不同脂肪源對中華絨螯蟹幼蟹生長和脂肪酸合成酶活性的影響

李偉國

溫小波 (汕頭大學理學院，廣東 汕頭515063)

朱大世 (長江大學動物科學學院，湖北 荊州434025)

不同脂肪源對中華絨螯蟹幼蟹生長和脂肪酸合成酶活性的影響

溫小波
(汕頭大學理學院，廣東 汕頭515063)

朱大世
(長江大學動物科學學院，湖北 荊州434025)

通過為期28 d的養殖試驗，研究了不同脂肪源(豬油、豆油和魚油)和不同魚油水平(2%、4%、6%和8%魚油)對中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)幼蟹生長和脂肪酸合成酶(FAS)活性的影響。結果表明：(1)不同脂肪源比較，豬油組與豆油組獲得較大增重率，顯著高于脫脂組和6%魚油組；不同魚油水平比較，4%魚油組顯著高于其他3組。(2)不同脂肪源和不同魚油水平對幼蟹肝胰腺和肌肉中FAS活性的影響有顯著差異。不同脂肪源比較，6%魚油組顯著低于脫脂組、豬油組和豆油組，豬油組顯著高于脫脂組，豬油組和豆油組差異不顯著。不同魚油水平比較，2%魚油組和4%魚油組顯著高于6%魚油組和8%魚油組。

中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)；脂肪；生長；脂肪酸合成酶

中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)俗名河蟹，為我國主要的養殖甲殼動物之一。由于市場需求量逐漸增大，其養殖面積由沿海向內地迅速擴大，產量逐年提高。目前有關河蟹的營養與飼料研究已有較多報道，但對其相關脂肪酸合成酶(FAS，Fatty acid synthetase)的研究尚未見報道。為此，本試驗以豬油、豆油、魚油為脂肪源，研究了飼料中不同脂肪源及不同魚油水平對幼蟹生長和FAS活性的影響，為水產動物脂肪的營養代謝和相關酶學研究提供一定的理論指導，同時為河蟹精制飼料的配制，特別是飼料脂肪酸的添加提供可靠的依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗河蟹購自湖北省監利縣，消毒后于水族箱中暫養1周。暫養結束后，選擇無病無傷個體用于正式試驗。試驗幼蟹平均體重分別為(5.80±1.50) g。

試驗用油脂為豬油、豆油和魚油。豬油為自行提煉加工而得，豆油為瓶裝金龍魚大豆油，魚油為廈門產天然魚油。不同油脂的脂肪酸組成由湖北省農業科學院分析測試中心測得，其結果如表1所示。

1.2 試驗方法

(1) 試驗飼料配制 所用飼料配方詳見表2，試驗原料均過60目篩，按添加油脂不同配制成7種飼料，分別為脫脂、豬油、豆油和2%魚油、4%魚油、6%魚油和8%魚油飼料，編號為F1 、F2 、F3、F4，F5、F6和F7。幼蟹顆粒飼料直徑為1.0 m，制粒后風干，于冰箱中密封保存備用。

(2) 試驗分組及管理 試驗用河蟹隨機分為7組，分別飼喂編號為F1～F7的試驗飼料。每組設3個平行，每個平行30只，分別飼養于3個80 cm×50 cm×45 cm的水族箱中。試驗共持續28 d。

表1 試驗用油脂的脂肪酸組成Table 1 Fatty acids composition of experimental lipid g/100 g

注：SFA：飽和脂肪酸;MUFA:不飽和脂肪酸;PUFA:多不飽和脂肪酸; HUFA:高不飽和脂肪酸。n-3PUFA包括18C∶n-3、20C∶n-3、22C∶n-3；n-6PUFA包括18C∶n-6、20C∶n-6、22C∶n-6。

