雪蓮有效成分的提取及含量測(cè)定

摘 要：目的：測(cè)定新疆雪蓮花中多糖和總黃酮的含量。方法：用可見分光光度標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定含量，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：總黃酮的平均含量是2.05%；多糖的平均含量是5.06%。

關(guān)鍵詞：雪蓮花；雪蓮多糖；雪蓮總黃酮；可見分光光度法

中圖分類號(hào)：R282.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-2197(2007)10-042-02

雪蓮花類藥材為菊科風(fēng)毛菊屬(Saussurea DC)用作生藥的多種植物的全草或地上部分，始見于藏藥文獻(xiàn)《月王藥物》，清代《本草綱目拾遺》也有記載，是西藏、新疆、青海、甘肅、云南、四川等高原寒帶地區(qū)常用的民族藥和民間藥^[1]。本文所要探討的新疆雪蓮(Saussurea Involucrata Kar.et Kir. ex Maxim)即為其中一種，主要分布于我國新疆的天山和昆侖山高山區(qū)。民間以全草入藥，性溫，味微苦，入肝、脾、腎三經(jīng)，具有活血通經(jīng)、散寒除濕、強(qiáng)筋助陽等功效，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺寒咳嗽、小腹冷痛、閉經(jīng)、胎衣不下、陽萎等疾患。藥理試驗(yàn)表明，新疆雪蓮具有消炎、鎮(zhèn)痛及終止妊娠的作用，而總黃酮是消炎鎮(zhèn)痛的有效成分。文獻(xiàn)報(bào)道，黃酮是雪蓮中的重要成分，具有祛痰和類似維生素P的作用，能降低毛細(xì)血管通透性，且具有抗病毒、抑制醛糖還原酶的作用。黃酮類、多糖類化合物與多種藥理活性相聯(lián)系，在護(hù)膚保健、防治心血管疾病、治療風(fēng)濕疼痛癥、延緩衰老、抗癌和計(jì)劃生育等方面開發(fā)利用潛力大^[2，3]。因此，對(duì)雪蓮中黃酮類、多糖的含量測(cè)定具有十分重要的意義。

1 材料與儀器

1.1 材料

干燥雪蓮花(黃河藥市)，蘆丁對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所)。

1.2 儀器

721分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠制造)，超聲波提取儀(上海必能信超聲有限公司，SB2200-T)，電子秤等。

2 方法與結(jié)果

精密稱取蘆丁對(duì)照品200mg，置于100ml的量瓶中，加甲醇70ml，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10.00ml置于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，備用(每lml中含蘆丁0.20mg)。

2.1 總黃酮的測(cè)定(比色法)

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取對(duì)照品溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00ml，分別置于25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%NaNO₂溶液10ml，使混合，放置6min，加10% Al(NO₃)₃溶液1ml，搖勻，放置6min，最后加4%NaOH 10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以第一瓶作空白，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度是：0.099、0.203、0.311、0.408、0.512、0.624，以濃度C與吸收度A進(jìn)行直線回歸，得回歸方程A=-0.0045+0.013C，r=0.9998。

2.1.3 供試樣品含量測(cè)定 取雪蓮花粉末于70℃干燥6h，精密稱取1.00g，于錐行瓶中加12倍量蒸餾水進(jìn)行超聲提取^[4]60min，分離藥液和藥渣，藥渣于錐行瓶中加10倍量蒸餾水進(jìn)行超聲提取45min，分離藥液和藥渣，合并兩次藥液，加95%的乙醇，靜置沉淀，進(jìn)行二次抽濾，將沉淀加蒸餾水溶解置50ml的容量瓶中待測(cè)含糖量(1號(hào)、2號(hào)、3號(hào))；將濾液放入100ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，待測(cè)總黃酮含量(1號(hào)、2號(hào)、3號(hào))。

精密吸取雪蓮提取液5.00ml置于25ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法操作，自加水至“6ml”起按要求測(cè)定吸收度，以回歸方程計(jì)算供試液中總黃酮含量，并進(jìn)一步換算成雪蓮花藥材的總黃酮含量。

2.1.4 含量測(cè)定結(jié)果(見表1)

2.2 多糖的含量測(cè)定(苯酚-硫酸法)

2.2.1 含量測(cè)定的原理 苯酚-硫酸比色法測(cè)定多糖的原理，是多糖被濃硫酸水合產(chǎn)生的高溫迅速水解成單糖，在強(qiáng)酸性條件下，與苯酚反應(yīng)生成橙色衍生物。它在490nm處有最大吸收，其吸光度與濃度呈線性關(guān)系^[5]。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品100mg，溶解并定容100ml，則其濃度為1mg/ml。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml，均定容100ml，分別取1.00ml，各加入苯酚液1.00ml，迅速滴加濃硫酸5.00ml(硫酸占總體積71.4%)，另以1.00ml水同上操作，作為空白液。再將其置于40℃水浴中恒溫放置0.5h，取出，冷卻15min后，于490nm處測(cè)其吸光度值，分別為0.046、0.125、0.240、0.380、0.510，得回歸方程A=0.01312C-0.01534，r=0.9995。^[6]

2.2.4 含量測(cè)定結(jié)果(見表2)

3 討論

雪蓮多糖和總黃酮是中藥雪蓮花所含的主要有效成分，其含量高低直接影響到藥材質(zhì)量和臨床療效。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，總黃酮具有消炎鎮(zhèn)痛、抗風(fēng)濕、抗癌等作用；雪蓮多糖具有終止妊娠、消除自由基、抗疲勞以及增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。前人多以總黃酮為指標(biāo)進(jìn)行研究和質(zhì)量控制，而本次課題以雪蓮多糖為主要研究對(duì)象，兼顧總黃酮。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，超聲波提取雪蓮多糖含量高達(dá)5.06%，總黃酮含量仍達(dá)到2.05%。因此，建議在以后研究和制藥中，以總黃酮含量測(cè)定為指標(biāo)的同時(shí)，也應(yīng)考慮雪蓮多糖的含量，將雪蓮多糖含量也作為質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李君山，蔡少青.雪蓮花類藥材的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展[J].中國藥學(xué)雜志，1998，33(8)：449.

[2] 萬明.天山雪蓮花開發(fā)前景[J].新疆中醫(yī)藥，2004，22(4)：61.

[3] 趙莉，王曉玲.新疆雪蓮的化學(xué)成分、藥理作用及其臨床應(yīng)用[J].西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版，2003，29(4)：424-428.

[4] 朱晨.野生與種植雪蓮花的總黃酮含量比較[J].中國中醫(yī)藥雜志，2002(2)：37.

[5] 梁生旺.中藥制劑分析[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2002.

[6] 張廣強(qiáng).分析化學(xué)(第三版)[M].北京：學(xué)苑出版社，2001.

Extraction and Determination of the Available Contents in Saussurea Involucrate

Abstract：Objective：To determine the content of polysaccharide and the whole flavones in Saussurea involucrate. Methods：The content of polysaccharide was analysed by at 490 nm and the contents of the whole flavones at 510 nm. Results：The average content of polysaccharide was 5.07% and the average content of the whole flavones 2.06%.

Key words：Saussurea nvolucrate；Polysaccharide；The whole flavones；Vis-spectrophotometric method