蕎麥多糖的提取方法及含量測定

摘要:采用正交設計試驗，以蕎麥多糖得率為考察指標，對影響蕎麥多糖提取方法的因素進行了探討，得出了蕎麥多糖提取的優化條件，并測定了貴州六盤水3種苦蕎麥種子多糖的含量。結果表明，蕎麥多糖提取的最佳條件為:5%苯酚1 mL，濃硫酸7 mL，反應溫度40℃，反應時間20 min。

關鍵詞:蕎麥;多糖;提取工藝;正交設計

中圖分類號:S517;Q539.S37 文獻標識碼:B 文章編號:0439-8114(2008)08-0955-02

蕎麥(Fagopyrum esculentum Moench)，屬于蓼科(Polygonaceae)蕎麥屬(Fagopyrum Gaerth)，雙子葉一年生作物。生產上栽培的主要有2種，甜蕎麥(F.esculentum Moench)和苦蕎麥(F.esculentum(L.)Gaerth)也稱韃靼蕎[1]。大量研究表明，植物多糖具有增強機體免疫功能#65380;抗腫瘤#65380;抗病毒#65380;抗衰老#65380;降血糖#65380;刺激造血等多種生物學功效，植物多糖生物學功效的研究已成為當代生物學的熱門領域[2]。目前，各地對蕎麥生物類黃酮的研究報道較多[3，4]，但測定蕎麥中多糖含量的文章鮮見報道。我們以貴州六盤水生產的野生苦蕎麥種子為材料，用苯酚-硫酸法測定[5]，采用正交設計L9(34)優選顯色條件，建立了蕎麥多糖含量的測定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

①紫外分光光度儀(UV-9100，北京瑞利公司)，電子天平(sartorius BS110S，北京賽多利斯儀器系統有限公司)，高速萬能粉碎機(FW80型，天津泰斯特儀器有限公司)，電熱恒溫水浴鍋(DK-98-1型，天津泰斯特儀器有限公司)。②濃硫酸#65380;苯酚#65380;乙醇#65380;無水乙醇#65380;鋁片均為分析純;無水葡萄糖#65380;碳酸氫鈉均為分析純，經105℃干燥備用;蕎麥種子取自六盤水職業技術學院農業工程系;水為2次蒸餾水。③5%苯酚溶液配制:取苯酚100 g，加鋁片0.1 g與碳酸氫鈉0.05 g，蒸餾182℃餾分，吸取此餾分10 mL加水至200 mL棕色容量瓶中，即得。

1.2 溶液配制

①對照品溶液:精確稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖0.100 0 g，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精確吸取上述溶液1.0 mL，置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。精確吸取上述溶液3.0 mL，置10 mL容量瓶中，加入5%苯酚1 mL，混勻，再加入濃硫酸7 mL并計時，加水至刻度，旋渦混合5 min，放置1 min，加水至刻度，混勻，室溫20 min，再加水至刻度，備用。②供試品溶液:精確稱取蕎麥種子粉末1.0 g，置圓底燒瓶中，加水100 mL，加熱回流1 h，趁熱用脫脂棉濾過，如上重復1次，合并2次濾液，水浴濃縮后，移至100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。精確吸取2 mL加無水乙醇8 mL，旋渦混合，離心，取沉淀，加水溶解，置10 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，精確吸取3 mL，自“加5%苯酚1 mL”起，操作同上，備用。

2 結果與分析

2.1 最大吸收波長的選擇

分別吸取上述對照品溶液和供試品溶液，經苯酚-硫酸顯色后，兩者在200~600 nm做全波長掃描，確定最大吸收波長為485 nm。

2.2 顯色條件的選擇

參考文獻[5]，確定苯酚濃度為5%，以顯色劑苯酚用量#65380;硫酸用量及反應時間，采用正交試驗設計優選最佳顯色條件，因素與水平見表1。

精確吸取0.250 0 mg#8226;mL-1葡萄糖溶液1.0 mL，共9份，分別置于10 mL容量瓶中，按正交表L9(34)的設計試驗，分別加入不同量5%苯酚，旋渦混合5 min，放置1 min，再分別加入不同量的濃硫酸置于不同溫度，水浴鍋中保溫不同時間，取出，室溫下放置20 min，再加水補至刻度，混勻，于485 nm處測定吸光度，計算結果見表2#65380;表3。

由表2#65380;表3吸收度的極差及方差分析表明，各因素作用主次為B>A>D>C，其中B#65380;A#65380;D因素有極顯著差異(P<0.01)，C因素差異顯著(P<0.05)。最佳工藝為A1B3C2D1，即最佳顯色條件為5%苯酚1 mL，濃硫酸7 mL，反應溫度40℃，反應時間20 min。

2.3 線性范圍

精確量取0.500 0 mg#8226;mL-1葡萄糖溶液0.0， 1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，配成不同濃度的對照品系列溶液。于485 nm波長處測定吸收度，以吸收度(A)為縱坐標，以濃度(C)為橫坐標，求得回歸方程，繪制工作曲線。

回歸方程:A=0.007 097x-0.050 23，r=0.994 0

2.4 顯色穩定性

精確量取葡萄糖對照品溶液和供試品各3 mL，顯色后，每隔5#65380;10 min測定1次吸收度，共測16次。結果表明，對照品溶液和供試品溶液在顯色40 min后，吸收度達到最高值，且在2.5 h內保持穩定。

2.5 加樣回收率

精確移取同一批提取物2 mL，置于10 mL容量瓶中，分別精確加入葡萄糖對照品，并照標準曲線制備方法測定，結果見表4。可見，優選出的提取工藝重復性好，回收率高，操作簡單，結果可靠。

2.6 3種樣品含量測定結果

利用優選的提取工藝對3種苦蕎麥種子進行多糖的提取和含量測定，結果見表5。

3 討論

目前應用較多的多糖含量測定方法是斐林法#65380;蒽酮法，但由于影響顯色的因素較多，難以選擇最佳試驗條件，本試驗采用正交試驗方法進行了多糖含量測定條件的優選，苯酚-硫酸法顯色穩定，靈敏度高，快速#65380;簡便且重現性好，為以后的進一步研究提供了一定的試驗基礎。

參考文獻:

[1] 林汝法.中國蕎麥[M].北京:中國農業出版社，1994.1-2.

[2] 楊洪彩，張月明，鄒紅云，植物多糖藥效研究進展[J].地方病通過報，2004，19(2):88-90.

[3] 王玉珠，張 萍，李紅寧，等.十種栽培苦蕎麥生物類黃酮含量的比較研究[J].食品研究與開發，2007，(9):121-123.

[4] 李紅寧，王玉珠，張 萍，等.六種栽培甜蕎麥生物類黃酮含量的比較研究[J].湖北農業科學，2007，(5):831-832.

[5] 陳 萍，路 波，成東生.苦竹葉多糖定量分析方法[J].藥物分析雜志，2006，(3):319-321.