伸秦組方對高尿酸血癥小鼠的影響

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伸秦組方對高尿酸血癥小鼠的影響

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目的： 探討伸筋草、車前子、秦皮、絡石藤等中藥組方（簡稱伸秦組方）對高尿酸血癥小鼠的影響及作用機制。方法：采取聯合使用腺嘌呤、乙胺丁醇、酵母膏連續灌胃給藥，制備小鼠高尿酸血癥模型。同時給予西藥和中藥伸秦組方進行對照，26天后檢測各組小鼠的血清尿酸值和黃嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脫氨酶（ADA）的活性；并取腎臟做組織切片，在光鏡下觀察其組織變化。結果：伸秦組方能降低小鼠血尿酸（與模型組比，P＜0.01），在抑制ADA和XOD活性方面優于其余各組（P＜0.01）。中藥組小鼠腎臟中尿酸結晶較西藥組少，腎臟損害較小。結論：伸秦組方有治療高尿酸血癥和良好的腎臟保護作用。

伸秦組方 高尿酸血癥 血尿酸 黃嘌呤氧化酶 腺苷脫氨酶 影響

痛風是一種嘌呤代謝紊亂所致的疾病，其特點為高尿酸血癥。近年隨著我國人民生活水平的提高，高尿酸血癥的發病率逐年遞增，且發病年齡呈現低齡化趨勢[1，2]。高尿酸血癥可續發痛風、尿酸性腎病、腎功能不全，且與高血壓病、高血脂、冠心病、腦卒中、糖尿病的發生密切相關，其防治工作也日益受到重視[3，4]。目前，痛風的西醫治療多依賴秋水仙堿、別嘌呤醇、苯溴馬隆等藥物，緩解癥狀，控制病情發展，但副作用大。最近幾年由于痛風發病率的上升，人們越來越重視痛風的治療研究，而中藥治療痛風有了較快的發展。由伸筋草、秦皮、車前子、絡石藤等中藥顆粒組成的中藥組方（以下簡稱伸秦組方），具有清熱燥濕、利尿、祛風通絡等作用，現代藥理學研究表明其主要成分能促進尿酸排泄、消炎鎮痛，因此我們進行此實驗以了解伸秦組方治療高尿酸血癥的作用機理。

一、材料與方法

（一）實驗動物

SPF級昆明小鼠110只，雄性，(20±2)g/只，由湖北省疾病防控中心提供（實驗動物飼養許可證號：SCXK[鄂]2003-2005）。小鼠飼養于武漢市第一醫院SPF動物實驗室。造模前適應環境1周，整個實驗過程中自由攝食和飲水。

（二）藥品與試劑

1．藥品

（1）造模藥品：腺嘌呤（購自上海悠祥生化試劑有限公司，批號20080123）；乙胺丁醇（購自武漢中聯集團四藥藥業有限公司，批號070801）；酵母膏（購自北京奧博星生物技術有限責任公司，批號20070906）。

（2）治療藥品：伸秦組方由江陰制藥廠生產的顆粒劑型伸筋草、車前子、秦皮、絡石藤等組成（伸筋草批號 0807114，車前子批號0807021，秦皮批號0808046，絡石藤批號0804104）；別嘌呤醇（購自廣東彼迪藥業有限公司，批號20080305）；苯溴馬隆（購自宜昌長江藥業有限公司，批號071101）。

2．試劑

尿酸試劑（氧化酶法）（購自上海科華東菱診斷用品有限公司，批號20080312）。黃嘌呤氧化酶（XOD）測試盒（購自南京建成生物工程研究所，批號20080729）；腺苷脫氨酶（ADA）測試盒（購自南京建成生物工程研究所，批號20080729）。

（三）儀器

實驗中使用儀器為TU—1800S紫外可見分光光度計；Certrifuge B4i離心機；PL402-L電子分析天枰；Axioskop40光鏡。

（四）方法

1．分組及給藥方法

將小鼠隨機分為5組：空白組15只，模型組29只，伸秦組方治療組22只，別嘌呤醇組22只，苯溴馬隆組22只。除空白組灌胃生理鹽水26天（50 ml·kg-1，1次/d）外，其余各組均灌胃腺嘌呤100mg·kg-1、乙胺丁醇250 mg·kg-1，酵母膏15g·kg-1組成的混合物1ml，每日1次，連續26天給予，并給藥治療（1ml/d灌胃）。伸秦組方按50g·kg-1/d灌胃給藥；別嘌呤醇組按40mg·kg-1/d灌胃給藥；苯溴馬隆組按20mg·kg-1/d灌胃給藥。

