ＨＰＬＣ法測(cè)定冰黃軟膏中鹽酸小檗堿的含量

尹寧寧　林永強(qiáng)　徐麗華

【摘要】 目的 采用HPLC法測(cè)定冰黃軟膏中鹽酸小檗堿的含量，以更好地控制該制劑的質(zhì)量。方法 采用DiamonsilC₁₈(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱分離黃連中鹽酸小檗堿，以磷酸鹽緩沖液［0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.05 mol/L庚烷磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0］-乙腈(67：33)，流速為：1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm。結(jié)果 線性范圍為0.0624~0.312μg。鹽酸小檗堿的平均回收率為98.7%，RSD為1.48%。結(jié)論 試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，提取液的轉(zhuǎn)移次數(shù)少，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可靠，重現(xiàn)性好。

【關(guān)鍵詞】冰黃軟膏；鹽酸小檗堿；HPLC

冰黃軟膏收載于地標(biāo)升國(guó)標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為：WS-10182(ZD-0182)-2002，由大黃、黃連、硫磺等藥味組成。清熱除濕，解毒化瘀。用于肺熱血瘀所致尋常型痤瘡，癥見：皮疹紅腫，或有膿皰結(jié)節(jié)，用手?jǐn)D壓有小米粒樣白色脂栓排出，伴有顏面潮紅，皮膚油膩，大便秘結(jié)，舌質(zhì)紅，苔薄黃，脈弦數(shù)。黃連為處方中主要藥味，黃連苦寒，清熱除濕作用較強(qiáng)。原標(biāo)準(zhǔn)中無鹽酸小檗堿的含量測(cè)定項(xiàng)。目前，黃連中主要有效成分為鹽酸小檗堿。中藥軟膏劑基質(zhì)成分復(fù)雜，易干擾有效成分的提取，故在供試品制備過程中多需進(jìn)行冷凍等脫基質(zhì)處理，本文采用硅藻土與樣品直接混合研磨，用甲醇索氏提取，提取液直接定容，減少提取液的轉(zhuǎn)移次數(shù)，減少試驗(yàn)誤差。對(duì)黃連中所含的有效成分鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測(cè)定。供試品色譜峰分離效果好，陰性對(duì)照無干擾，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于有效控制制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-20A高效液相色譜儀。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿對(duì)照品(批號(hào)110713-200208，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：DiamonsilC₁₈(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液［0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.05 mol/L庚烷磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0］-乙腈(67∶33)；流速：1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm［1］。柱溫：35℃。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品9.75 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻(每1 ml含鹽酸小檗堿15.6 μg的溶液)，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約1 g，精密稱定，加硅藻土3 g，研勻，定量轉(zhuǎn)移至索氏提取器中，加甲醇適量，加熱回流提取至無色，回收甲醇，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4 干擾試驗(yàn) 按樣品制備方法，制備不含黃連的陰性樣品，照“2.3”項(xiàng)下操作，制得陰性樣品溶液。進(jìn)樣10 μl，按以上色譜條件測(cè)定，結(jié)果陰性樣品色譜圖中，在與鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液及供試品中鹽酸小檗堿相應(yīng)保留時(shí)間處，無干擾峰出現(xiàn)。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液4、8、12、16、20 μl，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)其峰面積積分值，計(jì)算回歸方程。回歸方程：Y=142773X-23145，r=0.999 9。結(jié)果表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.0624~0.312 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 取濃度為15.6 μg/ml的對(duì)照品溶液10 μl，按以上色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為0.37%。試驗(yàn)結(jié)果顯示儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液在12 h內(nèi)，按以上色譜條件進(jìn)樣5次，(0、2、4、8、12 h)，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為1.02%。試驗(yàn)結(jié)果顯示供試品溶液12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下的方法，按以上色譜條件測(cè)定，對(duì)060298的樣品進(jìn)行測(cè)定，共測(cè)定5份，測(cè)定含量RSD為0.52%，試驗(yàn)結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn) 取樣品約0.5 g(批號(hào)：060298，含量0.24 mg/g)，精密稱定，共測(cè)定5份，加硅藻土3 g，精密加入甲醇(含鹽酸小檗堿對(duì)照品0.022 mg/ml)5 ml，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按以上色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果表1。試驗(yàn)結(jié)果表明該方法回收率良好 。

2.10 樣品測(cè)定 照“2.3”項(xiàng)下方法，按以上色譜條件對(duì)三批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 軟膏劑中由于含有凡士林、液體石蠟等基質(zhì)，這些基質(zhì)在提取時(shí)會(huì)干擾有效成分的提取，有標(biāo)準(zhǔn)采用置冰箱中冷藏的方式進(jìn)行脫臘處理。本文選用軟膏與硅藻土混合均勻，用甲醇索氏提取，硅藻土可吸附軟膏中的基質(zhì)并充分分散軟膏，使提取充分，甲醇提取液經(jīng)濃縮后可直接定容。方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可最大限度的減少由方法所產(chǎn)生的誤差。

3.2 采用流動(dòng)相［2,3,4,5］：磷酸鹽緩沖液［0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.05 mol/L庚烷磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0］-乙腈(67∶33)，對(duì)色譜柱的選擇性小，多數(shù)品牌的C₁₈柱均適用，鹽酸小檗堿的分離效果好，色譜峰峰形好，可減少試驗(yàn)過程中選擇合適色譜柱所用的時(shí)間，提高試驗(yàn)效率。

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