高效液相色譜法測定復(fù)方煙酰胺沙星軟膏中煙酰胺含量

摘 要 目的：建立高效液相色譜法測定復(fù)方煙酰胺沙星軟膏中的煙酰胺的含量。方法：采用ThermoExtend-C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；以甲醇-水（30∶70）為流動相；檢測波長230nm；流速1.0ml/分；柱溫：40℃。結(jié)果：煙酰胺在10.0～60.0μg/ml濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，r=0.99995（n=6）；平均回收率為99.95%，RSD%=1.5%（n=6）。結(jié)論：方法結(jié)果準(zhǔn)確，簡便，可靠，可用于復(fù)方煙酰胺沙星軟膏中煙酰胺的含量測定。

關(guān)鍵詞 復(fù)方煙酰胺沙星軟膏 煙酰胺 含量測定 高效液相色譜法

復(fù)方煙酰胺沙星軟膏為梅縣慢性病防治院自制軟膏制劑，其療效顯著，多年來為病者廣為使用的外用軟膏。但一直由于沒有一個可行的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)而影響其質(zhì)量穩(wěn)定。本文從質(zhì)量控制方面進(jìn)行了研究，探討了其主藥成分煙酰胺的質(zhì)量檢驗(yàn)方法。

本品以煙酰胺為主藥，并含有西咪替丁、氧氟沙星等成分，由于其紫外吸收存在較大干擾，故選用高效液相法測定煙酰胺含量。

儀器與試藥

儀器：日本島津LC-10AD型高效液相色譜儀，編號C20293310148J2。檢測器：SPD-10A，編號C20333307271KG。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，編號Thermo Extend-C18，4.6mm×150mm，5μm。

試藥：復(fù)方煙酰胺沙星軟膏(梅縣慢性病防治站，批號060901、060904、060906)；煙酰胺對照品(中國藥品生物制

品檢定所提供，批號10115-0001)；甲醇(天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，色譜純試劑)。

方法與結(jié)果

色譜條件：柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，編號Thermo Extend-C18，4.6mm 150mm，5μm。泵型號：LC-10AD，編號C20293310148J2。檢測器：SPD-10A，編號C20333307271KG。流動相：甲醇-水（30∶70），進(jìn)樣體積20μl。流速：1.0ml/分。檢測波長：230nm。柱溫∶40℃。

系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：經(jīng)過采用上述下規(guī)定的色譜條件測定，并用色譜圖對比，供試品與對照品在相應(yīng)時(shí)間內(nèi)有吸收峰出現(xiàn)，分離良好，分離度為2.5，理論指數(shù)為2800。陰性在此區(qū)間無吸收峰。

溶液的制備：①樣品溶液的制備：取本品適量（約相當(dāng)于煙酰胺5mg），精密稱定。置燒杯中，加流動相適量。水浴上加熱。不斷攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶重，放冷加流動相稀釋至刻度，濾過，并用0.45μm的微孔濾膜濾過，作為供試品。②對照品溶液的制備：取煙酰胺對照品10mg，精密稱定，置100ml量瓶重，加流動相溶解并稀釋到刻度，搖勻，再精密量取上述溶液25ml，置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

線性關(guān)系回歸：取煙酰胺對照品（批號10115-0001，由中國藥品生物制品檢定所提供）9.99mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，分別精密量取對照品儲備液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml分別置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻?yàn)橄盗袠悠?，分別取20μl注入色譜儀中，記錄色譜圖，以峰面積(A)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)濃度(C，μg/ml)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：C=7.8×10-6A-0.50，r=0.99995（n=6），表明煙酰胺在10～60μg/ml濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系^[1]。

陰性干擾試驗(yàn)：取缺煙酰胺的樣品，精密稱取0.5g，照上述方法制備陰性對照液，精密量取20μl注入色譜儀.結(jié)果在煙酰胺相應(yīng)的保留時(shí)間位置上無干擾峰出現(xiàn)。

精密度試驗(yàn)：精密量取樣品測定溶液連續(xù)進(jìn)樣4次，記錄峰面積，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%為0.1%（n=4），表明方法精密度好。

樣品測定及穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取同一批號的供試品（批號：060901）溶液分別于0、2、4、6、8、12小時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果煙酰胺峰面積RSD為0.8%，表明12小時(shí)內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同一批供試品（批號：060901）6份，按含量測定項(xiàng)下方法測定，結(jié)果該批樣品煙酰胺平均含量為92.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%為0.71%（n=6）。表明該方法重復(fù)性好。

煙酰胺回收率試驗(yàn)：精密量取樣品溶液5ml和對照品儲備溶液2ml加入10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，取20μl注入色譜儀中，記錄圖譜，計(jì)算回收率（見表1）。

討 論

本研究對復(fù)方煙酰胺沙星軟膏的質(zhì)量控制方法進(jìn)行了全面研究。其中重點(diǎn)研究了該制劑中主藥成分煙酰胺的含量測定方法。本研究用高效液相色譜法，選擇230nm為檢測波長，用外標(biāo)法計(jì)算含量，方法精密度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性均較理想。且輔料無干擾，故可作為該制劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)

1 中國藥典.二部，2005年版.