大動物門靜脈高壓模型制作的研究進展
2008-12-31 00:00:00林偉箭廖清華
中國社區醫師·醫學專業 2008年9期
摘 要 回顧大動物門脈高壓模型的研究進展，分析不同制備方法的優缺點，以期對大動物門脈高壓模型的研究有所幫助。
關鍵詞 門靜脈高壓 動物模型 文獻綜述
一種理想的大動物門脈高壓動物模型，對于評價外科治療效果及臨床基礎研究，具有不可忽視的作用，但目前尚沒有一種較理想的大動物門脈高壓模型制備方法。
肝前型門脈高壓模型的制作
門-腔靜脈吻合制作模型。門-腔靜脈吻合法：是通過將動物下腔靜脈與門靜脈吻合，制作門靜脈高壓模型。1976年Saku等提出用血流量較大的下腔靜脈與門靜脈吻合制作犬門靜脈高壓癥模型，但效果不理想。Dennis將下腔靜脈和門靜脈主干行側側吻合，于吻合口上方的門靜脈內置入1個含瓊脂環的鋼圈起固定作用，并在下腔靜脈與門靜脈的吻合口上方雙重結扎腔靜脈，使其腔靜脈下方的血液完全注入門靜脈系統。此法3～6周后全部成模，無死亡。門靜脈壓力明顯增高，食管胃底靜脈叢呈不同程度曲張，肝臟組織學改變不明顯。該模型為食管胃底靜脈曲張及內窺鏡注射硬化劑治療出血的研究提供了便利條件。2003年徐氏［1］等采用改良Stiegmann方法，對實驗犬門靜脈結扎，使門靜脈管徑縮小40%~60%，同時在腎上水平橫斷下腔靜脈，近端關閉，遠端與門靜脈行端側吻合。建立穩定的門靜脈高壓食管靜脈曲張動物模型后，門靜脈壓力由140mm構櫞酸葡萄糖柱上升到326mm構櫞酸葡萄糖柱。
縮窄門靜脈主干制作模型。縮窄門靜脈主干法：采用縮窄門靜脈主干制作門脈高壓模型。具體是將門靜脈游離，把1個20號鈍頭直針縱向置于門靜脈主干旁，用0～3號絲線把門靜脈與直針一并結扎2道，第1道位于門靜脈主干近左、右分支處，第2道位于與脾靜脈交接處下方，結扎后抽出直針，關腹。術后10～15天可全部成模，且無死亡。國內學者李氏等［3］對健康成年犬，通過行縮窄門靜脈主干1/2加絲線慢性栓塞術，建立犬肝前性門靜脈高壓癥（PHT）模型。
肝硬化型門脈高壓模型的制作
四氯化碳（CCL4）誘導肝硬化門脈高壓模型：苯巴比妥可使細胞色素P-450活性增強，滑面內質網增生。細胞色素P-450是肝微粒體最重要的藥物代謝酶，故合用苯巴比妥可增加肝細胞對CCL4的敏感性。
二甲基亞硝胺（DMNA）誘導肝硬化門脈高壓模型：DMNA主要在肝內微粒體藥物氧化酶系統進行氧化代謝激活，即由DMNA去甲基酶激活而進行氧化，如N-脫羥基生成甲醛，或產生活性甲基和酯酰烷基亞硝胺，后者再氧化成甲烷亞硝胺。由于這些中間代謝產物與機體組織中各種生物大分子物質如結構蛋白、血清蛋白、酶和核酸（包括DNA和RNA）等結合，改變其正常的理化特性和生物學活性，導致肝細胞壞死，造成彌漫性、特異性損害。DMNA制備肝硬化模型穩定，呈進行性肝損害，與人類肝硬化特征相似，國外尚有報道用該模型進行肝硬化機制及篩選抗纖維化藥物的研究。
膽總管結扎致膽汁性肝硬化模型（BCM）：BCM法是通過結扎、切斷動物的肝總管，造成膽道完全梗阻、膽汁排出受阻、膽管壓力增高、肝內膽汁瘀積，從而引起肝細胞分泌功能障礙，導致肝細胞壞死、增生，肝硬化形成。
門靜脈末梢栓塞制備門脈高壓
該模型適合于竇前型肝硬變與肝硬變血流動力學改變及門體分流的研究。1985年大西久仁彥等用大腸桿菌成功復制出犬靜脈高壓癥模型。他們采取以1%福爾馬林殺死非致病性大腸桿菌，再將其煮沸2.5小時，使其只具有O抗原；將2mg此種蛋白與1mlFreund佐劑行肌肉注射，2周后制得效價為1∶512～1∶1024的O抗體血清，將該血清和被殺死的大腸桿菌1.5mg/ml以2∶3的比例混后置于50℃培養箱內孵育2小時，再把此種混合液由腸系膜上靜脈插管注入到門靜脈，劑量為4ml/kg，2周內注入7～10次，1個月后再注入1次，2.5個月后即可成模。成模后門靜脈壓力顯著增高。病理示門靜脈末梢纖維化、萎縮及狹窄。該模型適用于特發性門靜脈高壓癥的研究。國內學者陳軍等采用葡聚糖微球制成豬門靜脈高壓癥模型。實驗豬選取左上腹肋緣下斜切口，進腹后尋找脾靜脈分支，置入16GF單腔靜脈導管，在DSA機下調整導管至門靜脈主干。妥善固定導管，逐層關腹。導管另戳孔引出，位置平腰椎上緣。通過單腔靜脈導管注射葡聚糖微球，葡聚糖微球應用按10m/kg體重，5天1次，共4次。術后常規喂養。注射葡聚糖微球前后分別測定門靜脈壓力，同時作肝功能檢查。門靜脈的基礎壓力為9.33±0.33cmH2O，術后第22天壓力為24.17±2.24cmH2O，與門靜脈基礎壓力相比差異有統計學意義（P<0.01）。門脈高壓癥形成后（術后第22天），開腹取肝臟做病理學檢查。
肝后型門脈高壓模型的制作
肝后型門脈高壓大動物模型目前制作的人較少。其方法是：選取健康無病的華北家犬3只，分別標號，將實驗前各項觀察指標測定記錄完備后，全麻下開腹探查記錄肝脾大小門脈系統各血管形態，測定門靜脈壓力。充分顯露第二肝門，將肝左、中、右三條出肝靜脈在下腔靜脈進入下腔入口處平面分別結扎，人工造成急性布德恰銳氏綜合征。關腹后，使狗處于麻醉狀態下，每小時重復檢測各項指標1次。
參考文獻
1 徐輝，陳虹彬，蔣明德，等.合金支架治療食管靜脈曲張出血的實驗研究.西南國防醫藥，2003，13(4)：358-360.
2 李宗芳，劉效恭，王英.縮窄門靜脈主干1/2加絲線慢性栓塞術制備犬門靜脈高壓癥模型.中華實驗外科雜志，1997，14：314-315.
3 李曉青，董蕾羅，金燕.不同靜脈灌注量對門靜脈高壓失血性休克犬血流動力學的影響.中華肝臟病雜志，2002，10(5)：374-377.
