探討利疸康顆粒對α－萘異硫氰酸酯誘導大鼠肝損傷的保護作用

摘 要 目的：觀察利疸康顆粒對α-萘異硫氰酸酯(ANIT)所致大鼠急性黃疸模型的退黃降酶作用。方法：將Wistar大鼠隨機分為正常組、模型組、利疸康顆粒治療組。中毒48小時腹主動脈取血，檢測數據以平均值±標準差表示，采用方差分析，相關分析進行統計學處理。結果：Wister大鼠經ANIT染毒后，經利疸康治療后，生化指標均有所下降。結論：藥對ANIT誘導的肝毒性損傷有明顯恢復作用。

關鍵詞 ANIT 肝損傷 利疸康

肝毒性損傷在臨床工作中經常會遇到，是嚴重危害人民健康的基礎性病變。本實驗以大鼠為研究對象，探討α-萘異硫氰酸酯(ANIT)誘導肝毒性損傷的機理，觀察大鼠血清ALP、AKP、TBIL的變化，同時研究中藥利疸康在ANIT誘導肝毒性損傷中有何作用。

材料與方法

實驗動物：健康雄性Wister大鼠36只，清潔級，體重200～250g，由長春醫學動物實驗中心提供。

主要試劑和儀器：ANIT(異硫氰酸α-萘酯)系Sigma產品；肝功測定試劑盒均由長春匯力生物工程技術開發中心提供；利疸康顆粒：長春中醫藥大學藥劑實驗室生產；自動生化分析儀由日本日立公司株氏會社生產，日立7070型；電子體重秤由北京科奧公司生產；離心機：北京醫用儀器廠生產。

藥物制備：取利疸康顆粒加蒸餾水溶解，配成4.05g/kg混懸液。取ANIT2g，加熱溶于100ml色拉油中，濃度2%（W/V）。

造模：將實驗動物（大鼠）隨機分為三組，空白對照組（A）、模型對照組（B）、利疸康顆粒對照組（C），每組12只大鼠。除正常組外，其余兩組先取ANIT2g，加熱溶于100ml色拉油中，濃度2%W/V，備用。造模時，每只大鼠每kg體重給予ANIT100mg，一次性灌胃中毒。所有動物（包括正常組）在ANIT中毒前及處死前分別禁食18小時，自由飲水。ANIT中毒48小時后，戊巴比妥麻醉，腹主動脈采血，用離心機分離血清后，測定各項生化指標。C組灌胃相應劑量藥物5次，即中毒前2次，中毒后6小時1次，中毒第2天2次。A、B組同時灌胃相應體積的生理鹽水，C組（利疸康顆粒組）給予4.05g/kg體重混懸液。測定大鼠TBIL、ALT、AST、ALP、GGT，比較各組動物上述指標的差異，并用t檢驗分析。

肝功能的血清生化指標測定：血清丙氨酸氨基轉移酶-賴氏比色法，血清堿性磷酸酶-磷酸苯二鈉法，血清總膽紅素-甲醇法。

統計學方法：采用SPSS10.0統計學軟件進行統計分析，結果均以X[TX-]±S表示，組間采用t檢驗。

實驗結果

實驗大鼠血清生化指標的變化：①血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）：Wister大鼠經ANIT染毒后48小時，ALT迅速升高，是空白組的5.36倍(P<0.01)，而利疸康治療組ALT下降更加迅速，與模型組比較差異有顯著性(P<0.01)，而模型組與空白組差異有顯著性(P<0.01)。②血清堿性磷酸酶(AKP)：Wister大鼠染毒48小時后，AKP增加與ALT 相似，是空白組的3.15倍(P<0.01)。而利疸康治療組AKP下降更加迅速，與模型組比較差異有顯著性(P<0.01)，而模型組與空白組差異有顯著性(P<0.01)。③血清總膽紅素（TBIL）：Wister大鼠經ANIT染毒48小時后，TBIL明顯增加，接近空白組的８倍(P<0.01)。而利疸康治療組TBIL下降更加迅速，與模型組比較差異有顯著性(P<0.01)，而模型組與空白組差異有顯著性(P<0.01)。

討 論

自 1952年一位美國專家首次用ANIT復制出肝損傷模型以來，被廣泛地用于肝損傷模型的復制［1］。ANIT誘導大鼠肝損傷模型的適用性肝毒性損傷模型的建立是完成本實驗的基礎。本實驗以血清ALT、AKP、TBIL改變為指標，確認肝損傷是否形成，并以此進行動態觀察。利用ANIT誘導動物肝損傷模型在國內已有報道［2］。

研究發現，ANIT誘導的肝損傷表現為肝實質細胞、膽管上皮細胞壞死，匯管區大量中性粒細胞浸潤。ANIT誘導的肝損傷是中性粒細胞依賴性的肝損傷，ANIT在體外能使中性粒細胞活化，進一步研究發現由活化中性粒細胞釋放的細胞因子如組織蛋白酶G、彈力蛋白酶對體外培養的肝細胞具有毒性作用。

利疸康顆粒主要藥物成分為大黃。大黃“蕩滌腸胃，推陳致新”，具有攻積通便、活血祛瘀、利膽退黃、清瀉濕熱之功效。現代醫學實驗證明，大黃能改善微循環，增加肝血流量，促進膽囊收縮，松弛膽總管括約肌，疏通毛細膽管，并具有免疫調控、穩定機體內環境、修復肝細胞等作用。大黃既能清熱利濕，又能化瘀通下，使瘀有所破，濕有所祛，熱有所走，為方中君藥。現代藥理研究證實，大黃中所含的大黃素與大黃酸能促進膽紅素、膽汁酸的分泌，使奧狄括約肌收縮，膽汁排泄增高；同時，大黃還能阻斷腸肝循環，減輕肝細胞變性與壞死［3］。ANIT于大鼠中毒48小時血清BILT達高峰，72小時開始下降。本次實驗對每只大鼠每kg體重給予ANIT100mg，一次性灌胃中毒。48小時大鼠血清ALT、AKP、TBIL明顯升高(P<0.01)，光鏡下可見肝細胞變性壞死，匯管區大量炎細胞浸潤，膽管上皮損傷伴增生性改變。

大鼠經ANIT誘導產生肝損傷，經中藥利疸康顆粒治療后，血清ALT、AKP、TBIL明顯下降。光鏡下，肝細胞、膽管上皮細胞變性壞死程度明顯減輕，匯管區中性粒細胞浸潤減少。說明中藥利疸康顆粒對ANIT誘導的肝損傷具有保護作用。

參考文獻

1 方厚華.醫學實驗動物模型.北京：軍事醫學科學院出版社，2001：325.

2 楊新波，黃正明，曹文斌，等.CCl4、D-Gal、ANIT對化學性肝損傷小鼠血清生化指標的影響.世界華人消化雜志，1998，6（1）：19-21.

3 張照蘭，郭勝，郭勇義.退黃合劑對 ANIT誘發肝內膽汁瘀積大鼠的影響.中國中醫藥信息雜志，2004，11（12）：1052-1053.