減肥保健食品中非法添加鹽酸西布曲明的檢測

吳衛(wèi)濤，李 亮

(河南省安陽市食品藥品檢驗所，河南 安陽 455000)

近年來，保健食品中非法添加西藥成分的現(xiàn)象十分嚴重，嚴重損害了消費者的身心健康和經(jīng)濟利益，甚至危及生命[1－2]。在減肥類保健食品中，非法添加鹽酸西布曲明的現(xiàn)象十分普遍。鹽酸西布曲明是一種中樞神經(jīng)抑制劑，具有興奮、抑食等作用，有可能引起血壓升高、心率加快、厭食、失眠、肝功能異常等。西布曲明價格低廉，且確有一定的抑食減肥功效，因此屢被一些不法商家加入減肥保健食品中以牟取暴利。筆者采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，建立了鹽酸西布曲明的篩選鑒定方法，為更好地打擊不法行為提供了可靠的技術(shù)支撐。

1 儀器與試藥

Agilent 6410 QQQ LC/MS型液質(zhì)聯(lián)用儀，配有電噴霧接口(ESI)，三重四級桿質(zhì)量分析器，Mass Hanter Work station Date Acquisition工作站;Agilent 1200型高效液相色譜系統(tǒng)，包括四元輸液泵，自動進樣器，柱溫箱;Mettler AE－240型電子天平。鹽酸西布曲明對照品(批號為100624－200401，中國藥品生物制品檢定所);樣品(均為市場抽檢品);乙腈(色譜純)，水(超純水)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Zorbax Eclipse Plus C18柱(100 mm × 2.1 mm，3.5μm);流動相:0.02 mol/L醋酸銨－0.1%醋酸水溶液/乙腈(20∶80);流速:0.2 mL/min;柱溫:30 ℃;進樣量:10 μL。

2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI);正離子模式;多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)掃描方式;噴霧針電壓:4 kV;霧化器壓力:30 psi;干燥氣溫度:350℃;干燥氣壓力:30 psi;碰撞氣壓力:2 mtorr;檢測器電壓:1.5 kV;掃描間隔時間:0.1 s。

2.3 溶液配制

取鹽酸西布曲明對照品約25 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理15 min使之溶解，放冷至室溫，加流動相至刻度，搖勻，即得對照品儲備溶液。精密量取對照品儲備溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻。再精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取樣品適量(約相當(dāng)于一次服用量)研細，置50 mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理15 min使之溶解，放冷至室溫，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液按上述對照品溶液的稀釋方法稀釋，即得樣品溶液。

2.4 測定方法

取對照品溶液與樣品溶液，用0.2μm微孔濾膜濾過，分別取10 μL注入液質(zhì)聯(lián)用儀，按LC－MS/MS測定條件分析。

2.5 質(zhì)譜條件優(yōu)化

取上述對照品溶液，選ESI正離子化模式，直接進樣，優(yōu)化質(zhì)譜條件。首先，采用一級質(zhì)譜的掃描方式可得到準分子離子峰[M+H]+為280.0，在確定準分子離子的基礎(chǔ)上，優(yōu)化碰撞誘導(dǎo)解離電壓，得到最佳的碰撞誘導(dǎo)解離電壓(fragmenator)，再用子離子掃描(product Ion)的方式，手動選擇子離子及其最佳碰撞能量(collision energy，CE)，以最高豐度的子離子作為檢測離子，使之具有較高的專屬性和靈敏度。在樣品測定中為防止干擾，可增加多個離子對進行篩選。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸西布曲明的質(zhì)譜條件優(yōu)化結(jié)果

2.6 檢測限確定

取對照品溶液適量，用流動相逐步稀釋，按上述液質(zhì)聯(lián)用條件測定。以 S/N=3計算出檢測限(LOD)為0.03 ng。

2.7 樣品測定結(jié)果

分析樣品時，若樣品色譜圖中檢出與鹽酸西布曲明對照品保留時間一致的成分，則進行二級質(zhì)譜全掃描驗證，若樣品的保留時間和特征離子及其產(chǎn)生的碎片離子均與對照品相同，則判斷該樣品中含有鹽酸西布曲明。在抽取的110余批樣品中，共有49批符合上述判斷條件，可判定添加了鹽酸西布曲明，檢出率高達42.6%。色譜圖見圖1，質(zhì)譜圖見圖2及圖3。

圖1 高效液相色譜圖

圖2 鹽酸西布曲明對照品的MS/MS圖

圖3 樣品中鹽酸西布曲明成分的驗證MS/MS圖

3 討論

本試驗比較了下列流動相:甲醇－水－甲酸(70∶30∶0.2)[3]，不同比例的0.1%甲酸和甲醇[4]，不同比例的0.02 mol/L醋酸銨－0.1%醋酸水溶液 /乙腈。結(jié)果表明，采用0.02 mol/L醋酸銨－0.1%醋酸水溶液/乙腈(20∶80)時，鹽酸西布曲明與樣品中其他成分分離較好，出峰時間較短，故0.02 mol/L醋酸銨－0.1%醋酸水溶液/乙腈(20∶80)被選為流動相。

應(yīng)該注意的問題是，對照品與樣品質(zhì)量濃度不要太高，否則殘留嚴重，需要較長時間的沖洗;對所用樣品、玻璃儀器與試劑等要防止交叉污染，以免造成假陽性結(jié)果。

[1]裴振峨，蔡皓東.西布曲明的不良反應(yīng)及其防治 [J].藥物不良反應(yīng)雜志，2006，8(4):276 －279.

[2]曾 濤.常用減肥藥物的不良反應(yīng)[J].中國藥師，2007，10(6):599－601.

[3]權(quán)伍英，欒 燕，張 欣.LC－MS/MS檢測減肥保健品中的鹽酸芬氟拉明和鹽酸西布曲明[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，17(1):9－12.

[4]李 丹，文紅梅，崔福春，等.LC－MS/MS法快速篩選保健食品中非法添加的11種減肥化學(xué)成分[J].中國藥事，2009，23(4):335－338.