缺氧對圍產(chǎn)兒肺組織內(nèi)ＶＥＧＦ、內(nèi)皮素及Ｃ－ｍｙｃ表達的影響

摘要目的：觀察VEGF、內(nèi)皮素（ET-1）及C-myc在死于吸入窒息與肺透明膜病圍產(chǎn)兒肺組織內(nèi)的表達，探討它們與肺組織缺氧性損傷的關(guān)系。方法：采用免疫組織化學(xué)方法，檢測吸入窒息30例、肺透明膜病22例死亡患兒肺組織中VEGF、ET-1、C-myc三項指標(biāo)的表達情況，并與其他非呼吸系統(tǒng)疾病死亡病例肺組織進行對照。結(jié)果：①對照組肺組織中VEGF、ET-1、C-myc陰性表達或僅在肺泡壁上皮細胞及肺泡壁毛細血管內(nèi)皮細胞弱陽性表達。②在吸入窒息組和肺透明膜病組中C-myc、VEGF 則主要分布于肺泡壁上皮細胞，ET-1不但分布在肺泡壁上皮細胞和肺泡壁毛細血管內(nèi)皮細胞，還分布于小動脈平滑肌與支氣管上皮細胞。VEGF、ET-1、C-myc在吸入窒息組陽性率及肺透明膜病組陽性率，分別與正常肺組織相比都有顯著性差異(P<0.05)。③吸入窒息與肺透明膜病三項指標(biāo)的陽性率差別無顯著性(P>0.05)。結(jié)論：VEGF、ET-1、C-myc與肺組織缺氧性損傷密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞 缺氧 VEGF、ET-1、C-myc圍產(chǎn)兒 肺組織 免疫組織化學(xué)

資料與方法

材料：本實驗標(biāo)本來自新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室的圍產(chǎn)兒尸體解剖肺組織標(biāo)本，均經(jīng)10%的中性福爾馬林固定，石蠟包埋，對原切片復(fù)查，挑選死于吸入性窒息30例，死于新生兒肺透明膜病22例；其他非呼吸系統(tǒng)疾病死亡20例作為陰性對照，包括節(jié)段性壞死性腸炎5例，大面積腦出血6例，腹膜炎6例，外傷致死3例。

方法：研究用蠟塊分別進行HE染色及免疫組化染色。免疫組化應(yīng)用LSAB法。染色結(jié)果判斷 VEGF、ET-1棕色顆粒表達在細胞漿內(nèi)為陽性，C-myc棕色顆粒表達在細胞核內(nèi)為陽性。

統(tǒng)計學(xué)分析：采用X2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α＝0.05。

結(jié)果

VEGF、C-myc染色結(jié)果：棕黃色顆粒定位于細胞核內(nèi)。正常對照肺組織內(nèi)，C-myc、p53免疫組織化學(xué)染色顯示陰性或弱陽性；而吸入窒息及肺透明膜病患者的肺組織中，陽性率增加，棕黃色顆粒主要定位于肺泡上皮細胞的胞核中。

ET-1染色結(jié)果：棕黃色顆粒定位與細胞漿內(nèi)。在正常對照肺組織中ET-1陰性表達或僅在肺泡壁毛細血管內(nèi)皮細胞及肺泡壁上皮細胞胞漿中有弱陽性表達。在死于吸入性窒息及肺透明膜病患者的肺組織中表達部位：①肺泡壁毛細血管內(nèi)皮細胞及肺泡壁上皮細胞胞漿；②小動脈、小靜脈內(nèi)皮細胞及小動脈壁平滑肌細胞胞漿；③細支氣管上皮細胞胞漿。

VEGF、ET-1、C-myc在對照組、吸入性窒息肺透明膜病肺組織中的表達情況：20例正常肺組織中，VEGF、ET-1、C-myc 的陽性率分別為20.00%、25.00%、20.00%；而30例吸入性窒息肺組織中VEGF、ET-1、C-myc的陽性率分別為60.00%、70.00%、56.67%，與正常肺組織相比，差別具有顯著性(P<0.05)。

VEGF、ET-1、C-myc在正常肺組織與肺透明膜病肺組織中表達的情況：在22例肺透明膜病肺組織中三項指標(biāo)的陽性率為63.64%、72.73%、59.10%，與正常肺組織相比，有顯著性差異(P<0.01)。

