不同分離方法對(duì)臍帶血造血干細(xì)胞分離及冷凍保存效果的影響

臍帶血造血干細(xì)胞的輸注和移植治療再生障礙性貧血、白血病及對(duì)惡性腫瘤放、化療后輔助性治療已引起廣泛重視，而臍帶血在血干細(xì)胞的分離和保存是臍帶血造血干細(xì)胞輸注和移植的關(guān)鍵，本文采用3種方法分離臍帶血里白干細(xì)胞，并比較了不同方法的分離及冷凍保存效果。

材料與方法

臍帶血的采集：無菌條件下，將新生兒已經(jīng)結(jié)扎的臍帶進(jìn)行臍靜脈穿刺，取臍帶血。

冷凍保護(hù)劑：取DMSO緩慢加入1640液中搖勻，配成含20%DMSO的1640保護(hù)液。

細(xì)胞分離液：①6%右旋糖酐：分子量20～30萬。②泛影葡胺聚蔗糖淋巴細(xì)胞分離液：比重1.007。

分離：Ⅰ：離心法。Ⅱ：沉降法。Ⅲ：淋巴細(xì)胞分離液法。

凍存：樣品用程控降溫儀降溫。降溫速率為從4℃到-30℃每分鐘1℃，從-30℃到-80℃每分鐘3℃。液氮?dú)庀渲衅胶?小時(shí)，放入液氮液箱保存。

復(fù)溫：40℃水浴快速復(fù)溫。

檢測(cè)：?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)，臺(tái)盼蘭拒染率，GM-CFUC培養(yǎng)。以上檢測(cè)均用常規(guī)方法。

結(jié) 果

3種分離方法分離的臍帶血造血干細(xì)胞凍前的臺(tái)盼蘭拒據(jù)染率及凍存后的核細(xì)胞分離液法的有核細(xì)胞回收率分別是：90.4±3.8%（Ⅰ），90.6±3.3%（Ⅱ），85.4±3.4%（Ⅲ）。檢驗(yàn)表明，Ⅲ組的有核細(xì)胞回收率低于Ⅰ組（P<0.05）和Ⅱ組（P＜0.05）。凍存前臺(tái)盼蘭拒染率分別是：Ⅰ組98.2±0.8%、Ⅱ組97.9±0.8%、Ⅲ組98.2±0.9%，3組比較亦無顯著差別。

GM-CFU-C回收率分別是：Ⅰ組80.5%，Ⅱ組81.6%，Ⅲ組61.2%。Ⅲ組的GM-CFU-C回收率低于Ⅰ組和Ⅱ組（P＜0.05）。

討 論

臍帶血造血干細(xì)胞移植已引起廣泛重視，國外亦有人對(duì)其采集及不同條件下造血干細(xì)胞的存活情況進(jìn)行了研究。本文討論的3種方法，Ⅰ組（離心法）雖然凍存后有核細(xì)胞回收率及GM-CFU-C的回收率較高，但分離出的細(xì)胞總數(shù)較少。Ⅲ組（淋巴細(xì)胞分離液）兩個(gè)回收率較低。而Ⅱ組（沉降法）分離出的單個(gè)核細(xì)胞數(shù)量較多，兩個(gè)回收率都比較高，是分離臍帶血造血干細(xì)胞比較理想的方法。