四物膠囊水提工藝優化研究

(安徽中醫藥高等專科學校，安徽 蕪湖 241000)

四物膠囊是由熟地黃、當歸、白芍藥、川芎4味中藥組成，具有調經養血功能，用于營血虛弱，月經不調。早在《仙授理傷續斷秘方》中就將其方稱為“補血之專方，調經之良劑”。方中白芍味苦、酸，性涼，入肝脾二經，有養血柔肝，緩中止痛，斂陰收汗之功效[1-3]。傳統提取工藝參照“四物合劑”的提取方法，制備較為繁瑣，因此，我們在參照原工藝的基礎上對水提取工藝中加水倍數和煎煮時間進行了正交設計試驗，以干膏重量和芍藥苷作為指標綜合考慮來選擇處方的最佳提取工藝，報告如下。

1 實驗材料

儀器：LC-10AD高效液相色譜儀，SPD-10A(SHIMADZU)紫外可見分光檢測器，LC-10AD(SHIMADZU) LIOUID CHROMATOGRAPH，HW-2000色譜工作站(SHIMADZU)；HT-230A柱溫箱(COLUMN HEATER)；C-21色譜數據采集單位；島津UV-2401紫外掃描儀；ELECTRONIC BABANCE(AY220，SHIMADZU CORPORATION)；Mettler M3電子天平(精度為0.001 mg)；Mettler AE100電子天平(精度為0.0001 g)；DZF-6050型真空干燥箱(上海新苗醫療器械制造有限公司)。藥材：所用藥材均購于安徽亳州藥材市場；芍藥苷對照品：購于中國藥品生物制品檢定所(批號：110736-200526)；乙腈為色譜純，水為二次重蒸水處方：熟地黃250 g，當歸250 g，白芍藥250 g，川芎250 g。

2 實驗方法

2.1 工藝條件的選擇 分別稱取處方量藥材，共9份。分別加入8、10、12倍水煎煮2次，每次分別為1、2、3 h，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮，減壓(溫度60℃±2℃，壓力0.07～0.095 mPa)干燥得干浸膏，稱重，結果見表1、表2、表3。

2.2 含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品各約0.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲提取20 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。

表1 因素水平表

表2 L9(34)試驗設計和計算表

表3 方差分析表

2.2.3 檢測波長的確定 根據芍藥苷對照品的紫外掃描圖譜，并結合所查閱的相關文獻，選擇芍藥苷的檢測波長為230 nm[4-5]。

2.2.4 色譜條件 色譜柱：Hypersil-C18(200 mm×4.6 mm)，流動相：乙腈∶0.1%磷酸(14∶86)，流速：1 mL/min，檢測波長：230 nm。

2.2.5 標準曲線的制備 精密稱取芍藥苷對照品1.67 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取2、5、10、12、15 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積積分值為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，結果，回歸方程為Y=786.25X+7.498,r=0.9999(n=5)，且在進樣量為0.134～1.002 μg范圍內峰面積與進樣量呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取上述芍藥苷對照品溶液10 μL，按上述色譜條件重復進樣5次，依法測定芍藥苷峰面積，RSD為0.68%(n=5)，表明儀器的精密度符合要求。

2.2.7 穩定性試驗 分別取上述對照品溶液和供試品液，置于室溫下，分別于第0，2，6，8，12 h吸取10 μL測定。結果表明，對照品和供試品測定溶液在12 h內峰面積值基本一致，對照品溶液的RSD為0.37%(n=5)，供試品溶液的RSD為0.85%(n=5)，說明對照品和供試品測定溶液12 h內穩定。

2.2.8 測定方法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，按照上述色譜條件注入液相色譜儀中，記錄峰面積，數據及結果見表2、表3。

3 討論

3.1 原“四物合劑”的制備工藝中只明確了白芍、熟地黃與川芎、當歸的水蒸氣蒸餾后的殘渣水煎煮的提取次數為3次，甚為費時且不經濟。初步實驗結果顯示提取2次即能達到最好的提取效果。因此，我們在保持原有工藝無質量改變的基礎上，對原提取工藝進行了細化研究，正交實驗考察了藥材提取的時間，水的不同用量對實驗結果的影響。并且在原標準的基礎上增加了芍藥苷的HPLC檢測作為定性指標，使其質量標準較四物合劑有了較大提高，滿足了安全有效，質量可控的要求。

3.2 方差分析結果可以看出，提取時間(A因素)對正交試驗的結果影響較大，而水的用量影響不是很顯著。且使用10倍量的水，煎煮2 h芍藥苷得量及干膏得量均較大，所以，選擇最佳提取工藝為A2B2。即提取工藝最終是煎煮提取2次，每次用10倍量的水，煎煮2 h為最佳提取工藝。

3.3 芍藥苷的含量測定方法，我們在參照藥典規定的基礎上，優化出符合本提取工藝的高效液相色譜條件[6-7]。

[1]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業出版社,2005:68,422.

[2]張 東,朱珊梅,李 松.高效液相色譜法測定消疬(Ⅱ)糖漿中芍藥苷含量[J].吉林中醫藥,2008,28(5):364-365.

[3]張軍亞,馮廣平.HPLC法測定女金膠囊中芍藥苷的含量[J].藥品評價,2004,1(5):368-370.

[4]黃 亮,黃勇斌,張樂佳.HPLC法測定四物膠囊中芍藥苷的含量[J].中國醫藥導報,2008,5(14):31-32.

[5]聶愛國,郭立瑋.均勻設計在白芍提取工藝中的應用[J].中國中醫藥信息雜志,2005,12(12):51-52.

[6]徐 玉,殷仁亭.延胡索有效部位提取工藝研究[J].長春中醫藥大學學報,2008,24(3):249-250.

[7]趙 琦,張軍武.正交試驗優選朱砂與大黃素的提取工藝[J].吉林中醫藥,2008,28(2):149-150.