高效液相色譜法測定小兒清咽沖劑中牛蒡苷的含量

關鍵詞 小兒清咽沖劑 牛蒡苷 高效液相色譜法

資料與方法

儀器與試藥：① 儀器：2010AHT高效液相色譜儀，Class-vp工作站， UV－260紫外分光光度計， LC-250超聲清洗機（250W 50kHz）。② 試藥：牛蒡苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（批號：110819-200404供含量測定用）。乙腈為色譜純，水為純化水，小兒清咽沖劑及陰性樣品由吉林省吉特藥業有限公司提供（樣品批號：050101，050102，050103，050104，050105）。

實驗方法:①色譜條件:色譜柱：Agilent Extend ODS C18（250mm×4.6 mm， 5μm）；流動相：乙腈-水（23：77）；流速: 1.0ml/min；檢測波長: 280nm；進樣量：20μl。理論板數按牛蒡苷峰計算應不底于2000。②對照品溶液的制備：取牛蒡苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 1ml含0.1mg的溶液，即得。③ 供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品，研細，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率250w，頻率50kHz）20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得。④ 陰性對照溶液的制備:取缺牛蒡子的陰性樣品適量，按供試品溶液的制備方法提取陰性對照溶液。

結 果

干擾試驗:取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液按上述色譜條件依法測定，結果顯示樣品色譜圖中與對照品溶液有相同保留時間（tR=26.550分鐘）的色譜峰，而陰性對照溶液在此保留時間無此峰，說明小兒清咽沖劑的其他成分對牛蒡苷的測定無干擾。證明本法可行。

線性關系考察:精密吸取對照品儲備液（每1ml含0.5mg）各0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件進行測定，以峰面積A對對照品濃度C作線性回歸。得回歸方程為：Y=11008C+1692.4， r=0.9999。結果表明，牛蒡苷在25～250μg/ml范圍內呈良好的線性關系。

精密度試驗:稱取樣品（批號：050101）1份，按供試品溶液的制備方法，依上述色譜條件，依法進行測定，連續重復進樣6次，測得牛蒡苷峰面積平均值為934361，其RSD為0.5%（n=6）。

重復性試驗:平行稱取同一樣品（批號：050101）6份，按照供試品溶液制備項下方法處理，依上述色譜條件依法進行測定，并計算含量，結果牛蒡苷平均含量為5.10 mg/袋，RSD=0.7%（n=6）。

穩定性試驗 :稱取樣品（批號：050101）1份，按照供試品溶液制備項下方法處理，依上述色譜條件依法進行測定，每隔4小時進樣1次，測得峰面積平均值為934020，其RSD為1.3%（n=6），表明樣品溶液在24小時內穩定。

回收率試驗 :采用加樣回收試驗，精密稱取已知含量的樣品（批號：050101）細粉6份（各份約2.5g），精密加入牛蒡苷對照品溶液（0.5944mg/ml）4ml，按照供試品溶液制備項下方法處理，依上述色譜條件依法進行，測定牛蒡苷的含量，并計算回收率，測定結果見表1。

樣品測定：取5個批號的樣品，按照供試品溶液制備項下方法處理，依上述色譜條件依法進行測定，每批號測定5次，測定結果見表2。

討 論

檢測波長的選擇：我們取牛蒡苷對照品的甲醇溶液，經島津UV-260型可見-紫外分光光度計，在200~300nm范圍內掃描，在279nm和228nm處有最大吸收峰。并參考牛蒡子中牛蒡苷 的測定波長，故選擇其測定波長為280nm。

流動相的選擇：選用乙腈-水（23∶77）作為流動相，牛蒡苷對照品峰形良好，保留時間適宜，理論板數為8669。樣品中牛蒡苷與其它組分均能達到基線分離，分離度大于1.5。

提取溶劑的選擇：我們曾分別采用了以50%甲醇，甲醇為溶劑。進行樣品提取溶劑的比較，實驗結果證明，在其他條件完全相同的條件下，兩種溶劑無明顯差別，但用50%甲醇提取能把樣品中的糖溶解，使樣品難以過濾，所以，我們選擇了以甲醇為溶劑。

提取方法的選擇：我們采用超聲10分鐘，20分鐘，30分鐘，三個時段的比較，結果超聲20分鐘好于10分鐘，但超聲30分鐘與超聲20分鐘無明顯差異。故我們采用以甲醇為溶劑超聲處理20分鐘的提取方法。

參考文獻

1 中華人民共和國衛生部藥品標準. 中藥成方制劑. 第6冊，1989：23

2 中國藥典.一部，2005：48