一步法ＲＴ－ＰＣＲ檢測柑橘鱗皮病毒

摘 要：柑橘鱗皮病是一種極具破壞性的柑橘病害，廣泛分布于南美及地中海地區。我國目前缺乏對該病害的快速檢測技術。以柑橘鱗皮病毒(CPV)的外殼蛋白基因(CPG)為靶標，初步建立了一步法RT-PCR快速檢測體系，擴增產物與NCBI數據庫中已知CPV CPG的核苷酸序列進行比對，2者序列間同源性超過99％。

關鍵詞：柑橘鱗皮病毒；一步法RT-PCR；檢測

中圖分類號：S666 文獻標識碼：A 文章編號：1009－9980(2007)01－113－02

柑橘鱗皮病毒(Citrus psorosis virus.CPV)屬蛇形病毒屬，是一種多分體單鏈RNA病毒，主要分布于阿根廷、巴西、意大利、西班牙以及美國等國家，對柑橘產業造成十分嚴重的危害”。該病害可以隨種子、苗木等繁殖材料的調運進行遠距離傳播。目前國外對CPV的檢測方法主要有指示植物鑒定、血清學檢測、分子雜交檢測以及反轉最多聚酶鏈式反應(RT-PCR)檢測等。由于目前我國尚無柑橘鱗皮病在田間發生的報道，因此還沒有開展對CPV的深入研究。但是陳國慶等通過指示植物鑒定發現我國從摩洛哥引進的臍血橙可能感染了CPV。目前我國引入大量的國外優良柑橘品種，增大了CPV傳人我國的可能，因此為保護我國的柑橘產業的健康發展，必須盡快建立CPV的快速檢測體系。本研究依據中國農業科學院柑橘研究所保存的CPV毒源初步建立了CPV的一步法RT-PCR快速檢測體系。

1 材料和方法

1．1 材料

實驗于2004年11月將中國農業科學院柑橘研究所脫毒中心保存的來自澳大利亞的柑橘鱗皮病毒源澳鱗A嫁接到上Dweet橘橙，負對照無病材料為Dweet橘橙無病苗；正對照材料來自脫毒中心溫室保存的Dweet橘橙病株。……