ＨＰＬＣ法測定飲料中亮藍含量的不確定度分析

測量不確定度在檢測、校準和合格評定中具有重要作用，中國實驗室國家認可委員會(CNAL)要求經CNAL認可的檢測實驗室必須建立測定不確定度的評定程序，并有能力對每項數值要求的測量結果進行不確定評定^[1]。為了在測量數據的處理、測定結果的表達和測量結果質量評定等方面與國際接軌，根據“測量不確定度評價和表示”(JJFl059-1999)^[2]，對高效液相色譜法(HPLC)測定飲料中亮藍含量的不確定度的測定和評定，分析了使用外標法單點定標測定樣品的不確定度計算方法和步驟，建立了高效液相色譜法測定方法的評定方式，通過對測量結果的不確定度評定，了解了測定過程中不確定度的主要來源，從而對在檢測過程中易產生不確定度的環節加以重視，確保檢驗結果的可靠性。

資料與方法

（1）檢測方法：采用GB/T5009.35-2003方法^[3]測定飲料中亮藍含量，由國家標準物質中心提供的編號為GBW(E)100001a亮藍標準溶液0.50mg/ml，經稀釋10倍后得到0.050mg/ml，吸取5.00ml樣品，加水定容至50ml，經0.22μm濾膜過濾，進高效液相色譜儀測定，記錄其峰面積。用單點法進行定量測定。

（2）測量數學模型：

X=C0AxV₁A0×V₂ 式中X：樣品中亮藍的含量，mg／ml；C0：標準使用溶液濃度，mg／ml；V₁：樣品取樣量，ml；Ax：樣品溶液的峰面積；A0：標準溶液的峰面積；V₂：樣品稀釋液總體積，ml。

（3）不確定度計算公式：按不確定度傳播律，由公式X=C0AxV₁A0×V₂ 導出方差：

（4）確定不確定度的來源：待測樣品不確定度由以下三個方面組成：①樣品稀釋引起的U(V₂)，包括50ml容量瓶允差、容量瓶刻度讀數、容量瓶校準和使用溫度引起的不確定度。樣品取樣引起的U(V₁)，包括5ml移液管允差、5ml移液管讀數重復性、移液管校準和使用溫度引起的不確定度。②進樣液中濃度的U（X），包括樣品重復測定、標準重復測定以及標準溶液引起的不確定度。而標準溶液引起的不確定度又由5ml移液管、標準儲備液和標準使用液體積組成。

（5）計算標準不確定度：第一，標準溶液引起的不確定度U(C0)/C0由國家標準物質中心提供的編號為GBW(E)100002亮藍標準溶液0.50mg/ml，經純水稀釋10倍后得到0.050mg/ml，即用5ml單標線移液管取5ml標準溶液稀釋到50ml，現分別算出由標準溶液儲備液，5ml單標線移液管，50ml容量瓶引起的不確定度。①由標準溶液儲備液引起的不確定度［U(Cs)］亮藍標準溶液由國家標準物質研究中心提供(編號：GBW(E)100002)，其證書上給出標準物質的相對不確定度為1％，取K=2，則：U(Cs)/Cs=0.5％

②由5ml A級單標移液管引起的不確定度［U（Vs）］：

a.校準：A級5ml單標移液管的容量允許誤差為±0．02ml，取K=3，則U(Vs1)

=0．02/3=0．012ml；

b.重復性：A級5ml單標移液管讀數重復性為±0．01ml，取K=3，則U(Vs2)

=0．01/3=0．006ml；

c.溫度：由移液管校準溫度與使用溫度差別引起的不確定度U(Vs3)在實驗中測得水溫Tt=26℃，容量器皿校準溫度為T20=20℃。

95％置信概率的正態分布取K=2，則：

③由50mlA級單標線容量瓶引起的不確定度［U（V0）］

校準：50mlA級單標線容量瓶的容量允許誤差為±0．10ml，取K=3，則U（V01）=0．10×3=0．06ml；

重復性，級50ml單標線容量瓶讀數重復性為±0．02ml，取K=3，則U（V02）=0．02×3=0．012ml；

溫度：由容量瓶校準溫度與使用溫度差別引起的不確定度U（V03）在實驗中測得水溫Tt=26℃，容量器血校準溫度為T20=20℃。

95%置信概率的正態分布取K=2，則：

②樣品溶液重復進樣5次測定峰面積如下：

平均值Ax=332518

樣品溶液峰面積的標準不確定度按貝塞爾公式計算

第三，由樣品取樣量引起的不確定度U（V₁）

與5.1.2標溶液引起的不確定度相同，即：U（V₁）/V₁=0.27%；

第四，由樣品稀釋引起的不確定度U（V₂）

與5.1.3標準溶液引起的不確定度相同，即：U（V₂）/V₂=0.14%；

（6）合成相對標準不確定度Uc（x）rel

結 論

用高效液相色譜法測定飲料中亮藍的含量，當置信概率P=95％時，則擴展相對不確定度為1.56×10-2。其不確定度主要由三部分組成，即樣品取樣引起的不確定度、樣品定容引起的不確定度和單點校準引起的不確定度。其中以單點校準引起的不確定度分量最大。單點校準引起的不確定度主要由三部分組成，其中標準使用液引起的不確定度分量產生主要影響，重復進樣引起的不確定度分量的影響次之。

參考文獻

1 中國實驗室國家認可委員會．實驗室認可與管理基礎知識.北京：中國計量出版社，2003．

2 測量不確定度評定和表示．中華人民共和國國家計量技術規范 JJFl059-1999．北京：中國計量出版社，2000．

3 GB/T5009-2003．食品中合成著色劑的測定．北京：中國標準出版社，2004.

注：“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內容請以PDF格式閱讀原文。