人中性粒細胞多肽對急性呼吸窘迫綜合征患者病情及預后的評估作用

[摘要]"目的"探討人中性粒細胞多肽（human"neutrophil"peptides，HNPs）對急性呼吸窘迫綜合征（acute"respiratory"distress"syndrome，ARDS）患者的病情嚴重程度及預后的評估作用。方法"選取2021年12月至2023年12月收住深圳市前海蛇口自貿(mào)區(qū)醫(yī)院重癥醫(yī)學科（intensive"care"unit，ICU）ARDS患者80例，在入住ICU"24h內(nèi)留取患者血漿標本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血漿HNPs濃度。根據(jù)ARDS患者28d存亡情況分為存活組（48例）和死亡組（32例），比較兩組患者的HNPs濃度與急性生理和慢性健康狀況Ⅱ（acute"physiology"and"chronic"health"evaluation-Ⅱ，APACHE-Ⅱ）評分等臨床指標；采用Spearman相關性分析血漿HNPs濃度與APACHEⅡ評分等指標的相關性；通過單因素Logistic回歸分析探討影響ARDS患者死亡的危險因素，對有統(tǒng)計學意義的危險因素采用多因素Logistic回歸模型分析死亡優(yōu)勢比。結果"死亡組患者的HNPs濃度、APACHEⅡ評分均高于存活組，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.001）；HNPs濃度與APACHEⅡ評分呈正相關（r=0.344，Plt;0.001）；HNPs、APACHEⅡ評分是影響ARDS患者28d預后的獨立危險因素。結論"ARDS患者的血漿HNPs可用于ARDS患者病情危重程度和預后的早期評估。

[關鍵詞]"急性呼吸窘迫綜合征；人中性粒細胞多肽；急性生理和慢性健康狀況Ⅱ評分；預后

[中圖分類號]"R563.8""""""[文獻標識碼]"A""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.36.008

Evaluation"function"of"human"neutrophil"peptides"with"for"severity"and"prognosis"of"patients"with"acute"respiratory"distress"syndrome

WU"Sulong1，"ZENG"Wenmei1，"ZHENG"Yue1，"LI"Yimin2

1.Emergency"Intensive"Care"Unit，"Shenzhen"Qianhai"Shekou"Free"Trade"Zone"Hospital，"Shenzhen"518067，"Guangdong，"China;"2.Intensive"Care"Unit，"the"First"Affiliated"Hospital"of"Guangzhou"Medical"University，"Guangzhou"511436，"Guangdong，"China

[Abstract]"Objective"To"evaluate"function"of"human"neutrophil"peptides"（HNPs）"for"the"severity"and"prognosis"of"patients"with"acute"respiratory"distress"syndrome"（ARDS）."Methods"From"December"2021"to"December"2023，"80"ARDS"patients"were"enrolled"in"the"study"from"the"intensive"care"unit"（ICU）"of"Shenzhen"Qianhai"Shekou"Free"Trade"Zone"Hospital."Plasma"samples"were"taken"within"24"hours"after"admission"to"ICU，"HNPs"concentration"was"then"measured"with"enzyme-linked"immunesorbent"assay."Differences"in"HNPs"concentration"and"acute"physiology"and"chronic"health"evaluation-Ⅱ"（APACHEⅡ）"score"etc."Clinical"index"parameters"were"compared"in"survival"group"（n=48）"and"death"group"（n=32）"based"on"their"28-day"outcomes."The"correlation"between"HNPs"concentration"and"APACHEⅡscore"were"calculated"by"Spearman"correlation"analysis."We"analyzed"the"risk"factors"for"28"days"death"of"ARDS"patients"by"single-factor"Logistic"regression，"then"used"the"significant"risk"factors"to"analyze"death"odds"ratio"by"multivariate"Logistic"regression"analysis."Results"HNPs"concentration"and"APACHEⅡ"score"of"death"group"was"significantly"increased"than"those"of"survival"group"（Plt;0.001）."HNPs"concentration"has"a"positive"correlation"with"APACHEⅡ"score"（r=0.344，"Plt;0.001）."HNPs"and"APACHEⅡ"were"independent"prognosis"factor"of"28-day"mortality"of"ARDS"patients."Conclusion"Plasma"HNPs"concentration"may"be"early"used"to"evaluate"the"severity"and"prognosis"of"ARDS"patients.