試驗在長江大學動物科學學院水產養殖實驗室進行，飼養時間為4月6日至5月7日。每天投喂3次，日投喂量為試驗河蟹體重的5%，并根據天氣和攝食情況靈活掌握。投飼1 h后清理糞便及殘餌，每2～3 d 換水1次，每次換水量為1/2，所用水源為曝氣48 h的自來水。水溫為室內溫度18～20 ℃，并24 h連續間歇充氧，溶氧保持在5 mg/L以上。

(3)取樣 先于試驗前隨即抽取5只河蟹稱重后，置于冰盤內解剖，取其肌肉和全部肝胰腺，迅速用液氮冷凍，貯存于-70℃的超低溫冰箱中，以待進行脂肪含量及FAS活性測定，所得數據為本底數據。試驗結束后，各組隨機抽取5只，稱重后同上操作進行取樣分析。

1.3 FAS酶樣的制備及活性測定

稱取1.00 g左右的樣品(肌肉或肝胰腺)，置于玻璃勻漿器中，加2 mL抽提溶液勻漿。勻漿后的懸濁液倒入5 m L離心管中，進行冷凍離心50 min(0～4 ℃，20 000 r/min,)，取其上清液作為待測酶樣。

FAS活性的測定采用Tian等[1]的方法。

酶活單位的定義：動物FAS的活性單位(U)規定為每分鐘氧化的14 nmol NADPH的酶量。因此每毫升高速離心上清液中該酶活性單位可按公式計算：

表2 各試驗組飼料配方組成Table 2 Feed formula of each experimental groups g/100 g

注：(1)維生素預混料配方：每100 g日糧中含維生素E 2 160 I.U、維生素C 60 mg、泛酸240 mg、維生素B 660 mg、核黃素120 mg、硫胺素60 mg、生物素60 mg、煙酸600 mg、肌醇600 mg；(2)礦物質預混料配方(g/100 g)：NaH2PO410、KH2PO421.5、Ca(H2PO4)·2H2O 26.5、CaCO310.5、Ca-lactate 16.5、MgSO4·7H2O 10、AlCl3·2H2O 1.2、ZnSO4·7H2O 0.511、Fe-citrate 0.061、 MnSO4·4H2O 0.143、KI 0.058、CuCl20.051、CoCl2·6H2O 0.176、KCl 2.8。

1U(U/mL)=(△D340/ε)×(V×106/14)×C

式中，△D340為測定活性時監測到的340 nm波長下每分鐘光密度變化值；ε為NADPH氧化NADP在340 nm波長的毫摩爾消化系數，此值在1 cm光徑時為6.022；V為測活體系體積0.002 L；C為稀釋倍數，此處為400；106為mmol轉nmol時的轉換系數。

1.4 數據處理

試驗所得數據采用SAS 9.0統計軟件進行統計分析，并對組間數據進行雙因素方差分析和多重比較。結果以平均數±標準差(mean±SD)表示。

2 結果與分析

2.1不同脂肪源和不同魚油水平飼料對幼蟹生長的影響

試驗期間幼蟹生長情況如表3。由表3可知，經過28 d的飼喂各組河蟹體重均有增長。至試驗結束時，各組增重率分別為：脫脂組18.97%、 豬油組37.93%、豆油組29.8%、 2%魚油組19.66%、4%魚油組54.31%、6%魚油組6.03%、8%魚油組1.38%。

表3 各試驗組幼蟹生長情況與組織中FAS活性Table 3 The growth and FAS acitivity of juvenal crab of each experimental groups

注：表中同列數據后不同小寫字母表示組間差異顯著(Plt;0.05)。

方差分析結果表明，不同飼料組差異顯著。其中， 4%魚油組體重增長顯著高于脫脂組、2%魚油組、6%魚油組、8%魚油組，但與豬油組和豆油組無顯著性差異；豬油組體增重要高于豆油組和2%魚油組，差異顯著；6%魚油組、8%魚油組體增重顯著低于豆油組和2%魚油組；6%魚油組與8%魚油組之間無顯著性差異。

