咳喘寧顆粒質量標準研究

摘 要:目的:對咳喘寧顆粒進行質量標準研究。方法:采用薄層色譜法對咳喘寧顆粒進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對咳喘寧顆粒中的鹽酸麻黃堿進行含量測定。結果: 鹽酸麻黃堿的線性范圍為0.668～4.008μg，平均回收率為100.83%。結論:此方法可行，重復性好，能有效地控制咳喘寧顆粒的質量。

關鍵詞：咳喘寧顆粒；質量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法

中圖分類號：R927.11文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2007）11-044-04

咳喘寧顆粒為《中華人民共和國衛生部藥品標準#8226;中藥成方制劑》第20冊收載品種，編號為WS3-B-3898-98^[1]。由麻黃、紫苑、百部(蒸)、甘草、苦杏仁組成，功能為止咳化痰，用于傷風咳嗽，急、慢性支氣管炎。本品以中藥千古名方三拗湯為基礎化裁加減而成，以麻黃為君藥，苦杏仁、甘草為臣使藥，我們在原質量標準的基礎上，增加了甘草有效成分甘草次酸、苦杏仁有效成分苦杏仁苷的薄層鑒別項目及麻黃有效成分鹽酸麻黃堿的含量測定項目，以進一步有效控制咳喘寧顆粒的產品質量。

1 儀器和材料

(1)試驗儀器為P200II高效液相色譜儀，由大連依利特科學儀器有限公司制造。

(2)藥品與試劑。對照品及對照藥材購于中國藥品生物制品檢定所；所用試劑均為分析純或色譜純。咳喘寧顆粒為自制。

2 實驗方法和結果

2.1 薄層色譜鑒別^[2]

2.1.1 苦杏仁的薄層色譜鑒別

取本品10g，研細，加水25 ml使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，棄去乙醚液，用水飽和的正丁醇萃取5次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，將正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml微熱使溶解，放冷，通過上端填有2g中性氧化鋁（100～200目）的D101型大孔吸附樹脂（100～200目，10g，內徑2cm，濕法裝柱，加水20ml預洗一次），棄去水液，用氨試液（4→100）30ml洗脫，棄去氨液，再用水10ml洗脫，棄去水液，繼續用20%乙醇30ml洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦杏仁苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。按處方取不含苦杏仁的其它藥材，依照本品制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。依照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2000年版一部附錄VI B）進行試驗，分別吸取上述供試品溶液12μl，對照品溶液6μl，陰性對照溶液12μl點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）5～10℃放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，立即噴以磷鉬酸硫酸溶液（磷鉬酸2g，加水20ml使溶解，再緩緩加入硫酸30ml，混勻），在105℃下加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯現相同顏色的斑點，陰性無干擾，如圖1。此法簡單、靈敏度高、重現性好、專屬性強。

2.1.2 甘草的薄層色譜鑒別

取本品30g，研細，加水40ml使之溶解，加鹽酸6ml與三氯甲烷60ml，加熱回流1.5小時，放冷，分取三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加甲醇制成每 1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。按處方取不含甘草的其它藥材，依照本品制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶20∶7∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯現相同顏色的斑點，且陰性均無干擾，如圖2。此法簡單、靈敏度高、重現性好、專屬性強。

2.2 鹽酸麻黃堿含量測定^[2-3]

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.08mol#8226;L^-1磷酸二氫鉀溶液 (10∶90)(用三乙胺調PH=6.8)為流動相，檢測波長:205nm，理論板數按鹽酸麻黃堿峰計算應不低于4000。

2.2.2 對照品溶液的制備

取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加0.1mol/L的鹽酸溶液制成每1ml含67μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備

取本品約5g，研細，精密稱定，加水40ml使之溶解，置分液漏斗中，加濃氨試液5ml，用乙醚振搖提取5次(分別為40，40，40，30，30ml)，合并乙醚液，加鹽酸乙醇溶液（1→20）10ml，混勻，低溫回收溶劑至干，殘渣加乙醇5ml和0.1mol/L鹽酸溶液適量使溶解，轉移至25ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 乙醚提取次數的考察

分別取本品約5g，研細，精密稱定，加水40ml使之溶解，置分液漏斗中，加濃氨試液5ml，考察振搖提取3次、4次、5次、6次的情況。其余操作過程按供試品溶液制備方法制備，再分別按前文含量測定方法操作，進樣量為10μl，測定峰面積值并比較結果。

根據乙醚提取結果顯示，提取5次峰面積大，而提取6次峰面積與提取5次無明顯變化，因此，將乙醚振搖提取次數定為5次。

同時，我們比較了在乙醚振搖提取次數為5次的情況下，每次振搖提取時加乙醚量對峰面積大小的影響，提取5次(40，40，40，30，30ml)和提取5次(40，40，40，40，40ml) 峰面積無明顯變化，因此，將乙醚振搖提取次數定為5次(40，40，40，30，30ml)。