2．血尿酸的檢測

第26天，將小鼠禁食5h后，眼球取血，室溫下自然凝固1h，再于每分鐘3500轉轉速下離心10分鐘，取上清液，檢測血尿酸。

3．黃嘌呤氧化酶（XOD）和腺苷脫氨酶（ADA）活性的測定

4℃下快速取出小鼠腎臟，稱重后加入5倍體積的80mmol/L的磷酸鹽緩沖液，在冰浴中充分勻漿。4℃、每分鐘3000轉速下離心10分鐘，取上清液在4℃、每分鐘10000轉速下離心60分鐘，取上清液采用分光光度法測定XOD 和ADA的活性[5]。

4．組織學送檢

取各組小鼠腎臟，用4%多聚甲醛浸泡固定，石蠟包埋切片，經HE染色，封片后光鏡下觀察。根據其纖維增生的程度分為Ⅲ級。Ⅰ級：腎小管上皮細胞有灶性水腫，間質有炎細胞浸潤，病變范圍＜15%；Ⅱ級：腎小管上皮細胞有小片性水腫，間質有炎細胞浸潤，有膿尿、蛋白尿、尿酸結晶形成，病變范圍＞15%且≤50%；Ⅲ級：腎小管上皮細胞有片狀水腫，間質有炎細胞浸潤、輕度纖維化，有膿尿、蛋白尿、尿酸結晶形成，病變范圍＞50%。

（五）統計分析

實驗數據用SPSS13.0統計軟件處理，多組間用方差分析比較，兩組間采用t檢驗。

二、結果

（一）治療后各組小鼠血尿酸的比較

模型組與空白組有顯著差異(P＜0.01)，證明造模成功。伸秦組方、別嘌呤醇組和苯溴馬隆組與模型組有顯著差異(P＜0.01)，證明治療藥物有效。伸秦組方的血尿酸值與西藥治療組比較，無明顯差異（P＞0.05）（見表1）。

（二）治療后各組XOD和ADA活性比較

模型組ADA的活性高于空白組，證明造模成功。伸秦組方ADA的活性與空白組比較無顯著差異（P＞0.05），與西藥組比較有顯著差異（P＜0.01），證明伸秦組方抑制ADA的活性效果優于其他治療組。從XOD活性來看，伸秦組方的XOD活性低于模型組和其他治療組，與模型組比較有顯著差異（P＜0.01），與西藥組比較有明顯差異（P＜0.05），證明其抑制XOD活性的作用優于其余治療組，從而抑制尿酸生成（見表1）。

表1 各組小鼠的血尿酸，血清XOD和ADA活性的比較（ˉx±s）

（三）腎小球，腎小管-間質的病理改變

模型組可見腎小管上皮細胞有片狀水腫，間質有炎細胞浸潤、輕度纖維化，病變范圍＞50%；伸秦組方及西藥組病變程度較模型組輕，腎小管上皮細胞有灶性水腫，間質有炎細胞浸潤，病變范圍＜15%（見圖1）。

圖1 各組小鼠腎臟組織切片的病理改變圖

三、討論

腺嘌呤是一種含氮雜環嘌呤類化合物，其最終代謝產物是尿酸。當給大鼠灌胃腺嘌呤后，體內合成尿酸的底物——磷酸核糖焦磷酸和/或谷酰胺增加；另外，谷酰胺磷酸核糖焦磷酸轉移酶及黃嘌呤氧化酶的活性也可能增加，使尿酸合成加速。尿酸在血中呈過飽和狀態而形成結晶，沉積于腎間質及髓質，刺激局部，引起腎小管-間質化學炎性反應，間質可見炎性細胞浸潤及纖維化。乙胺丁醇抑制尿酸排泄，增加尿酸在體內的蓄積，從而提高血尿酸濃度[6]。酵母含有豐富的蛋白質、核苷酸、B族維生素等，在體內充分水解能產生含氮的有機堿(包括嘌呤堿類、嘧啶堿類)和磷酸，當大劑量的酵母進入體內后，能干擾機體正常的嘌呤代謝，致嘌呤代謝紊亂，其主要表現為黃嘌呤氧化酶活性增加，加速了尿酸的生成，從而產生大量尿酸[7]。

