ＥＬＩＳＡ檢測乙肝兩對半的影響因素

ELISA法廣泛用于乙肝兩對半檢測。但ELISA測定中影響因素較多，有時可見到一些假陽性或假陰性，本文就ELISA測定乙肝兩對半的影響因素做如下討論。

標(biāo)本采集與處理的影響

標(biāo)本采集與處理不當(dāng)將對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響，因此我們應(yīng)注意以下幾個問題：①標(biāo)本嚴(yán)溶血及混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽性，嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。②采血試管洗滌不徹底、反復(fù)使用易交叉污染；塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空管采血管；并使用非抗凝標(biāo)本。③標(biāo)本凝固不全，正常血液采集后1/2~2小時開始凝固，18~24小時完全血塊完全收縮。在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采

血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>

試劑的影響

①乙肝兩對半試劑廠家較多；不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，資料顯示，不同廠家試劑的特異性和敏感性分別為89.4%~99.3%，78%~89%存在較大差異。有的廠家酶標(biāo)板孔間A值差大于15%；標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此。選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。②不同方法學(xué)的檢測試劑，會使兩對半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如：在實際工作中常用ELISA檢測HBsAg結(jié)果為陰性，而電化學(xué)發(fā)光檢測為陽性。除方法學(xué)的靈敏度外；還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標(biāo)志物檢測存在差異，建議試劑廠家對劑的制備應(yīng)該考慮亞型及型濃度的問題。

操作技術(shù)的影響

①加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準(zhǔn)確性，直接影響檢測結(jié)果。由于吸嘴構(gòu)造特殊，導(dǎo)致清洗困難，因此應(yīng)使用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準(zhǔn)。②溫浴影響，96孔酶標(biāo)板結(jié)構(gòu)特別，易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對溫度有嚴(yán)格要求，酶標(biāo)板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。③冼滌是ELISA操作的重要環(huán)節(jié)，手冼條件一致性較差，對結(jié)果影響較大，半自動與全自動冼板機(jī)使用不當(dāng)也會影響結(jié)果，血清中殘留的的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結(jié)晶易使洗板機(jī)針小孔全阻塞或半阻塞狀態(tài)，造成未結(jié)合標(biāo)記酶洗脫不徹底，導(dǎo)致“花板”造成假陽性或假陰性；所以操作洗板機(jī)過程中要不時觀察洗板機(jī)針孔內(nèi)洗液的通暢狀況，及時糾正，洗板機(jī)不用時應(yīng)用去離子水清冼幾遍。④肉眼判斷結(jié)果時，顯色淺不易觀察，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須使用酶標(biāo)儀檢測，以保結(jié)果一致性。

干擾物質(zhì)的影響

有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果；常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其他物質(zhì)等。如RF因子可與標(biāo)記二抗的FC段法結(jié)合造成假陽性，補(bǔ)體從C1q活化，使一抗和酶標(biāo)二抗的抗體分子發(fā)生變構(gòu)，F(xiàn)c的C1q分子結(jié)合點(diǎn)暴露出來，則補(bǔ)體C1q可將二者連接起來造成假陽性，采用56℃30分鐘滅活補(bǔ)體可降低假陽性率。

藥物的影響

①高效價的乙型肝炎免疫球蛋白會與HBsAg形成復(fù)合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測會呈陰性反應(yīng)，導(dǎo)致乙肝兩對半少見模式的出現(xiàn)，如我們常遇到乙肝大三陽的孕婦，為阻斷乙肝母嬰垂直傳播時，在孕第8、9、10月常規(guī)注射200mg乙肝免疫球蛋白，不僅影響孕婦HBsAg的檢出；而且其所生產(chǎn)的生新兒也常出現(xiàn)HBsAg陰性，HBeAg 陽性和HBcAb陽性等少見模式，可能是乙肝免疫球蛋白屬IgG抗體能通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)與胎兒血液中的HBsAg結(jié)合形成復(fù)合物；則新生兒HBsAg檢測呈陰性；用0.5M的鹽酸處理標(biāo)本1小時可提高出率。②為預(yù)防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗后的1~2周內(nèi)，血清中可檢出HBsAg成份，形成一過性HBsAg陽性，這可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.，電化學(xué)發(fā)光法能夠把它檢出，建議接種乙肝疫苗后1個月內(nèi)不應(yīng)作HBsAg檢測。

乙肝兩對半檢測的影響因素很多，必須排除各種影響因素的干擾才能為臨床提供正確可靠的檢測結(jié)果。

減不起肥

這天，胖老公一進(jìn)門，就問了我一個具體問題：“老婆，你猜，平常咱們花錢能買得到的肉，哪樣最貴？”我猶豫了好一陣也不明白就里：“珍稀動物買不到，那就只有烏龜王八了。”老公語出驚人：“那算什么呀，今兒我算領(lǐng)教了，是人的肉！”

我差點(diǎn)跳起來：“你可別嚇我，咱可不是孫二娘開店！”“聽我把話說完嘛。”胖老公一邊說，一邊拍拍自己的大肚皮，“今兒我去減肥中心，他們對我說，保證將我的重量減到令自己滿意的程度，但每減肥1斤，就得交他們150元。咱這身子要減到標(biāo)準(zhǔn)體重，要花6000多塊。我琢磨著，這世界上還沒見過這么貴的肉呢。”我聽了，連忙搖頭，“別說了，越說我越惡心”！

“怎么不能說，你不是天天嘮叨要我減肥嗎？而且呀，就是這么貴的肉，你也不得不買！”胖老公依然振振有詞，“男人要命才減肥，花高價買自己的肉，買了還得扔進(jìn)下水道，你說，這不是最大資源浪費(fèi)嗎？”（蔣平 李玉花）