黃芪注射液對早期糖尿病腎病纖溶酶原激活物抑制物－１表達的影響

王 宏 孫喜明 程宇甫

摘要：目的 通過檢測黃芪注射液治療前后糖尿病腎病病人血清纖溶酶原激活物抑制物－1(PAI－1)表達的變化，探討其與糖尿病腎臟病變之間的關系，以及黃芪治療糖尿病腎病的機制。方法92例糖尿病病人，根據(jù)尿白蛋白排泄率分為糖尿病無腎病組(45例)與早期糖尿病腎病組(47例)，早期糖尿病腎病組接受黃芪注射液治療，另設23名健康者作為對照組，應用ELISA方法檢測血清PAI－1表達。結果 早期糖尿病腎病病人血清PAI－1表達為(5.51+0.31)μg／mL，較對照組、糖尿病無腎病組明顯升高，使用黃芪注射液治療后，早期糖尿病腎病組血清PAI－1表達降低為(3.41±0.21)μg／mL(P<0.05)；尿白蛋白含量亦由治療前的(152±31)mg／24h降至(34±21)mg／24h(P<0.05)。結論PAI一1在糖尿病腎病的發(fā)病過程中起重要作用，黃蓖注射液治療糖尿病腎病的機制之一可能是通過抑制PAI－1的表達實現(xiàn)的。

關鍵詞：糖尿病腎病；纖溶酶原激活物抑制物－1；黃芪注射液

中圖分類號：R587.1 R289.5 文獻標識碼：B 文章編號：1672-1349(2007)07-0581-02

糖尿病腎病(DN)的發(fā)病是多種細胞因子、生長因子以及激素對高血糖的綜合反應的結果。近年研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎病病人的纖溶酶原激活物抑制物－1(PAI－1)在血漿中濃度有顯著變化，從而提示PAI－1可能參與了DN的發(fā)生與進展。本研究通過觀察黃芪注射液臨床治療前后，早期糖尿病腎病病人血清PAI－1表達的變化，探討其與糖尿病’腎臟病變之間的關系，以及黃芪注射液治療糖尿病腎病的機制。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇我院2005年—2006年糖尿病病人92例，糖尿病元腎病組(NDN組)45例，年齡36歲～71歲(41.5歲±12.7歲)，均符合WHO診斷標準，24h尿微量白蛋白<30mg／24h；早期糖尿病腎病組(DN組)47例，年齡33歲～69歲(45.2歲±14.7歲)，24h尿微量白蛋白30mg／24h～300mg／24h。所有病人既往無急性腎炎、慢性腎炎、泌尿系感染、酮癥及近期使用腎毒性藥物史。另設正常對照組，為23名健康體檢者，年齡31歲～64歲(40.2歲±15.3歲)。

1．2 治療方法 DN組及NDN組病人進入實驗前餐后2h血糖控制在10.0mmol／L以下，凡血壓超過135／85 mmHg(1mmHg=O.133kPa)者給予抗高血壓藥物治療(用鈣離子拮抗劑，應用血管緊張素轉換酶抑制劑者不在人選之列)，控制血壓于135／80mmHg以下；并在原降血糖、降血壓治療的基礎上加用黃芪注射液30mL加入5％葡萄糖注射液250mL、胰島素3U靜脈輸注，每日1次，共應用4周。

1．3 檢測項目 進入實驗前以及黃芪注射液治療4周末，于晨起空腹抽取靜脈血，按試劑盒要求分離血漿，一30℃冰箱保存待測。采用雙抗體夾心ELISA法(大連泛邦科技實業(yè)有限公司提供試劑盒)。操作嚴格按說明進行，應用芬蘭生產(chǎn)的Well／seanMK-3型酶標儀測OD492值，根據(jù)不同濃度標準血清的OD492值作校正曲線，計算待測標本血清PAI－1濃度。24h尿白蛋白測定：收集24h的尿，準確記錄尿量，標本攪勻，采用磺柳酸比濁法測定24h尿白蛋白含量，儀器用721分光光度計。受試期間保持用藥前的生活方式與飲食習慣，不用影響血脂代謝的藥物。

1．4 統(tǒng)計學處理 計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，采用SPSS 12.0軟件進行方差分析及q檢驗，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