VEGF、ET-1、C-myc在吸入窒息與肺透明膜病肺組織中表達的關(guān)系：吸入窒息與肺透明膜病VEGF、ET-1、C-myc的陽性率及X2值，這三項指標(biāo)的陽性表達率在兩組之間差別無顯著性(P>0.05)。

討論

VEGF：缺血缺氧是表達的強烈誘導(dǎo)因素，是生理條件下和病理生理適應(yīng)過程中血管生長的主要調(diào)節(jié)因子。在缺乏VHL作用的細胞中觀察到mRNA的穩(wěn)定性增加，這也是缺氧誘導(dǎo)表達量增加的機理之一。短時間的缺氧(3小時)可使表達量增加3～4倍，而持續(xù)性缺氧(15小時)可使表達水平提高8～10倍，這包括了轉(zhuǎn)錄水平增強和mRNA穩(wěn)定性增加兩方面的原因［1］。有研究顯示：人內(nèi)皮細胞在缺氧條件下產(chǎn)生是通過酪氨酸激酶途徑轉(zhuǎn)導(dǎo)的。更多的研究證實，缺氧誘導(dǎo)的表達還存在其他途徑。國內(nèi)外研究證實，在伴有血管增生的低氧性肺動脈高壓肺血管重建的發(fā)生中發(fā)揮了重要的作用［2］。

ET-1：缺氧、酸中毒時ET水平升高，通過其強烈縮血管功能，可加重組織缺氧，形成惡性循環(huán)，特別是可直接引起肺血管和氣道平滑肌強烈收縮，增強肺毛細血管靜水壓及微血管通透性，引起肺水腫［3］。本研究顯示，ET-1在吸入窒息組及肺透明膜病組中陽性表達率增加，分別與正常對照相比有顯著性差異（P<0.05）。陽性細胞分布范圍擴大，不僅在肺泡壁毛細血管內(nèi)皮細胞及肺泡壁上皮細胞表達陽性，而且在小動脈、小靜脈內(nèi)皮細胞，小動脈壁平滑肌細胞及細支氣管上皮細胞內(nèi)均有表達。表明ET-1與吸入窒息、肺透明膜病引起的肺組織缺氧密切相關(guān)。

C-myc：C-myc是目前研究最為深入的癌基因之一。由于C-myc對細胞生長增殖起調(diào)控作用，與細胞損傷后的修復(fù)過程及細胞內(nèi)游離鈣濃度有關(guān)。因此，C-myc基因一方面可影響缺血再灌注期間氧自由基生成以及細胞內(nèi)鈣的超載，再給氧期間，由于氧和能量的提供，損傷的細胞核和細胞膜以及其他細胞器開始修復(fù)。C-myc的陽性表達有可能就是細胞對損傷及修復(fù)的一種反應(yīng)，C-myc就可能作為預(yù)示細胞對損傷產(chǎn)生保護和修復(fù)作用的一個指標(biāo)［4］。本試驗中，C-myc在吸入窒息和肺透明膜病的陽性率明顯增高，與正常肺組織相比，差別有顯著性。說明C-myc參與了吸入窒息和肺透明膜病中肺組織缺氧性損傷的過程，并與之密切相關(guān)。 

本研究提示，ET-1、C-myc、VEGF在缺氧肺組織中異常高表達，在缺氧性損

傷中起重要作用，用免疫組織化學(xué)方法檢測ET-1、C-myc、VEGF的表達，為圍產(chǎn)兒肺缺氧性損傷的預(yù)防和臨床治療提供可靠的分子生物學(xué)依據(jù)。

參考文獻

1 陳治，等.VEGF基因表達調(diào)控機制的研究進展.國外醫(yī)學(xué).生理、病理科學(xué)與臨床分冊，2000，20(3):190-192.

2 血管內(nèi)皮因子受體在惡性腫瘤中的研究進展.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2005，12（5）：151-154.

3 崔其亮，等.新生兒肺炎及缺氧、酸中毒與內(nèi)皮素關(guān)系分析.中華兒童保健雜志，1998，6（1）：46-47.

4 康金朝，等.SD鼠未成熟心肌細胞缺氧/復(fù)氧期C-fox C-myc mRNA的表達.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2000，21（5）：586-588.