白族藥西歸中阿魏酸的含量測定

摘要：目的：建立高效液相色譜法測定白族藥西歸中阿魏酸的含量。方法：色譜柱為Agilent ZORBA SB-C₁₈(4.6×150mm，5μm)，流動相為甲醇：0.1％磷酸水溶液(30:70)，流速為1.0ml／min，檢測波長為320nm，柱溫為30℃。結果：阿魏酸在0.0202～0.202ug范圍內線性關系良好，回歸方程為A=3089.3C+3.8794(r=0.9999)，加樣平均回收率為99.66％，RSD為1.06％。結論：本法操作簡便、準確、重現性好。

關鍵詞：高效液相色譜法；西歸；阿魏酸

中圖分類號；R927.2 文獻標識碼：A

文章編號：1007-2349(2007)12-0029-02

西歸(seselopsis)是傘形科屬植物西藏凹乳芹(Vicatiathibetica deBoiss)的根，凹乳芹屬植物全球約5種，產于印度、巴基斯坦、尼泊爾和中國，在中國主要分布于云南西北部、四川西部及西藏等地，在云南大理有少量栽培。在滇西北及川西，民間用它作中藥當歸的代用品，稱為西歸(大理)、獨腳當歸(馬爾康)。據研究報道西歸中化學成分有阿魏酸、傘形花內酯、佛手柑內酯、芹菜素、胡蘿卜苷等，通過動物實驗證明西歸與人參一樣具有明顯抗疲勞、抗缺氧和耐熱作用，具有較高的開發價值。西歸中有關成分的含量測定未見報道，本實驗采用高效液相色譜法對西歸中阿魏酸的含量進行測定，為進一步建立西歸藥材的質量標準奠定基礎。

1 儀器與試劑

Agilent 1100高效液相色譜儀，包括G1315A／B DAD檢測器，G1313A ALS自動進樣器，Agilent 1100色譜工作站(美國安捷倫科技有限公司)；梅特勒電子天平AE240(瑞士)；SZ-97自動三重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；DZKW-4水浴鍋(上海科析實驗儀器廠)；甲醇(色譜純)、磷酸(分析純)、水(重蒸餾純凈水)、阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所)、西歸直接從產地收集，并由大理學院藥學院生藥學教研室馬曉匡教授鑒定。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBASB—C₁₈(4.6×150mm，5μm)，流動相：甲醇-0.1％磷酸水溶液(體積比為30:70)，流速：1.0ml／min，柱溫：30℃，檢測波長：320nm.進樣量:10ul。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的阿魏酸對照品5.05mg。置50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作為儲備液。

2.3提取溶劑的選擇 精密稱取5份樣品，每份約1g，分別精密加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、乙醚10ml，稱重，超聲提取30min，冷卻補重，按2.1項條件進行測定，結果見表1。

從上表可以看出甲醇提取率最高，故采用甲醇。

2.4提取方法選擇 根據2.3項的結果采用甲醇作提取溶劑，稱取樣品3份，每份約1g，分別用回流提取、超聲提取、索氏提取進行考察，結果見表2。

從上表可以看出回流提取效果最佳，故采用回流提取法。2.5提取時間的選擇根據2.3的結果采用甲醇作提取溶劑，稱取樣品5份，每份約1g，用回流提取法提取1h、1.5h、2h、2.5h、3h，結果見表3。

從上表可以看出2h后，提取率不再發生改變，所以采用2h提取西歸中的阿魏酸比較合適。

2.6供試品溶液的制備 精密稱取研磨成80～100目的西歸試樣1g，于100ml磨口燒瓶中，精密加入甲醇10ml，加熱回流2h，放冷至室溫，甲醇補重，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾.即為供試品溶液。

2.7線性關系的考察 取2.2項中制備好的阿魏酸對照品儲備液2ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋并定容，即得質量濃度為0.0202mg／ml的對照品溶液。按2.1項色譜實驗條件.取0.0202mg／ml的對照品溶液，2、4、8、10、14、16、20u1分別進3次，測定阿魏酸的峰面積值，以進樣量(ug)為橫坐標，色譜峰峰面積為縱坐標作圖，得回歸方程：y=3069.3X+3.8794，r=0.9999，結果表明進樣量在0.0404～0.404ug范圍之間線性關系良好。

2.8精密度試驗和穩定性試驗 精密吸取阿魏酸對照品溶液(0.0202mg／m1)，按選擇的色譜條件連續進樣6次，其峰面積的RSD為0.31％，表明儀器精密度較好。取同一樣品液，每隔1h進樣1次，每次10ul，測定峰面積，結果表明樣品液在6h內穩定(n=6)，阿魏酸峰面積的RSD為1.63％。

2.9重現性試驗 精密稱取烘干至恒重的西歸粉末(100目)5份，每份1g。按“供試品溶液的制備”進行平行提取，在選定色譜條件下測定阿魏酸的含量，RSD為1.80％，分析結果表明重現性較好。

2.10回收率試驗 精密稱取已知含量的西歸粉末(100目)5份，分別精密加入一定量的阿魏酸儲備液，照2.5項下方法操作，進行回收率測定，結果見表4。

2.11樣品的測定 取六批樣品制備成供試液，按上述色譜條件進行分析，按外標法計算阿魏酸的含量。西歸中阿魏酸含量為124.58ug／g(n=2)。西歸與阿魏酸對照品的HPLC色譜圖見圖1。

3 討論

有關西歸的研究報道很少，其化學成分的含量測定均未見報道。本實驗通過提取溶劑、提取方法、提取時間的選擇，確立西歸中阿魏酸的最佳提取條件為10倍量甲醇回流提取2h。

由于西歸中阿魏酸、芹菜素等都含有酚羥基，具有一定酸性，易電離，參照有關文獻，流動相中水相采用0.1％的磷酸水溶液，可以減少拖尾，改善峰形，且分離效果好。本試驗曾用乙腈：水(0.1％磷酸)15:85進行測定，經試驗，以甲醇：水(0.1％磷酸)30:70為流動相時分離效果最佳。

實驗結果表明，該方法可以用于西歸藥材中阿魏酸的含量檢測和質量標準的控制，并且具有操作簡便、靈敏、準確等特點。