[Key"words]"Acute"respiratory"distress"syndrome;"Human"neutrophil"peptides;"Acute"physiology"and"chronic"health"evaluation-Ⅱ"score;"Prognosis

急性呼吸窘迫綜合征（acute"respiratory"distress"syndrome，ARDS）是由心源性以外的各種肺內(nèi)、外致病因素導致的急性進行性呼吸衰竭，以過度炎癥反應為特點，病死率高達36%～44%[1]。中性粒細胞浸潤活化并過度釋放炎癥介質及活性蛋白酶類是ARDS急性期的特征性表現(xiàn)[2]。人中性粒細胞多肽（human"neutrophil"peptides，HNPs）是中性粒細胞初級嗜天青顆粒釋放的抗菌肽，也稱α-防御素，占中性粒細胞總蛋白的5%、嗜天青顆粒中蛋白的50%以上[3]。HNPs通過殺滅病原微生物、參與固有免疫等發(fā)揮機體保護作用[4]。然而，過高的HNPs濃度與增強的炎癥反應和更嚴重的組織損傷相關[5]。這些研究提示HNPs在ARDS的病情發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，對探討可早期反映ARDS患者病情危重程度和預后的生物標志物具有重要臨床意義[6]。急性生理和慢性健康狀況Ⅱ（acute"physiology"and"chronic"health"evaluation-Ⅱ，APACHE-Ⅱ）評分是目前國內(nèi)外最常用的疾病危重程度評估體系，已被廣泛用于危重病患者的病情分類和預后預測。APACHE-Ⅱ評分可對患者的病情作出定量的評價，分值越高表示病情越重、預后越差、病死率越高[7]。本研究主要探討血漿HNPs濃度與ARDS患者病情嚴重程度及預后的關系。

1""資料與方法

1.1""臨床資料

回顧性分析深圳市前海蛇口自貿(mào)區(qū)醫(yī)院重癥醫(yī)學科于2021年12月至2023年12月收治的80例ARDS患者。其中男55例，女25例，平均年齡（65±15）歲。根據(jù)ARDS患者的28d生存結局分為存活組（48例）和死亡組（32例）。

納入標準：①年齡gt;18周歲；②入住ICU后存活時間gt;24h；③符合ARDS柏林定義和診斷標準[8]。排除標準：①年齡lt;18周歲；②孕婦；③入住ICU"24h內(nèi)死亡或放棄治療者；④惡性腫瘤患者；⑤8周內(nèi)接受放化療或4周內(nèi)使用免疫抑制劑治療者；⑥器官移植者。ARDS柏林定義和診斷標準[8]：①發(fā)病時機：在已知誘因后或新出現(xiàn)或原有呼吸系統(tǒng)癥狀加重后1周內(nèi)發(fā)病。②胸部影像學：雙肺透光度降低，且不能完全用胸腔積液、肺葉不張或結節(jié)解釋。③肺水腫原因：無法用心功能衰竭或液體負荷過多解釋的呼吸衰竭，若無危險因素則需客觀評估（如心臟超聲檢查）排除靜水壓升高的肺水腫。④氧合情況：依據(jù)患者的不同氧合情況，將病情分為輕度、中度和重度。輕度：呼氣末正壓（positive"end"expiratory"pressure，PEEP）或持續(xù)正壓通氣（continuous"positive"airway"pressure，CPAP）≥5cmH2O（1cmH2O=0.098kPa）時，200mmHg（1mmHg=0.133kPa）lt;動脈血氧分壓（arterial"partial"pressure"of"oxygen，PaO2）/吸入氧濃度（fraction"of"inspired"oxygen，F(xiàn)iO2）≤300mmHg；中度：PEEP或CPAP≥5cmH2O時，100mmHg"lt;PaO2/FiO2≤200mmHg；重度：PEEP或CPAP≥5cmH2O時，PaO2/FiO2≤100mmHg。本研究患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書。本研究經(jīng)深圳市前海蛇口自貿(mào)區(qū)醫(yī)院倫理委員會審批通過（倫理審批號：2021k-055）。

