斑禿病人毛囊的毛乳頭細胞培養發現斑禿區毛乳頭細胞培養生長較正常緩慢，且不能像正常細胞刺激角質形成細胞的生長，這是否是由于刺激因子分泌減少或抑制性因子分泌增多所致尚不清楚，我們初步研究表明DPCCM是可明顯改善功能低下的毛乳頭細胞的活。Randall等比較了早禿患者脫發區和非脫發區毛乳頭細胞的生長和培養情況，發現脫發區毛乳頭體積較小，毛乳頭細胞生K緩慢，而細胞形態和凝集特性無明顯變化，而交界處毛乳頭體積正常或稍小，但生長速度與脫發區毛乳頭細胞相似。我們將凝集性生長毛乳頭細胞的培養上清制備成DPCCM凍干粉，用于臨床觀察，來反映毛乳頭生長相關蛋白對休止期毛囊的作用。在DPCCM治療的100例斑禿患者中，除3例無效外其余均有一定療效，這與去炎松治療組比較取得了良好的療效。DPCCM治療組中有61例為復發性斑禿患者且多次臨床治療無效，這61例患者在DPCCM治療后除2例無效外其余均有一定療效，說明DPCCM在治療復發性斑禿上明顯優于患者以前治療所使用過的方法。在DPCCM治療的100例斑禿患者中，我們選擇53例多發性斑禿患者，在同一患者頭部不同的斑禿患部分別應用DPCCM和去炎松，發現DPCCM在治療斑禿時，其促進頭發生長的速度快于去炎松治療組，而且新生毛發在光澤度上也明顯優于去炎松治療組。

毛乳頭細胞通過旁分泌或自分泌所產生的各種信號蛋白在毛囊發育和周期性生長調控中的作用是毛囊研究的一個重要方面。近年來發現了多種在毛囊發育和毛囊周期性生長中起作用的調節因子1，如成纖維細胞生長因子(FGFs)、骨形成蛋白(BMPs)等，這些因子大多來源于毛囊上皮細胞，它們構成了毛囊發育和成年毛囊周期性生長過程中的復雜網絡，尚不能確定其中具有關鍵性作用的因子。但是對毛乳頭細胞自身特異性基因表達在毛囊發育和成年毛囊周期性生長中所起作用的研究少有報道。因此有學者提出，毛乳頭細胞在毛囊發育及其在成年毛囊周期性生長調控中發揮作用的分子機制將足以后毛囊研究的重要內容。我們將DPCCM制備成生物制劑用于治療斑禿患者，發現DPCCM能用效改善斑禿區毛乳頭的分泌功能，改變毛發的生長狀態，使休止期的毛發進入生長期，這說明DPCCM可以促進斑禿區毛發的生長，達到治療斑禿的作用。DPCCM能否促進其它脫發性疾病(如雄激素性禿發)脫發區毛發的生長，這還需在以后的研究中得以驗證。

志謝：本研究得到第二軍醫大學衛生毒理學教研室，第三軍醫大學臨床免疫學教研室，第三軍醫大學西南醫院中心實驗室，第三軍醫大學西南醫院檢驗科的大力支持；本研究同時也得到第三軍醫大學西南醫院皮膚科全體醫技護人員的鼎力幫助，在此對他(她)們的關心和協助表示衷心的感謝!

編輯／張惠娟

注：本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內容請以PDF格式閱讀原文。