超聲波提取榕樹葉（大葉）總黃酮及其鑒別

摘 要：目的：為充分利用榕樹葉植物資源，避免資源的浪費，探討榕樹葉總黃酮的提取及鑒別方法。方法：采用超聲波乙醇浸提法從榕葉中提取黃酮類物質，并對所提取的黃酮類物質進行驗證，用分光光度法測定其含量。結果：測得樣品中總黃酮的含量C=1.9392mg/ml，回收率為102.7%，其純度和產率均較高。結論：該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取榕樹葉黃酮類物質的有效途徑。

關鍵詞：超聲波提取法；榕樹葉；總黃酮；鑒別

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：1673-2197(2007)10-046-03

榕樹(banyan)，是?？崎艑贌o花果類植物，全世界有800多種，主要分布在熱帶、亞熱帶地區。大葉榕為?？浦参镩艠涞娜~，又名落地金線。我國約有榕屬植物100種，是熱帶雨林中的關鍵種類，主要分布在福建、廣東、廣西、海南、臺灣和浙江等地。研究表明^[1]，榕樹葉含三萜甙、黃酮甙、酸性樹脂、鞣質等，其中，黃酮類和萜內酯類等有效成分在治療冠心病、老年性癡呆、腦血栓、神經系統疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有顯著效果，無毒副作用，并由此開發出多種藥品和保健食品。

國內外對于榕樹葉中黃酮類化合物的研究還相對缺乏。目前，有利用水、石油醚、乙醇從榕樹葉中提取黃酮類化合物的報道^[1]，但是，這幾種方法耗費的時間長、工藝復雜、提取效率較低。近年來，超聲技術應用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質、動物組織漿的毒質等研究已有報道^[2-3]，證實其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。大量研究表明，利用超聲波產生的強烈振動、極高的加速度、強烈的空化效應和攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響^[3]。但超聲技術應用于提取榕樹葉中黃酮類物質的研究尚未見報道，本文對此進行了一些探討。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

KQ5200DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；UV-755B紫外可見分光光度計(上海分析儀器總廠)；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHB-III循環水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)。

1.2 試劑

95%乙醇；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；乙酸乙酯AR；蘆丁標準品(中國藥品生物制品檢定所)；榕樹葉(大葉榕)采自百色市黨校校園內。

2 方法與結果

2.1 總黃酮成分提取

取新鮮榕葉，烘干，粉碎。稱取榕樹葉粉末約6g，加80ml 95%乙醇，超聲波提取2.5 h，抽濾。濾渣再加40ml 95 %乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩5~7ml為止，放置于250ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。

2.2 測定方法及其依據

以蘆丁為對照品測定榕樹葉中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適當的pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡合物，在可見光區能獲得穩定的特征吸收峰。

2.3 定量實驗—總黃酮的含量測定

2.3.1 波長的選擇 取適量樣品液，在0.30ml 5%亞硝酸鈉溶液的堿性條件下，經硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液，在420~700nm波長范圍測定螯合物的吸光度，螯合物于510nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。

2.3.2 標準曲線的繪制 分別精密吸取蘆丁對照液(0.10mg/ml)0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白液，于510nm處測吸光度。吸光度測定結果見表1。

根據上表得回歸方程：

A=2.9069×10^-3+12.05C，r=0.9999。

2.3.3 提取物含量的測定 精密吸取樣品液1.00ml，置于10.00ml容量瓶，按標準曲線的制備方法測定吸光度A=0.587，根據回歸方程：A=2.9069×10^-3+12.05C，計算樣品中總黃酮的含量C=1.9392mg/ml。

2.3.4 回收實驗 精密量取樣品液1.00ml，加入標準蘆丁對照品2.00ml(0.10mg/ml)，同前樣品測定方法測定吸光度，求出回收率為102.7%。

2.4 定性實驗—總黃酮的鑒別

2.4.1 顏色反應 紫外光下呈色反應：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。

濃氨水反應：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。

三氯化鋁反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。

乙酸鎂反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。

鹽酸-鎂粉反應：取乙醇提取液1ml于試管中，加鎂粉，再加入濃鹽酸數滴(1次加入)，在泡沫處呈紫紅色。

2.4.2 紙層析 取樣品溶液10μl點在濾紙上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5為展開劑，上行展開5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后置于紫外光下，可見熒光斑點。

3 討論

實驗結果表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為102.7%，提取效率高于傳統方法，得到的黃酮類物質純度較高。超聲波可以強化乙醇浸提法，達到省時、高效、節能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質的途徑，具有廣闊的應用前景。

黃酮類化合物是天然化合物中的一大類別，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有極高的藥用價值。在自然界中，最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃(醇)、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等^[4]。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，通過血腦屏障，進入脂肪組織，進而體現出如下功能：消除疲勞、保護血管、防止動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其它臟器細胞。

黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮痛、免疫調節、降血糖、治療骨質疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用^[5-9]。近年來，世界上掀起了植物藥開發的熱潮，植物藥以其天然、低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用格外引人注目。本文實驗結果表明，榕樹葉(大葉榕)中含有較為豐富的黃酮，具有廣泛的開發和利用價值，值得進行綜合利用。

參考文獻：

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The Total Flavanone of Banyan Leaves(Flocculus)Extraction and the

Identification by Ultrasonic Wave

Liao Li1，Liu Haihua 2，Jiang Lifang 2 ，Li Lin3，Huang Suoyi2

(1.Beihai Radio and Television University，Beihai Guangxi 536000，China；

2.Department of Chemistry，Youjiang Medical College for Nationalities，Baise Guangxi 533000，China；

3. Medical College，Nanhua University，Hengyang，Hunan 421001，China)

Abstract：Objective：In order to make use of the resources of banyan leaves ，avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of banyan leaves. Methods：The flavonids were extracted by ethanol as the solvent from banyan leaves with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of banyan leaves. Results：By this method getting the density of the total flavanone of banyan leaves is C=1.9392mg/ml and the rate of recovery is102.7%. Conclusion：This text provides the extraction and purifying methods to get the outcome and the purity of the flavanone are all very high .This method is a purely physical process and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of banyan leaves.

Key words：Ultrasonic wave treatment；Banyan leaves；Total flavanone；Identification