1.2""材料與方法

ARDS患者入住ICU"24h內(nèi)用含乙二胺四乙酸（ethylene"diamine"tetraacetic"acid，EDTA）抗凝血無菌管采集外周靜脈血5ml，使用離心機在溫度4℃，以1000轉/min速度離心10min，抽取血漿分裝保存于–80℃環(huán)境中。記錄患者的年齡、性別、生命體征等基本臨床資料，同時采集臨床檢驗指標（血常規(guī)、血氣分析、肝腎功能及凝血功能）等，結合病史與生化等指標同步進行APACHEⅡ評分。采用酶聯(lián)免疫分析法（enzyme-linked"immunosorbent"assay，ELISA）檢測血漿HNPs濃度，主要試劑：①鼠抗人HNPs單克隆捕獲抗體（HyCult"Biotech）；②0.1%含吐溫-20的磷酸鹽緩沖液（phosphate"buffered"saline"with"tween-20，PBST）洗滌溶液；""③0.2%牛血清白蛋白（bovine"serum"albumin，BSA）封閉溶液；""④HNPs標準蛋白（Sigma）；⑤兔抗人HNPs多克隆檢測抗體（HyCult"Biotech）；⑥辣根過氧化物酶（horseradish"peroxidase，HRP）標記的羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglobulin"G，IgG）（Jackson"ImmunoResearch）；⑦底物為3，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺（tetramethylbenzidine，TMB）（Sigma）；"""⑧終止液為1mol/L硫酸。主要實驗步驟：①包被捕獲抗體；②洗板；③封閉；④配制標準曲線；⑤加標準品及樣本；⑥洗板；⑦加檢測抗體；⑧洗板；⑨加HRP-IgG孵育；⑩洗板；?加底物TMB，每隔5min測吸光度OD620；?終止反應：當標準曲線最高濃度10"000pg/ml點的OD620gt;0.8終止反應，顏色由藍色變成黃色，測吸光度OD450；?以吸光度OD450值為自變量，以濃度為因變量，建立標準曲線的二項式方程，計算樣本HNPs濃度。

1.3""統(tǒng)計學方法

采用SPSS"19.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（"）表示，比較采用t檢驗。采用Spearman相關性分析探討血漿HNPs濃度與APACHEⅡ評分等指標的相關性。通過單因素Logistic回歸分析篩選影響ARDS患者預后的因素，將Plt;0.05的因素納入多因素Logistic回歸分析篩選影響ARDS患者預后的獨立因素，采用逐步向前法，變量引入標準設置為0.05，剔除標準為0.10建立Logistic回歸方程，分析各獨立影響因素的偏回歸系數(shù)、Wald值、OR、95%CI及P值。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2""結果

2.1""兩組患者的臨床指標比較

兩組患者的平均年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）；死亡組患者的APACHEⅡ評分、HNPs、心率及呼吸、中性粒細胞計數(shù)、血乳酸均高于存活組（Plt;0.05），平均動脈壓及氧合指數(shù)（PaO2/FiO2）低于存活組（Plt;0.001），見表1。

2.2""HNPs濃度與APACHEⅡ評分等指標的相關性分析

HNPs濃度與APACHEⅡ評分、中性粒細胞計數(shù)、血乳酸呈正相關。HNPs濃度與氧合指數(shù)、入住ICU時間呈負相關，見表2。

2.3""影響ARDS患者預后的單因素分析

通過單因素Logistic回歸分析篩選出影響ARDS患者預后的因素（Plt;0.05），包括APACHEⅡ評分、HNPs、心率、呼吸頻率、平均動脈壓、中性粒細胞計數(shù)、血乳酸、肌酐、氧合指數(shù)等，見表3。

2.4""影響ARDS患者預后的多因素分析

將單因素Logistic分析篩選出對ARDS患者預后有影響的臨床指標納入多因素Logistic回歸分析，結果顯示HNPs、APACHEⅡ評分是影響ARDS患者28d預后的獨立危險因素，見表4。

