醒腦靜注射液對大鼠創傷失血性休克合并內毒素血癥模型的保護作用

摘 要: 目的：研究醒腦靜注射液對創傷失血性休克復合內毒素血癥模型大鼠的保護作用。方法：制作大鼠創傷失血性休克合并內毒素血癥動物模型，經靜脈給予醒腦靜注射液干預治療，檢測血清中TNF-α、IL-1β、IL-10含量的變化及大鼠肺組織的病理改變。結果：醒腦靜注射液干預治療組大鼠血清中TNF-α、IL-1β的水平較致傷組降低(P＜0.05)，血清中IL-10的含量較致傷組明顯升高(P＜0.01)，大鼠肺組織炎癥病理改變較致傷組7明顯減輕。結論：醒腦靜注射液對大鼠創傷失血性休克合并內毒素模型有明顯保護作用。

關鍵詞: 醒腦靜 創傷失血性休克

資料與方法

主要試劑儀器和實驗動物：TNF-αELISA試劑盒、LPS、醒腦靜注射液、IL-1βELISA試劑盒、IL-10 ELISA試劑盒、全自動酶聯儀、SD大鼠。

創傷失血性休克合并內毒素打擊大鼠動物模型的制作：SD大鼠18只，雌雄不限，體重250～300g，標準條件喂養，參照Fan等［1］方法和Chaudry［2］方法加以改進，大鼠用20%烏拉坦(7ml/kg)肌肉麻醉，氣管切開置14G導管，頸動脈、頸靜脈分別置24G導管，用特制鉗鉗夾致大鼠雙側股骨骨折及周圍軟組織損傷，在20分鐘內自頸動脈放血致休克1小時，維持平均動脈壓(MAP)45mmHg，回輸失血及2倍于失血量的乳酸鈉林格氏液，液體復蘇2小時后由頸靜脈給予LPS(1.4mg/kg)，通過多導生物信號傳導儀監測實驗動物的心率和平均動脈壓。

實驗分組：動物以完全隨機方式分為三組，每組6只，A組為對照組，B組為創傷失血性休克合并內毒素血癥組，C組為醒腦靜干預治療組，即在創傷失血性休克合并內毒素打擊的模型中，于內毒素給予前30分鐘經頸靜脈給予醒腦靜注射液(10ml/kg)干預治療。

血清TNF-α、IL-1β、IL- 10的檢測：于LPS給予后90分鐘，由頸動脈取血置于試管中，離心(3000轉/分)10分鐘，收集上層血清，嚴格參照ELISA試劑盒說明書操作步驟檢測血清中TNF-α、IL-1β、IL-10的含量。

病理學檢查：于LPS給予后4小時取大鼠肺組織，按常規方法制作HE染色石蠟病理切片，光鏡下觀察病理結果。

統計學分析：采用完全隨機設計資料，所得數據用均數±標準差(X±s)表示，用統計軟件SPSS10.0做單因素分析，兩組間的顯著性比較用t檢驗。

結 果

醒腦靜注射液治療對創傷失血性休克合并內毒素血癥大鼠血清細胞因子TNF-α、IL-1β、IL- 10含量的影響：TNF-α在 B組血清中的含量較A組明顯升高，C組血清中TNF-α的含量較B組明顯下降。IL-1β在 B組血清中的含量較A組明顯升高，C組血清中IL-1β的含量較B組明顯下降。IL-10在A組血清中的含量極微，幾乎測不出，B組血清中IL-10的含量較A組明顯升高，C組血清中IL-10的含量較B組有明顯的升高。見表1。

醒腦靜注射液對創傷失血性休克合并內毒素血癥大鼠肺組織病理的影響：A組為對照組肺組織；B組肺泡間隔較A組明顯增寬，肺泡腔內有大量炎性細胞及漿液滲出，毛細血管有充血擴張表現；C組肺泡間隔無明顯增寬，肺泡腔內僅有少量炎性細胞及漿液滲出，毛細血管無明顯充血擴張表現。

討 論

TNF-α、IL-1β是兩種重要的促炎細胞因子。本實驗中，B組血清TNF-α、IL-1β含量較對照組明顯升高，給予醒腦靜注射液干預治療后血清中這兩種因子的水平都明顯下降，說明醒腦靜注射液可明顯降低炎癥反應中TNF-α、IL-1β的血清含量，緩解由這些炎癥因子引起的各種病理生理改變。

本實驗中，A組血清IL-10的含量極微，幾乎測不出，B組血清中IL-10的含量較對照組明顯升高，給予醒腦靜注射液治療后，血清中IL-10的含量較B組明顯升高。IL-10作為抑炎因子在免疫抑制及內毒素的耐受中起重要作用，可下調巨噬細胞對多種刺激的反應，抑制單核巨噬細胞誘導產生TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8及粒細胞集落刺激因子(GM-CSF)。 B組中肺組織炎性水腫非常明顯，肺泡內有明顯的炎性滲出，肺泡間隔增厚，充血明顯，C組肺組織病理改變明顯減輕，說明醒腦靜注射液對該模型大鼠重要臟器有明顯保護作用。

醒腦靜注射液是中藥復合制劑，由麝香、梔子、郁金、冰片等組成，在中西醫結合治療危重病的臨床實踐中，醒腦靜的應用比較廣泛，并取得了較好的臨床效果。曾有研究顯示，醒腦靜注射液在體外可以抑制多種細菌生長，可以減輕腸黏膜的再灌注損傷，保護腸黏膜的屏障功能，防止腸道內毒素入血［3］。本實驗中的創傷失血性休克合并內毒素血癥動物模型模擬了臨床上嚴重創傷感染、休克后體內炎性因子大量釋放的病理狀態，實驗結果表明應用醒腦靜注射液對該模型有明顯的保護作用，這可以為臨床中應用醒腦靜注射液搶救急危重患者提供實驗參考依據。

參考文獻

1 Fan J，Shek PN，Suntress ZE，et al:Liposome antioxidants provide prolonged protection against acute respiratory distress syndrome.Surgery 2000，128:332-338.

2 Chaudry I H.Rat and mouse models of hypovolumic-traumatic shock.In:Schlag G， Fedl H(ed):Pathophysiology of shock， sepsis and organ failure.Germany:Springer-Verlag Berlin Heidelberg，1993，371-376.

3 張路晗，向金蓮，程睿，等.醒腦靜注射液的藥效學研究.華西藥學雜志，2001，16(6):429-431.