藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)——藥物血漿半衰期的測(cè)定

【摘要】目的：探討藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法——藥物血漿半衰期的測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法改進(jìn)。方法：通過(guò)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，將藥物血漿半衰期的測(cè)定的實(shí)驗(yàn)中的家兔采血方法由耳緣靜脈切口取血改為耳中央小動(dòng)脈取血。結(jié)果：改進(jìn)后的實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單易行，可達(dá)到準(zhǔn)時(shí)、多次、足量采血的實(shí)驗(yàn)要求，明顯提高了教學(xué)效率，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確、穩(wěn)定。

【關(guān)鍵詞】改進(jìn)；實(shí)驗(yàn)方法；藥物血漿；半衰期

【中圖號(hào)】【文獻(xiàn)標(biāo)示碼】A【文章編號(hào)】1005-1074(2008)11-0244-01

11材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康的家兔1只，雌雄不拘，體重為2～4千克。

1.1.2實(shí)驗(yàn)器材、藥品及試劑7號(hào)頭皮針、三通管、注射器、試管；10%水楊酸鈉溶液、10%三氯化鐵溶液、500U/ml肝素鈉生理鹽水溶液；分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康母鶕?jù)絕大多數(shù)藥物在體內(nèi)按一級(jí)動(dòng)力學(xué)消除的規(guī)律，用給藥后各時(shí)間點(diǎn)測(cè)出的家兔血藥濃度數(shù)據(jù)測(cè)定藥物血漿半衰期。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.2.1傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法取試管3支，編號(hào)，各管加入10%的三氯醋酸3.5ml 。取家兔一只，稱重，以刀片劃破其耳緣靜脈，讓其自然滴血15~16滴（約1ml ），置于1號(hào)試管中，攪拌均勻，靜置。從家兔耳緣靜脈注射10%的水楊酸鈉溶液200mg/kg ，待藥液全部注入后，每隔30分鐘，以刀片劃破其耳緣靜脈，讓其自然滴血各15~16 滴，置于2號(hào)和3號(hào)試管中，攪拌均勻。將1、2、3 號(hào)試管同時(shí)離心，速度為3000 轉(zhuǎn)/ 分，離心時(shí)間為5 分鐘。將血漿蛋白沉淀分離，制成清涼的去蛋白血濾液。分別吸取三管中的上清液3 ml ，依次置于另三個(gè)編號(hào)的試管中，每管加入10%的三氯化鐵溶液0.5ml ，搖勻，若血濾液中含水楊酸，即顯紫色。以1 號(hào)管為對(duì)照，用分光光度計(jì)在520nm的波長(zhǎng)下測(cè)定給藥后各管上清液的光密度值。在半對(duì)數(shù)座標(biāo)紙上，以時(shí)間為橫座標(biāo)(等方格)，血藥濃度為縱座標(biāo)(對(duì)數(shù)值)，將測(cè)算的濃度值作點(diǎn)連線，即為藥時(shí)曲線，在此線上找出血藥濃度下降一半所對(duì)應(yīng)的時(shí)間即為該藥的血漿半衰期。

1.2.2.2改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法取試管7支，按0～6編號(hào)，在0號(hào)管加入生理鹽水3ml，其余各管均加入生理鹽水4ml。取家兔一只，稱重，將家兔固定于兔盒中。使用充滿肝素的7號(hào)頭皮針從家兔耳中央的小動(dòng)脈插入 ，用輸液夾固定。從三通管往小動(dòng)脈方向注入500U/ml肝素鈉生理鹽水溶液1ml/kg，致使家兔全身肝素化，以抗凝。用連接在三通管上的注射器反復(fù)抽吸3～5次后，從三通管處（動(dòng)脈方向）準(zhǔn)確抽取藥前血0.2ml于1號(hào)管中作為藥前對(duì)照管。用注射器從家兔耳緣靜脈注入10％水楊酸鈉溶液2ml/kg。分別于給藥后5、10、20、40、60分鐘時(shí)，從三通管(動(dòng)脈方向)準(zhǔn)確吸取血樣0.2ml于2、3、4、5、6號(hào)試管中，搖勻，靜置，記錄取到血樣的時(shí)間。因三通管內(nèi)含有上次殘存血樣，所以每次取血前應(yīng)用注射器反復(fù)抽吸3～5次。將各試管離心速度為3000 轉(zhuǎn)/ 分，離心時(shí)間為5分鐘。精確吸取離心后的上清液3ml分別放入另一組編好號(hào)的試管中，每管加10％三氯化鐵溶液0.2ml，搖勻，使其顯色。以0號(hào)管為對(duì)照，用分光光度計(jì)在520nm的波長(zhǎng)下測(cè)定給藥后各管上清液的光密度值。在半對(duì)數(shù)座標(biāo)紙上，以時(shí)間為橫座標(biāo)(等方格)，血藥濃度為縱座標(biāo)(對(duì)數(shù)值)，將6次測(cè)算的濃度值作點(diǎn)連線，即為藥時(shí)曲線，在此線上找出血藥濃度下降一半所對(duì)應(yīng)的時(shí)間即為該藥的血漿半衰期。

2結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)用傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法與改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法均可達(dá)到測(cè)定藥物血漿半衰期的實(shí)驗(yàn)效果，但改進(jìn)后的實(shí)驗(yàn)?zāi)苊黠@縮短實(shí)驗(yàn)所需時(shí)間，減小實(shí)驗(yàn)誤差，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也更準(zhǔn)確、穩(wěn)定。

3討論

藥物血漿半衰期的測(cè)定實(shí)驗(yàn)，是藥理學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一項(xiàng)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，但因?yàn)檫@個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象為家兔，對(duì)學(xué)生動(dòng)手操作能力要求較高。在傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)中的家兔耳緣靜脈切口采血的方法容易造成家兔多次采血損傷、甚至切口過(guò)深，而且采血量并不能次次都達(dá)到1ml，若用物理方法（如涂搽酒精、用手術(shù)臺(tái)燈烘烤等）促進(jìn)其出血?jiǎng)t容易延誤采血時(shí)間點(diǎn)，因此家兔耳緣靜脈切口采血的方法并不能達(dá)到令人滿意的效果。而用家兔耳中央小動(dòng)脈采血的方法代替家兔耳緣靜脈切口采血的方法，改進(jìn)后的實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單易行，學(xué)生只需熟練掌握家兔耳緣靜脈注射的操作，也避免了反復(fù)切割家兔耳朵造成家兔多次采血損傷、切口過(guò)深、延誤采血時(shí)間點(diǎn)的缺點(diǎn)，用此法采血時(shí)只需在7號(hào)頭皮針上連接一個(gè)三通管，再連接一個(gè)1ml注射器，即可隨時(shí)通過(guò)打開(kāi)三通管采血、關(guān)閉三通管停止采血，并不會(huì)出現(xiàn)采血量不足的問(wèn)題，而且采血時(shí)間可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求隨時(shí)調(diào)整，這就達(dá)到了準(zhǔn)時(shí)、多次、足量采血的實(shí)驗(yàn)要求，因此家兔耳中央小動(dòng)脈采血的方法在實(shí)踐中取得了令人滿意的效果，明顯提高了教學(xué)效率，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確、穩(wěn)定。

4參考文獻(xiàn)

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