本次實驗的預實驗是參照文獻[7-9]進行的，采用加速尿酸合成、抑制尿酸排泄和進食大量高嘌呤食物三種相結合的方法，給予小鼠腺嘌呤、乙胺丁醇和酵母膏灌胃，結果第21天時血尿酸高于空白組（P＜0.05），有顯著性差異，證明用此方法造模成功。之后用此方法繼續灌胃，到第26天時血尿酸仍高于空白組（P＜0.05），有顯著性差異，證明此造模方法可以使小鼠血尿酸持續升高26天。由于此方法對小鼠腎臟的損壞較小，故決定用此造模方法進行正式實驗。

別嘌呤醇可以抑制黃嘌呤氧化酶，減少尿酸的生成。苯溴馬隆抑制腎小管回吸收尿酸的作用強，從而促進尿酸的排泄[5]。

從本次實驗來看，使用的造模方法是成功的，伸秦組方對血尿酸、XOD和ADA活性的影響也很顯著，其抑制XOD和ADA的活性效果優于其他治療組，從而抑制尿酸生成，具有良好的抗高尿酸血癥作用。從經HE染色的組織切片來看，伸秦組方能減輕高尿酸血癥對腎臟超微結構的損傷，抑制腎間質纖維化，減輕疾病病變的進展程度，延緩疾病的自然過程，具有良好的腎臟保護作用。

痛風一病，中醫經典中曾作了詳細的記載，《丹溪心法·痛風》、《類證治載·痛風》、《證治準繩·痛風》、《張氏醫通·痛風》、《素問·異法方宜論》中均有論證。中醫認為本病病因是痰濕瘀血濁毒，病機是脾腎虧虛，痰瘀互結，閉阻經絡，飲食、情志、寒濕是痛風的相關致病因素[10]。

伸秦組方是由伸筋草、秦皮、車前子、絡石藤等中藥組成，具有清熱燥濕、利尿、祛風通絡等作用。伸筋草祛風除濕，舒經活絡，含伸筋草堿、伸筋草毒、石松堿，提取物能鎮痛；石松能利尿及增進尿酸排泄。秦皮，清熱燥濕，早年曾報道秦皮苷有利尿作用，并能促進家兔以及風濕病患者尿酸排泄。秦皮甲素多種給藥途徑也可促進大鼠及兔的尿酸排泄，其促進尿酸排泄的機理與興奮交感神經系統抑制腎臟對尿酸的重吸收等有關[11]。車前子，利尿通淋滲濕，藥理研究表明其能抑制腎臟草酸鈣結晶，煎劑少量多次注入兔膝關節腔內，能引起結締組織增生，加強關節囊的緊張度[12]。絡石藤祛風通絡，涼血消腫，《本草綱目》云：“絡石，氣味平和，其力主筋骨關節風熱癰腫”，藥理研究發現其具有類似腎上腺皮質激素樣作用[13]。雖然別嘌呤醇和苯溴馬隆均能降低血尿酸，但這些藥物長期應用有損害肝、腎功能，抑制骨髓等毒副作用，停藥后血尿酸極易反跳，又不能消除尿蛋白，也不能改變膠原代謝抗腎纖維化，對防止高尿酸血癥的發生、發展均有極大的局限性[14]。中醫藥由于作用溫和，能夠長期服藥，在治療高尿酸血癥方面具有一定的優勢。伸筋草、車前子、秦皮、絡石藤等組成的伸秦組方在長期應用過程中證明了其能夠降低血尿酸，具有良好的治療高尿酸血癥作用；本實驗的結果發現其能有效降低血尿酸，是通過抑制XOD和ADA兩種酶的活性，影響尿酸代謝完成的。所以，由伸筋草、車前子、秦皮、絡石藤等組成的伸秦組方應該得到進一步的推廣，以更好地解除病人的痛苦。

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1薛莎，馬威，武漢市第一醫院，武漢，430022

2朱瓊潔，湖北中醫學院2006級研究生，武漢，430061