血漿纖維蛋白原Ｂβ基因多態性與小兒重癥感染相關性研究

摘 要 目的：探討血漿纖維蛋白原Bβ基因多態性與小兒重癥感染的相關性。方法：采用酚-氯仿抽提法提取外周血基因組DNA，采用RFLP方法確定β纖維蛋白原-455A/G基因多態性，通過瓊脂糖凝膠電泳對產物進行分析。觀察組與對照組之間進行逐個等位基因的比較，以相對危險度（OR）計算。結果：①觀察組三種基因型分布頻率中，AA基因型最高，AG基因型次之，GG基因型最低；等位基因分布頻率中，觀察組以A等位基因為主，對照組以G等位基因為主。有統計學意義。②肺炎合并心衰竭組FGBβ-455A/G基因型及頻率與未合并心衰組有顯著不同，經卡方檢驗有統計學意義。③小兒肺炎FGBβ-455A/G基因型，AA型發病相對危險度為9.25，GA型的發病相對危險度為1.25，GG型發病相對危險度為0.17。AA基因型可能是小兒肺炎的易感基因。結論：本研究提示FGBβ-455A/G基因型與小兒肺炎發病相關，與肺炎合并心衰亦有一定的相關性，推測FG B β-455A/G基因型可能與病情嚴重程度有關。

關鍵詞 纖維蛋白原 基因 肺炎

資料與方法

觀察組： 2003年1月～2005年10月在我院內科住院的感染患者共176例，男94例，女82例；年齡：3天～14歲，平均年齡3.90±1.15歲；病種包括新生兒肺炎22例，支氣管肺炎95例，毛細支氣管炎14例，肺炎支原體肺炎26例、小兒腸炎19例。診斷標準依照第六版《兒科學》。對照組：同一地區在門診體檢的健康兒童，共55例，年齡1個月～12歲，平均年齡4.5±2.9歲，男37例，女18例。

方法：①外周血基因組DNA提取：抽取外周靜脈1ml，2%EDTA100μl抗凝，-20℃冰凍保存。②染色體DNA提取采用酚-氯仿抽提法。

③β纖維蛋白原-455A/G基因多態性的檢測：PCR引物參照Mannuccci等方法設計。④PCR擴增。⑤擴增產物用HaeⅢ酶消化。

結 果

通過瓊脂糖凝膠電泳對產物進行分析：根據PCR片段的大小判斷FGβ-455基因多態性。統計學分析方法： 采用直接記數法計算基因型和等位基因頻率，兩組間差異比較采用卡方（X²）檢驗。觀察組與對照組之間進行逐個等位基因的比較，以相對危險度（OR）計算。

基因型：PCR擴增產物為一條446bp片段。PCR產物經HaeⅢ酶切后發現，三種基因片段。①FGBβ- 455GG型，產生348bp及98bp兩個片段；②FGBβ-455AA型，僅有1個446bp片段；③FGBβ -455GA型，產物為446bp、348bp及98bp 3個片段。

FGBβ-455A/G基因型與等位基因頻率分布：觀察組與對照組比較，三種基因型及兩種等位基因明顯不同。觀察組三種基因型分布頻率為AA基因型最高，AG基因型次之，GG基因型最低；等位基因分布頻率為觀察組以A等位基因為主，對照組以G等位基因為主。經卡方檢驗差異有明顯統計學意義。X²值分別為32.18(P<0.005)和45.89(P<0.005)。

FGBβ-455A/G基因型與疾病嚴重程度的相關性：小兒肺炎患者病情嚴重，常常出現心力衰竭。在觀察組109例支氣管肺炎和毛細支氣管炎中合并心力衰竭的患兒有43例。我們對合并心力衰竭與未合并心衰者各基因型分布進行比較，心衰組AA、AG、GG基因型頻率分別為0.488、0.302、0.209，A、G等位基因頻率為63.95和36.05，較未合并心衰組有顯著增高，經卡方檢驗有統計學意義（P＜0.01，P＜0.005）。

FGBβ-455A/G基因型與小兒肺炎發病的關系：在157例肺炎患兒和50例非肺炎小兒中FGBβ-455A/G基因AA型為74例、AG型61例、GG型72例。AA型發病相對危險度為9.25，GA型的發病相對危險度為1.25，GG型發病相對危險度為0.17。這說明FGBβ-455G/A與小兒肺炎的發生有關； AA基因型可能是小兒肺炎的易感基因。

討 論

研究認為，感染的發生、發展與β-纖維蛋白原多態性有關。本組結果表明，感染組A等位基因頻率及AA基因型頻率較對照組明顯增高。在患肺炎的患兒中FGβ-455 AA基因型明顯高于GG、GA型，提示FGβ-455G/A基因與小兒肺炎發病相關，FGβ-455G/A基因可能是通過影響血漿纖維蛋白原的水平而發揮作用。肺炎患者中合并心衰組AA型基因頻率明顯高于未合并心衰組，說明FGβ-455G/A基因與肺炎合并心衰亦有一定相關，推測FGβ-455G/A基因型可能與病情嚴重程度有關。肺部病變廣泛也使肺循環阻力增加，心肌受病原體毒素損害及嚴重毒血癥和低氧血癥引起的微循環障礙均可導致心力衰竭。

有研究認為，FG進入學循環后，刺激白細胞介素-6，引起疾病及急性炎癥反應^[1]，因而血漿FG 水平與感染及急性炎癥的關系亦備受關注。有實驗研究^[1]顯示ARDS（急性呼吸窘迫綜合癥）大鼠肺循環中FG水平持續升高且與病程有密切關系；另有臨床調查顯示，血漿FG濃度的升高與肺功能減退呈正相關。血漿FG濃度升高，COPD（慢性阻塞型肺病）住院危險相關系數隨之增大。

有研究^[2]發現，急性肺炎患者血漿FG水平，全血黏度均明顯增高，提示纖維蛋白原可能參與了肺炎的形成。

根據我們的研究結果，纖維蛋白原β-455G/A基因與小兒感染性疾病相關，A等位基因及AA基因型可能是小兒感染發病的危險因素。而且AA型基因攜帶者更傾向于合并心力衰竭。提示β纖維蛋白原 455G/A基因多態性可能是小兒肺炎的發生及其嚴重程度的遺傳易感因素。

參考文獻

1 郭杰庭.血漿纖維蛋白原濃度增高并發肺功能減退并增加慢性阻塞性肺疾病的危險性.國外醫學呼吸系統分冊，2002，3

2 羅顯榮，張小華，王林，葉小群.急性肺炎患者血液流變學分析.微循環血雜志，2002，12(2)：25-26