3""討論

HNPs是中性粒細胞釋放的一類陽離子抗菌肽[9]。機體出現(xiàn)感染及炎癥反應時通過中性粒細胞活化，向血液中釋放大量的HNPs；HNPs通過破壞微生物膜和（或）通過各種信號通路增強或抑制宿主免疫系統(tǒng)來快速消滅病原體[10]。研究表明血漿HNPs濃度在伴隨中性粒細胞升高的炎癥性疾病中有不同程度的升高[11]。在膿毒癥及腦膜炎患者中，血漿HNPs濃度可高達1mg/ml[12]。ARDS患者肺泡灌洗液中HNPs濃度是正常者的50倍[13]。Cao等[14]研究顯示獲得性血栓性血小板減少性紫癜患者的血漿HNPs水平比健康對照者升高10倍，中性粒細胞激活并釋放的HNPs可能在血栓性血小板減少性紫癜的發(fā)病機制中發(fā)揮作用。本研究發(fā)現(xiàn)死亡組患者的血漿HNPs濃度顯著高于存活組，相關性分析表明HNPs濃度與APACHEⅡ評分呈正相關性，與入住ICU時間呈負相關，提示入院時高血漿HNPs濃度與ARDS患者病情嚴重程度和28d不良預后有關。郭和芳[15]研究發(fā)現(xiàn)慢性阻塞性肺疾病（chronic"obstructive"pulmonary"diseases，COPD）急性加重期患者的血漿HNPs水平明顯高于COPD穩(wěn)定期患者和健康對照者，白燕等[16]報道COPD患者的血清HNPs水平升高，與肺功能指標具有相關性，對COPD患者急性加重有一定預測價值。與有癥狀的吸煙者相比，COPD患者的痰液HNPs濃度較高，重度患者的HNPs濃度高于輕度至中度COPD患者，HNPs水平與患者第1秒用力呼氣容積（forced"expiratory"volume"in"one"second，F(xiàn)EV1）和FEV1/用力肺活量（forced"vital"capacity，F(xiàn)VC）之間存在負相關，提示痰中HNPs水平可能是代表COPD功能損害嚴重程度的標志[17]。本研究通過相關性分析發(fā)現(xiàn)HNPs濃度與血乳酸呈正相關性，與氧合指數(shù)呈負相關，表明高HNPs濃度與細胞有氧代謝障礙、肺損傷存在一定關聯(lián)性。關于HNPs導致組織損傷的機制，有研究報道HNPs對肺血管通透性損傷具有重要作用[18]。HNPs可通過嘌呤能受體（P2Y6）介導人肺上皮細胞白細胞介素-8的合成及肺部炎癥損傷[19-21]。HNPs通過抑制血漿血管性血友病因子裂解酶的水解活性促進血栓形成，引發(fā)血栓并發(fā)癥的發(fā)生[22]。

APACHEⅡ評分是應用最廣泛、最權威的危重癥患者病情評價和預后評估系統(tǒng)[23]。APACHEⅡ評分需獲得多參數(shù)指標，且每個參數(shù)指標必須獲得，否則易產(chǎn)生評估誤差。因此尋找便捷有效的病情嚴重程度及預后評估指標具有重要的臨床意義。本研究發(fā)現(xiàn)血漿HNPs濃度與APACHEⅡ評分呈正相關性，提示血漿HNPs濃度作為評估ARDS患者病情危重程度的指標具有可行性。研究顯示急性心肌梗死組患者的血漿HNPs水平顯著高于冠狀動脈造影正常組[24]。Okcu等[25]發(fā)現(xiàn)風濕性關節(jié)炎活動期患者的血清HNPs水平比緩解期患者顯著升高，可作為評估風濕性關節(jié)炎患者疾病活動性和緩解情況的標志物。Huang等[26]研究表明血漿HNPs水平與急性失代償性肝硬化患者疾病嚴重程度密切相關，是患者30d和90d死亡率的獨立預測因子，可識別短期死亡高風險患者。本研究通過單因素和多因素Logistic分析提示血漿HNPs是影響ARDS患者28d預后的獨立危險因素，為進一步探索血漿HNPs的臨床應用提供依據(jù)。

綜上所述，通過檢測ARDS患者入住ICU"24h內(nèi)的血漿HNPs濃度可對患者的病情危重程度和預后進行早期評估，具有臨床應用價值。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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