ＫＡＩ１和Ｐ５３在滋養細胞疾病組織中的表達

摘 要: 目的：研究KAI1和P53在滋養細胞疾病組織中的表達，探討其在滋養細胞疾病中的表達及意義。方法：應用免疫組織化學技術檢測滋養細胞疾病與正常絨毛組織中KAI1和P53蛋白的表達，并用原位分子雜交技術檢測KAI1mRNA的表達和KAI1基因擴增情況。結果：① KAI1和KAI1mRNA在滋養細胞腫瘤組織中的表達低于正常絨毛，二者與患者年齡及浸潤程度相關（P＜0.05）。②滋養細胞腫瘤組織中KAI1基因擴增陽性率與正常絨毛比較差異無統計學意義（P＞0.05）。③P53蛋白在滋養細胞腫瘤組織中的表達高于正常絨毛。④P53蛋白和KAI1蛋白表達之間無明顯相關(P＞0.05，rs=-0.8)。結論：KAI1和P53與滋養細胞腫瘤的發生、發展有關，可望作為早期診斷、評估腫瘤細胞侵襲轉移潛能的指標之一。關鍵詞: 滋養細胞疾病 KAI1 P53 原位雜交 免疫組織化學

資料與方法

材料：標本來自1998年5月～2008年3月蘭州軍區蘭州總醫院和甘肅省婦幼保健院病理科存檔的石蠟包埋組織標本，其正常早孕人工流產絨毛組織20例，滋養細胞腫瘤70例，包括葡萄胎24例，惡性葡萄胎20例，絨癌26例。參照WHO《女性生殖道腫瘤組織學分型(1994)》進行光鏡診斷。

試劑：兔抗人KAI1多抗、鼠抗人P53單抗、過氧化酶標記的鏈霉卵白素染色試劑盒、DAB顯色試劑盒及原位雜交檢測試劑盒。

試驗方法：①原位分子雜交：石蠟切片常規脫蠟至水，3% H2O2室溫處理10分鐘，滴加0.1NHCl新鮮稀釋的胃蛋白酶，37℃消化20分鐘。每張切片加20μl地高辛標記KAI1探針，置于95℃烤箱5分鐘；37℃雜交過夜。SSC液振洗；TBS液洗滌。加HRP化鼠抗地高辛，3，3 二氨基聯苯胺(DAB)顯色，充分水洗，蘇木素復染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。采用陽性對照DNA探針(Alu)作為陽性對照，陰性對照DNA探針作為陰性對照。②免疫組化：采用SP法進行免疫組化染色。實驗中用已知KAI1陽性的前列腺癌標本作KAI1陽性對照，已知胃癌的P53陽性標本作P53陽性對照；PBS代替一抗作為陰性對照。③原位雜交與免疫組化判定標準：原位雜交細胞漿與細胞核內均有陽性信號，有棕黃色顆粒或沉積為陽性染色。根據陽性細胞百分率來判定結果：無雜交信號為（-）；＜25%細胞顯色為（+）；25%～50%細胞顯色為（++）；＞50%細胞顯色為（+++）。免疫組化陽性染色為細胞漿內出現棕黃色顆粒或沉積，同樣根據陽性細胞百分率來判定結果。

統計方法：采用X2檢驗及Spearman等級相關分析。

結 果

KAI1蛋白的表達：KAI1蛋白主要表達于細胞漿內。KAI1蛋白在正常絨毛、葡萄胎、惡性葡萄胎、絨癌組織中的表達率分別為70%、58.3%、20%、15.4%。正常絨毛與葡萄胎、惡性葡萄胎與絨癌，差異無顯著性（P＞0.05）；正常絨毛與惡性葡萄胎、正常絨毛與絨癌、葡萄胎與惡性葡萄胎、葡萄胎與絨癌，差異有顯著性（P＜0.05）。

KAI1基因擴增情況：KAI1基因擴增主要見于核內，正常絨毛中為核內散在棕黃色小顆粒狀沉淀物；葡萄胎組織中稍有增強，大多為核內局灶陽性顆粒；滋養細胞腫瘤組織中表現為大片的棕黃色粗顆粒，尤其是在絨癌組織中擴增更加顯著。KAI1基因擴增陽性率在正常絨毛、葡萄胎、惡性葡萄胎、絨癌組織中的表達率分別為10%、12.5%、20%、26.9%。正常絨毛與滋養細胞腫瘤組織比較差異無顯著性（P＞0.05）。

KAI1mRNA的表達：KAI1mRNA主要表達于細胞漿內。KAI1mRNA在正常絨毛、葡萄胎、惡性葡萄胎、絨癌組織中的表達率分別為85%、87.5%、45%、30.8%。正常絨毛與葡萄胎、惡性葡萄胎與絨癌，差異無顯著性（P＞0.05）；正常絨毛與惡性葡萄胎、正常絨毛與絨癌、葡萄胎與惡性葡萄胎、葡萄胎與絨癌，差異均有顯著性（P＜0.05）。

P53蛋白的表達：P53蛋白主要表達于細胞核內。P53蛋白在正常絨毛、葡萄胎、惡性葡萄胎、絨癌組織中的表達率分別為10%、33.3%、70%、69.2%，正常絨毛與滋養細胞腫瘤組織比較差異顯著（P＜0.05）。

滋養細胞腫瘤組織中KAI1與P53蛋白表達的相關關系：應用Spearman等級相關分析顯示，KAI1與 P53在滋養細胞腫瘤中的表達差異無顯著性（P=0.2，rs=-0.8），二者在滋養細胞腫瘤中的表達無相關性。

討 論

KAI1與滋養細胞疾病：研究發現多種轉移性腫瘤伴隨有KAI1基因表達的下降或缺失［1］，如前列腺癌、肺癌、胰腺癌等。本研究結果顯示KAI1蛋白和KAI1mRNA在滋養細胞腫瘤組織中表達降低，并發現隨著滋養細胞腫瘤組織浸潤程度的增高，KAI1陽性率也隨之下降，提示KAI1作為腫瘤轉移抑制基因，其功能失活或降低與滋養細胞腫瘤的發生、發展相關。KAI1蛋白與P53蛋白表達的相關關系：曾有學者推測P53可能調控KAI1基因的轉錄和表達［2］。最近研究卻表明，雖然KAI1基因上存在P53的結合位點，但在DNA損傷后修復的過程中，KAI1表達的調控并非通過P53途徑介導［3］。

目前研究結果表明，KAI1/CD82可抑制多種腫瘤的浸潤和轉移，其表達水平可作為評估腫瘤的轉移潛能、判斷預后的一個指標，這為控制腫瘤擴散的治療提供了新思路。值得關注的問題還有，如果將以該類基因表達為依據的分子分期和臨床分期結合起來，能否提高首選治療和輔助治療的正確性，尤其對那些預示可早期復發者給予必要的輔助治療。

參考文獻

1 楊光之，劉真喜，丁彥青.腫瘤轉移抑制基因KAII的研究狀況.中華病理學雜志，2001，5:374.

2 Mashimo T，Bandyopadhyay S，Goodarzi G，et al.Activation of the tumor metastasis suppressor gene， KAI1，by etoposide is mediated by P53 and c-Jun genes.Biochem Biophys Res Commun，2000; 274:370-376.3 Cyril D，Nicole F，Ulrich C，et al.Absence of P53-dependent induction of the metastatic suppressor KAI1 gene after DNA damage.Oncogene，2000，19:2461-2464.