七葉神安片質量標準研究

李玉英，曾雪花，謝雄瑞，吳俊賢

(1.廣東省河源市藥品檢驗所，廣東 河源 517000; 2.廣東省佛山市三水區人民醫院，廣東 佛山 528100)

七葉神安片為2005年版《中國藥典(一部)》收載品種，原標準中只有人參皂苷Rb3的定量指標，沒有人參皂苷Rb1的定量指標，且按藥典標準檢驗時，從進樣第2針開始人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb1對照品色譜峰有時會消失。為使檢驗工作順利進行并保證產品質量，筆者改進了人參皂苷Rb3的梯度洗脫方法[1]，并用高效液相色譜(HPLC)法測定人參皂苷Rb1含量[1－4]，效果滿意。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國Agilent公司);CP225D型電子天平(德國Sartorius公司);KQ－250D型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。七葉神安片(昆明大觀制藥有限公司，批號為20080909;昆明興中制藥有限責任公司，批號為20080506;廣東環球制藥有限公司，批號為080903;廣西北生藥業股份有限公司，批號為090201);陰性對照樣品(自制);人參皂苷Rb3對照品和人參皂苷Rb1對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號分別為111686－200501和11704－200217);乙醇(分析純，廣州化學試劑廠)，乙腈(色譜純，廣州化學試劑廠)，磷酸(分析純，廣州化學試劑廠)，水(超純水，自制)。

2 方法與結果

2.1 人參皂苷Rb3含量測定用梯度洗脫方法改進

色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈(流動相A)，0.2%磷酸溶液(流動相B)，梯度洗脫按表1安排進行;流速1.0 mL/min;檢測波長203 nm;柱溫32℃;進樣量10 μL。理論板數按人參皂苷Rb3峰計算應不低于6000。將藥典中人參皂苷Rb3的梯度洗脫方法改進后，又做過8次試驗，再也沒有出現人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb1對照品峰消失的現象。

表1 梯度洗脫條件

2.2 人參皂苷Rb1含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

與2.1項相同。

2.2.2 溶液制備

精密稱取人參皂苷Rb1對照品適量，加乙醇制成每1 mL含人參皂苷Rb10.25 mg的對照品溶液;取本品20片，除去包衣，研細，混勻，取約相當于2片質量，精密稱定，置具錐形瓶中，精密加入乙醇20 mL，稱定質量，超聲(功率300 W，頻率50 kHz)處理15 min，放冷，稱定質量，用乙醇補足減失的質量，搖勻后濾過，得供試品溶液。

2.2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:取空白樣品，按供試品溶液制備項下的方法提取并測定。結果陰性對照品溶液在人參皂苷Rb1對照品出峰位置無吸收，說明陰性無干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:取人參皂苷Rb1對照品溶液，分別進樣2.5，5.0，10，20，30，40 μL 測定。以人參皂苷 Rb1對照品進樣量(μg)為橫坐標(X)、峰面積積分值為縱坐標(Y)繪制標準曲線，回歸方程為 Y=1.87684 X+8.40332，r=0.9999(n=6)。結果表明，人參皂苷Rb1進樣量在0.625～10.00 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

重現性試驗:取同一批(批號為20080909)樣品，依法制備6份供試液并測定。結果人參皂苷Rb1的峰面積平均為562，RSD為0.2%(n=6)，表明方法重現好。

穩定性試驗:取同一供試品(批號為20080909)溶液，分別于0，2，4，6，8，12，20，24 h 時依法測定。結果人參皂苷 Rb1峰面積平均值為566，RSD為0.3%(n=8)，表明供試品溶液在 24 h內穩定。

加樣回收試驗:取批號為20080909的樣品約0.42 g，精密稱定，置具錐形瓶中，平行取6份，分別精密加入人參皂苷Rb1對照品1.25 mg和乙醇20 mL，稱定質量，超聲(功率300 W，頻率50 kHz)處理15 min，放冷，稱定質量，用乙醇補足減失的質量，依法測定。結果見表2。

表2 人參皂苷Rb1加樣回收試驗結果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

取4批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定含量。結果樣品的人參皂苷Rb1平均含量為0.29 mg/片。

3 討論

按藥典方法測定人參皂苷Rb3含量時，從進樣第2針開始人參皂苷Rb3和人參皂苷Rb1對照品峰有時會消失。筆者認為藥典中的梯度洗脫方法不合理，洗脫時流動相比例從50∶50轉為30∶70只有6 min，時間太短，色譜柱中流動相比例不能有效達到規定，使對照品不能有效洗脫檢測，色譜峰不會出現。改進藥典中的梯度洗脫方法后，可以有效洗脫檢測成分，因而再也沒有出現對照品峰消失的現象。因此建議藥典委員會改進人參皂苷Rb3高效液相含量測定用梯度洗脫方法。

2005年版《中國藥典(一部)》收載品種七葉神安片的質量標準中沒有人參皂苷Rb1的定量指標，參照2005年版《中國藥典(一部)》，用HPLC法測定人參皂苷Rb1含量，結果人參皂苷Rb1與其他雜質峰分離度良好。HPLC法具有簡便、準確、靈敏度高、回收率好等優點，能有效測定七葉神安片的人參皂苷Rb1含量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:303－304.

[2]廖曉春，熊 毅，胡煒彥，等.高效液相色譜法測定七葉神安片中人參皂苷 Rb3的含量[J].藥學分析雜志，2006，26(3):322 －324.

[3]高明菊，馬 妮，曾 江，等.七葉神安滴丸質量標準標準研究[J].現代中藥研究與實踐，2003(S1):57－58.

[4]崔秀明，周家明，柯金虎，等.七葉神安滴丸對中樞神經系統的藥效學研究[J].現代中藥研究與實踐，2003(S1):58－59.