組織細胞ＤＮＡ含量與死亡時間相關性研究進展

摘 要：國內外許多學者的研究已充分表明，機體死亡后，各器官組織細胞核DNA含量隨死亡時間延長而下降，測定DNA含量將是精確、客觀推斷死亡時間的新方法。綜述了組織細胞DNA含量與死亡時間相關性研究的進展。

關鍵詞：組織細胞；DNA含量；死亡時間

中圖分類號：R89 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197(2007)10-037-02

推測死亡時間一直是法醫學研究的重點內容。目前對于早期死亡時間(PMI)，可以根據尸體現象和簡單儀器進行大體判斷，但這種判斷存在著較大的誤差。如果能找到一個靈敏的指標用以判斷死亡時間，得出的結論會更準確而且具有說服力。許多學者為此分別對血液、玻璃體液內電解質成分變化、死后DNA含量改變等做了大量研究，并且找到了上述物質隨死后時間延長而發生變化的規律性，為死亡時間的推斷積累了豐富的資料。其中，組織細胞DNA含量與死亡時間相關性的研究越來越引起了人們的重視。機體死亡后，由于DNA內切酶的不斷激活，DNA含量會隨死亡時間的延長而不斷下降，而且在一定時間范圍內其下降速度會呈現特有的規律性，掌握了這個規律性，無疑會對準確判斷死亡時間帶來莫大的方便。隨著單細胞凝膠電泳(SCGE)、顯微分光光度計定量測定、共聚焦顯微鏡慧星圖像攝取、計算機圖像分析、流式細胞儀(FCM)等技術的日趨成熟和廣泛應用，為準確測定死后不同時間DNA的不同含量值提供了條件，也使通過測定DNA含量來推斷死亡時間成為可能。近十余年來，國內外學者對此進行了廣泛而深入的研究，并取得了一定的成果。

1998年，Henssge等^[1]對小鼠死后白細胞DNA含量的變化進行了組織化學定量研究，他們用顯微分光光度計定量測定小鼠死后不同時間白細胞DNA含量的變化情況，發現小鼠死后白細胞DNA含量隨死亡時間的延長而不斷下降，而且其下降的幅度呈現出一定的規律性，于是他們斷定，測定DNA含量變化可以用來作為判斷機體死亡時間的一個可靠指標。隨后，Johnson等^[2]用SCGE檢測小鼠死后心肌細胞核DNA的降解，得出了同樣的結論。2005年，Ostling等^[3]應用FCM檢測小鼠死后肝細胞核DNA含量的變化。他們將100只小鼠用重力打擊的方法處死，在死后的即時和4、6、9、12、24、36、48、72小時9個時間段定時切取小鼠肝組織，分別測定各時間點的DNA含量，結果顯示，小鼠肝細胞核DNA含量隨死亡時間延長呈現一定的下降梯度，并且發現，在小鼠死亡的早期(36小時內)，肝細胞核DNA含量呈快速下降狀態，較后階段其下降速度漸趨于緩慢。他們通過反復驗證，最后給出了小鼠死后肝細胞核DNA含量變化的回歸方程。

Vendrely^[4]對大鼠肝、腦細胞核DNA含量死后變化進行了圖像分析，結果也顯示死亡時間與DNA含量變化有明顯的關系。2003年，Muela等^[5]對大鼠死后肝細胞核DNA含量的變化進行了研究，他們也用顯微分光光度計作為測定工具，定量測定不同溫度下(10℃、20℃、30℃)大鼠死后不同時間肝細胞核DNA的平均含量，發現10℃、20℃、30℃下大鼠死后肝細胞核DNA含量與死亡時間呈負線性關系，且隨溫度升高，DNA含量的下降速度明顯加快。Schweiger^[6]用SCGE檢測大鼠死后肝細胞核DNA的降解，在大鼠死后30小時內，每隔3小時取肝組織進行SCGE，用共聚焦顯微鏡攝取慧星圖像，應用慧星圖像分析軟件進行圖像分析，結果顯示，大鼠死后的肝細胞在電泳圖像上出現明顯的慧星形拖尾，其尾長、尾矩在一定時間范圍內(0~8小時)隨死亡時間的延長而漸次增大，二者均與死亡時間呈一定的相關回歸關系。因此得出，SCGE可應用于早期死亡時間的推斷。劉良^[7]等也對大鼠腎細胞核DNA含量與死亡時間的關系進行了研究，他們應用計算機圖像分析技術，測定了15只大鼠在死后48小時內不同時間點大鼠腎細胞核DNA的面積、等效直徑、異形指數、平均光度、密度變化數和平均灰度等7項參數的變化值。筆者用相同的方法，對大鼠腦細胞核DNA含量與死亡時間關系也作了圖像分析。結果顯示，在大鼠死亡的相對早期(48小時內)，其腎、腦細胞核DNA降解速率與PMI具有一定相關性。得出結論，應用計算機圖像分析技術測量機體死后DNA含量變化，將會成為精確、客觀推斷死亡時間的新方法。隨后，其他學者對死后大鼠的心肌、骨骼肌、坐骨神經雪旺氏細胞等組織也進行了DNA含量與死亡時間關系的研究，均得出了相同的結論。

Munoz等^[8]用熒光法測定兔死后組織中DNA含量的變化，發現隨死后時間的不斷延長，熒光強度不斷減弱，最終熒光消失，因而他們推斷DNA含量隨兔死后的時間延長而不斷減少。周建斌等^[9]用家兔角膜上皮細胞、王小囝等^[10]用家兔牙髓作為材料，也對DNA含量變化與死亡時間的關系進行了研究，初步得出了兩者之間存在著規律性關系的結論。

陳新等^[11]用腐敗人尸體為研究對象，對組織細胞DNA含量變化與死亡時間的相關性進行了研究。他們將人尸體的心、肝、腎等器官制成石蠟切片，經Feulgen染色并圖像分析，同時將各器官組織按不同時間取材，制成單細胞懸液，應用FCM檢測DNA含量，結果發現，各器官DNA含量隨死亡時間延長呈現一定的下降梯度，各器官細胞核DNA染色強度指數也隨死亡時間的延長而下降。Cina^[12]用已知死亡時間的人尸體的心、肝、脾、腎作為研究材料，按死后6、12、24和48小時4個時間段取材，制成單細胞懸液，應用FCM檢測DNA含量，結果顯示脾細胞核DNA含量隨死亡時間延長呈現出較好的下降梯度，而心、肝、腎則由于細胞自溶較快，死后6小時細胞核DNA含量已很低，其變化情況與死亡時間的相關性欠佳。得出結論，機體死亡后各器官組織細胞核DNA含量隨死亡時間延長而下降。

參考文獻：

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