山楂總ＤＮＡ提取方法的比較

摘 要：為選擇一種快速、簡(jiǎn)單、有效的山楂總DNA的提取方法，分別應(yīng)用改良CTAB法、改良SDS法和QIAGEN試劑盒法提取山楂幼嫩葉片的總DNA，用紫外分光光度計(jì)、瓊脂糖凝膠電泳和RAPD對(duì)所提取的總DNA進(jìn)行檢測(cè)。QIAGEN試劑盒法簡(jiǎn)單省時(shí)，提取的山楂總DNA產(chǎn)量高、純度高、雜質(zhì)少、DNA碎片少。以該法提取的總DNA為模板進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，譜帶清晰，多態(tài)性、穩(wěn)定性、重復(fù)性好。QIAGEN試劑盒法是較為理想的山楂總DNA提取方法，該法提取的總DNA適用于PCR擴(kuò)增和其他分子生物學(xué)研究。

關(guān)鍵詞：山楂；總DNA；提取方法；RAPD

中圖分類(lèi)號(hào)：S661.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009－9980(2007)01－115－04

山楂是我國(guó)特有的果樹(shù)，栽培歷史悠久，資源十分豐富，果實(shí)和葉片具有藥用價(jià)值。近年來(lái)，關(guān)于山楂的生物學(xué)特性、栽培技術(shù)、分類(lèi)、藥理研究等屢見(jiàn)報(bào)道，但分子生物學(xué)方面的研究極少。提取高質(zhì)量的DNA樣品是進(jìn)行分子生物學(xué)研究的必要前提。山楂葉片含有大量的黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、多酚類(lèi)等次生物質(zhì)，因而具有很高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，但同時(shí)也增加了總DNA的提取難度。本試驗(yàn)對(duì)3種常用的提取植物總DNA的方法進(jìn)行了比較研究，選擇出一種有效的提取、純化山楂總DNA的方法，為進(jìn)一步開(kāi)展山楂的分子生物學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1．l 材料

試材取自沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)山楂國(guó)家種質(zhì)資源圃，其中包括3個(gè)山楂種，分別為彰武山里紅(Crataegusbrettshnederi Zhangwushanlihong)、毛山楂(C.maxi-mowicizii Maoshanzha)和寧安山楂(C.marimowicziiNing’an8hanzha)，以及5個(gè)山楂栽培品種，分別為聶家峪l號(hào)(C.pittnatifisda Niejiayu-1)、銀冶嶺1號(hào)(C.pinnatifida Yinyeling-1)、秋金星(C.pirtrtatifida Qiu-jinxing)、遼紅(C.pinnatifida Liaohong)和西豐紅(C.pinniatifida Xifcnzhong)。于2005年3月取幼嫩葉片，清水沖洗，濾紙吸干后，用MAXI dry Lyo真空濃縮凍干系統(tǒng)凍干，置于-70℃冰柜中貯藏備用。……