對照組和NDN組治療前后24h尿白蛋白和PAI－1的表達均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；DN組24h尿白蛋白和PAI－1的表達在治療前較對照組和NDN組顯著增高。治療4周后與治療前比較均有明顯下降，但仍較對照組和NDN組高(P<0.05)。詳見表1。

表1各組尿島蛋白排泄率及PAI－1水平的比較(x±s)

3 討論

DN是糖尿病常見而嚴重的并發(fā)癥之一，糖尿病引起腎損害的確切機制并不完全清楚，DN的基本病變是腎小球體積增大、基膜增厚及足突融合、細胞外基質(ECM)增多、腎小管－間質纖維化，從而導致腎小球硬化。腎臟微血管病變的發(fā)生發(fā)展與血管內皮細胞的損傷及纖溶活性降低有著密切的關系。

PAI－1是一種絲氨酸蛋白酶抑制物，是調節(jié)纖溶活性的關鍵因子，PAI－1是纖溶系統(tǒng)的關鍵酶，主要來源于血管內皮細胞，亦來自于活化的血小板α顆粒及增生的平滑肌細胞。測定PAI－1的血漿活性，可反映體內纖溶系統(tǒng)的功能狀態(tài)，纖溶系統(tǒng)的主要功能是清除沉積在血管壁上的纖維蛋白，以保持血流暢通。高糖可直接引起PAI－1的增多(在體外葡萄糖能促進人血管內皮細胞和平滑肌細胞PAI－1的合成和分泌，促進PAI－1的轉錄的啟動)，糖基化終末產(chǎn)物可刺激系膜細胞PAI-1基因表達和生物學活性，白細胞介素－1(IL－1)、血管緊張素Ⅱ(angⅡ)、氧化低密度脂蛋白(OX－LDL)均可引起血漿PAI－1升高。PAI－1不僅抑制纖溶酶活性，并抑制對細胞外基質(ECM)有降解作用的基質金屬蛋白酶(MUPs)的活性。本實驗觀察到糖尿病腎病病人PAI－1的表達明顯高于無糖尿病腎病的病人，因而PAI－1在DN的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，提示PAI－1可作為早期DN的一個診斷指標。

中醫(yī)學認為，糖尿病腎病屬于中醫(yī)“消渴”“水腫”范疇，其主要病因中病機為消渴日久，耗氣傷陰，氣陰兩虛，氣虛行血無力致血瘀，陰虛致根本之陰虧損，腎陰不足，陰損及陽，陽虛不能行氣化水，水濕潴留，發(fā)為水腫。故臨床治療當扶正祛邪并舉，以益氣養(yǎng)陰、化瘀通絡。黃芪屬扶正固本，補中益氣類中藥。黃芪注射液是中藥黃芪的提取物，含有黃芪皂苷類、黃芪多糖、氨基酸類及微量元素等多種成分，臨床上廣泛用于治療各種原因引起的蛋白尿。黃芪的主要作用是降低血小板的聚集性，增強紅細胞的變形能力，緩解高凝狀態(tài)，并能改變血瘀時的血流狀態(tài)，使毛細血管保持開放，血流加快，總血流量增加，疏通微循環(huán)。高凝聚高黏狀態(tài)造成組織缺血缺氧，缺氧造成內皮細胞脂質過氧化的損傷，引起內皮功能紊亂。黃芪注射液通過抗脂質過氧化的過程，加強氧自由基的清除，對缺氧內皮細胞產(chǎn)生細胞保護作用。陶少平等研究認為黃芪治療糖尿病腎病的機制可能是通過抑制血轉化生長因子一魚(TGF－β₁)的表達實現(xiàn)的。本研究觀察到，黃芪注射液能顯著降低DN病人尿白蛋白排泄率，降低PAI－1的表達水平。提示黃芪可通過抑制DN病人PAI－1的過度表達，改善腎臟細胞外基質蛋白代謝異常，發(fā)揮抗纖維化的作用，有效地保護腎臟。

PAI－1在DN的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，PAI－1可作為早期糖尿病腎病的一個診斷指標，黃芪可通過抑制DN病人PAI-1的過度表達，改善腎臟細胞外基質蛋白代謝異常，發(fā)揮抗纖維化的作用，有效地保護腎臟。

(本文編輯 王雅潔)