內皮素－１在大鼠羊水栓塞發病機制中的實驗研究

摘 要 目的:探討羊水栓塞的發病機制。方法：孕晚期Wistar大鼠30只，胎齡20天，根據注入液體不同，隨機分為3組:對照組（生理鹽水組）10只、羊水組10只、胎糞組10只。建立羊水栓塞動物模型，觀察60分鐘后處死動物。如動物在觀察過程中死亡，立即剪開大鼠胸腔，取肺組織固定10%甲醛中.石蠟切片行免疫組化觀察內皮素-1的表達。結果 實驗組（羊水組和胎糞組）肺泡壁間質及泡漿內見免疫組化呈陽性、強陽性表達，對照組呈弱陽性。結論：內皮素-1參與了羊水栓塞的發生發展，是羊水栓塞發病的重要原因之一。

關鍵詞 羊水栓塞 內皮素-1 過敏

我們給孕晚期大鼠輸入不同性質羊水建立羊水栓塞動物模型， 取肺組織進行內皮素-1免疫組化觀察，探討ET-1在AFE中的作用機制，現將結果報告如下。

資料與方法

分組：健康妊娠晚期Wistar大鼠30只，胎齡20天，體重445～545ｇ。根據注入液體不同，隨機分為三組:對照組（生理鹽水組）10只、羊水組10只、胎糞組10只。

羊水收集方法：術前禁食12小時，隨意飲水，按0.35mg/100g腹腔注入10%水合氯醛麻醉，仰臥固定于鼠板上，備皮75%酒精局部消毒，腹正中線切口3cm，暴露子宮，行子宮次切術，關腹。用注射器抽取羊膜腔內羊水。

制備胎糞液：切開胎鼠腹壁，取下胎鼠大腸，輕輕擠出胎糞到羊水中，與原羊水配成1%濃度的胎糞液。

制備動物模型：分離右股靜脈，抽出羊水從股靜脈注入劑量為0.25ｍｌ/100ｇ，將制備好的胎糞液注入胎糞組，劑量同上。 正常對照組方法同上，但注入體內的是同等劑量的生理鹽水。觀察60分鐘后處死動物。如動物在觀察過程中死亡，立即剪開大鼠胸腔，取肺組織固定10%甲醛中。

試劑：內皮素-1免疫組化試劑盒。

檢測方法：①石蠟切片4μm。②脫蠟:二甲苯(Ⅰ)30分鐘→二甲苯(Ⅱ)30分鐘→100%乙醇(Ⅰ) 5min→100%乙醇(Ⅱ)5分鐘→95%乙醇(Ⅰ)5分鐘→95%乙醇(Ⅱ)5分鐘→80%乙醇5分鐘→蒸餾水洗。③抗原修復:0.01M枸緣酸鹽緩沖液加熱修復100℃5分鐘，PBS沖洗。④3%H2O2阻斷30分鐘，。PBS沖洗5分鐘X3次。血清覆蓋30分鐘。⑤加一抗(兔抗鼠多克隆ET-1抗體)，1∶100稀釋，4℃過夜。PBS沖洗5分鐘X3次。⑥二抗30分。PBS沖洗5分鐘X3次。⑦三抗20分。PBS沖洗。⑧DAB發色（顯微鏡鏡下控制），Marry's蘇木精復染。⑨脫水封片: 80%乙醇5分鐘→95%乙醇(Ⅰ)5分鐘→95%乙醇(Ⅱ)5分鐘→100%乙醇(Ⅰ) 5分鐘→100%乙醇(Ⅱ)5分鐘→二甲苯(Ⅰ)30分鐘→二甲苯(Ⅱ)30分鐘中性樹膠封片。

結果在顯微鏡下觀察。根據著色強度不同分為：（-）為未著色，（+）弱陽性，（++）陽性，（+++）強陽性。

結 果

病理學檢查 ：肺血管腔內可見角化上皮有形成分。

各組肺組織內皮素-1的表達免疫組化結果：實驗組（羊水組和胎糞組）肺泡壁間質及泡漿內見免疫組化呈陽性、強陽性表達，對照組呈弱陽性（見表）。

討 論

羊水栓塞發病率低，病情進展迅速，死亡率高，給疾病的發病機制的研究帶來困難。因此建立相應的動物模型能為深人研究疾病提供載體。本實驗采用自身胎鼠的羊水、胎糞制作模型，客觀真實的模擬羊水栓塞的過程，符合臨床發病規律。

胎糞組與羊水組中ET-1的表達增強，說明ET-1參與了AFE的發生發展，是AFE發生的重要原因之一。可能的機制為渾濁的羊水栓子進入母體血循環，在肺循環血流的沖擊下，損傷血管內皮細胞，引起ET-1釋放。ET-1對肺組織有直接毒性作用，使肺組織損傷加重。ET-1具有直接的致心律失常的作用，使冠脈、肺動脈收縮，肺動脈高壓，組織缺血缺氧。缺氧是ET-1合成的強烈刺激因素 ，缺血缺氧可使ET-1的合成與釋放增加。ET-1能增加腫瘤壞死因子（TNF-α），白介素-6（ IL-6）、白介素-8（IL-8）等炎癥介質的合成和釋放，增加毛細血管通透性，激活凝血系統。 IL-8和TNF-α等又能使ET-1表達增加，從而形成網絡效應，致使ET-1大量釋放。ET-1刺激血小板活化因子（PAF）、白三烯、組織胺及氧自由基的生成與釋放，參與Ⅰ型變態反應，引起過敏性體克，羊水栓塞的發生。

包蟲病人將獲財政救助

（記者錢峰）衛生部疾病預防控制局日前組織起草了《包蟲病外科治療救助項目技術方案（征求意見稿）》和《包蟲病外科治療救助項目管理方案（征求意見稿）》，以科學、規范地開展包蟲病外科手術治療工作，減輕包蟲病患者的痛苦。

《包蟲病外科治療救助項目管理方案（征求意見稿）》提出由國家財政安排專項經費，在包蟲病防治項目地區對符合外科治療條件的包蟲病患者提供外科醫療救助。救助標準由省級衛生、財政部門制定，中央財政2007年按每人6000元的標準安排補助，不足部分由地方財政負擔。申請外科治療救助的患者，應具備符合《包蟲病外科治療救助項目技術方案》中藥物治療無效或藥物使用禁忌，或泡型包蟲病病人；有手術指征；包蟲病項目縣的戶籍居民；生活貧困，經濟收入低于當地鄉（鎮）平均收入水平等條件。(李兵)