2.2.5 線性關系的考察

分別精密吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液(C=0.334mg#8226;ml^-1)2、4、6、8、10、12μl，分別進樣，記錄色譜圖，測定各峰面積，結果見表1。以峰面積積分值為縱坐標(Y)，進樣量為橫坐標（X），求得回歸方程Y=13766.16X＋2701.43，r=0.9993。

說明鹽酸麻黃堿在0.668～4.008μg范圍內，進樣量與鹽酸麻黃堿峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.2.6 陰性干擾試驗

參照《中華人民共和國衛生部藥品標準#8226;中藥成方制劑》第20冊，制得咳喘寧顆粒缺麻黃藥材的陰性樣品，按前文方法進行處理，得鹽酸麻黃堿陰性供試品溶液，按照正文鹽酸麻黃堿含量測定方法進行測定，在與鹽酸麻黃堿對照品溶液對應的保留時間處，鹽酸麻黃堿陰性供試品溶液無吸收峰，表明陰性無干擾。

2.2.7 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液各10μl，按前文樣品測定方法操作，在0、2、4、6、8h時間間隔分別進樣，測定色譜峰面積，得出峰面積積分值，鹽酸麻黃堿峰面積值的RSD值為0.24%，試驗結果表明，樣品供試液在8小時內穩定性良好。

2.2.8 精密度試驗

取同一供試品溶液，分別精密吸取10μl，連續進樣5次，測定譜峰面積，鹽酸麻黃堿峰面積值的RSD值為0.19%，試驗結果表明精密度良好。

2.2.9 重復性試驗

取同一批號樣品（批號20040901）5份，按供試品溶液制備方法制備，分別按含量測定方法操作，進樣量為10μl，測定峰面積值并計算含量， RSD值為1.67%，試驗結果表明重復性良好。

2.2.10 回收率試驗

取樣品（批號20040901）約2.5g，研細，精密稱定，分別加水36、35、34ml使之溶解，再分別精密加入鹽酸麻黃堿對照品溶液(C=0.334mg/ml )4、5、6ml，平行作兩份，其它步驟按供試品溶液制備方法制備，按前文的含量測定方法操作，進樣量為10μl，以下列公式計算回收率，測定結果見表1。

試驗結果表明：回收率在97.6%～103.2%之間，加樣回收良好。

2.2.11 樣品測定

取本品約5g，研細，精密稱定，按供試品溶液制備方法制得供試品溶液，按前文的含量測定方法操作，每次進樣量為10μl，測定結果見表2和表3。

3 討論

本品的薄層色譜鑒別均作了陰性對照試驗，陰性無干擾，表明此法簡單、靈敏度高、重現性好、專屬性強，可作為本品定性鑒別的依據。

由于

麻黃為方中君藥，主要化學成分為麻黃生物堿類等，為了進一步提高本產品質量控制水平，我們選擇了麻黃中的有效成分麻黃堿作為含量控制項目，進行含量測定，試驗結果表明，建立高效液相色譜法測定本品中鹽酸麻黃堿的含量具有分離效果好、靈敏、準確等優點。

在咳喘寧顆粒中試生產中，我們投料所用麻黃藥材的麻黃堿含量為1.01%，根據3批中試和10批小試的樣品測定結果，咳喘寧顆粒所含麻黃以鹽酸麻黃堿計為0.692 mg/g左右。按此平均含量下浮20%計算，咳喘寧顆粒成品每克含麻黃以鹽酸麻黃堿計應為0.554mg/g左右，同時，考慮到藥材的來源以及制劑生產過程、貯藏等影響因素，故暫定本品每克含麻黃以鹽酸麻黃堿計，不得少于0.35mg，且每袋裝15g，故暫定本品每袋含麻黃以鹽酸麻黃堿計，不得少于5.0mg。

參考文獻：

［1］ WS3-B-3008-98.衛生部部頒藥品標準(第15冊)［S］.1997.

［2］ 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）［S］.北京：化學工業出版社，2000.

［3］ 謝秀瓊.中藥新制劑開發與應用（第二版）［M］.北京：人民衛生出版社，2003.

Study on Quality Standard for KechuanningKeli Granule

Abstract:Objective:To study the quality standard for KechuanningKeli Granule.Methods: KechuanningKeli Granule was identified by TLC and Ephedrine Hydrochloride，in KechuanningKeli Granule was determined by HPLC.Results:The linear relationship was at the range of 0.668～4.008μg for Ephedrine Hydrochloride.The average recovery was 100.83% for Ephedrine Hydrochloride. Conclusion:The method is available with a good reproducibility and can control the quality of KechuanningKeli Granule.

Key words: KechuanningKeli Granule; Quality standard； Thin-layer chromatography; High performance liquid chromatography