不同脂肪源比較，豬油組與豆油組獲得較大增重率，顯著高于脫脂組和6%魚油組；不同魚油水平比較，4%魚油組顯著高于其他3組。

2.2 不同脂肪源和不同魚油水平飼料對幼蟹肝胰腺組織中FAS活性的影響

各試驗組幼蟹肝胰腺組織中FAS活性如表3所示。由表3可知，酶的活性高于除豆油組之外的其他各組，差異顯著；脫脂組、豆油組、2%魚油組和4%魚油組之間酶活差異不顯著，這4組酶的活性顯著高于6%魚油組和8%魚油組， 6%魚油組和8%魚油組之間差異不顯著。

不同脂肪源比較，6%魚油組顯著低于脫脂組、豬油組和豆油組，豬油組顯著高于脫脂組，豬油組和豆油組差異不顯著。不同魚油水平比較，2%魚油組和4%魚油組顯著高于6%魚油組和8%魚油組。

2.3 不同脂肪源和不同魚油水平飼料對幼蟹肌肉組織中FAS活性的影響

各試驗組幼蟹肌肉組織中FAS活性如表3所示。由表3可知，豬油組酶的活性顯著高于脫脂組、4%魚油組、6%魚油組和8%魚油組；脫脂組、豆油組、2%魚油組和4%魚油組之間酶活差異不顯著；6%魚油組和8%魚油組酶的活性低于其他各組，且兩組之間差異不顯著。

不同脂肪源和不同魚油水平分別比較的結果與肝胰腺組織中相同。

3 討論

3.1 不同脂肪源和魚油水平飼料對河蟹生長的影響

本試驗中，不同脂肪源飼料對幼蟹生長的影響顯著，4%魚油組、豬油組和豆油組河蟹的體重增長要顯著高于其他組，說明河蟹對這3種脂肪都能良好地利用。特別是4%魚油組對河蟹的生長作用在各組飼料中是最好的，這與陳立僑等[2]的研究結果相似。究其原因可能是這幾種油中的脂肪酸組成差別很大,含量相差甚遠,魚油中含有豐富的EPA(20∶5ω3) 和DHA(22∶6ω3),特別是DHA含量很高,可以促進幼蟹的生長，其他幾種油中的必需脂肪酸(EPA和DHA) 較少或不存在，對幼蟹生長不利[3]。

亞油酸(18∶2ω6)、亞麻酸(18∶3ω3，18∶3ω6)、 EPA(20∶5ω3)和DHA(22∶6ω3)在甲殼動物體內不能自行合成，這4種不飽和脂肪酸是甲殼類的必需脂肪酸。由表1可知，豆油、魚油和豬油中亞油酸+α-亞麻酸+EPA+DHA的比例依次為48.2%、9.7%和12.5%。由此看來，豆油中的必需脂肪酸總量最高，而魚油中的EPA和DHA的含量較高，n-3PUFA總量(23.7%)比豆油(11.1%)和豬油(2.4%)要高出很多，本試驗中4%魚油組生長更快，可推測n-3PUFA，特別是EPA和DHA對河蟹生長有重要的作用。這與汪留全等[4]的試驗結果一致。

在本試驗中，豬油組和豆油組也獲得了較高的增重率，這與前人的研究結果不相一致。可能是因為河蟹具有將亞油酸和亞麻酸轉化為EPA和DHA的能力。任澤林[5]報道，對蝦具有將亞油酸轉化為二十碳四烯酸(20∶4n-6)、將亞麻酸轉化為EPA和DHA的能力，本試驗中豆油組中含有很高的亞油酸(18∶2ω6)和亞麻酸(18∶3ω3)(表1)，豆油組增重的原因可能是因為河蟹脂肪酸轉化的結果。江洪波等[6]也曾報道幼蟹有這樣的能力，但轉化率較低，還需要進一步進行驗證。豬油組的增重比較好，可能是因為適口性比較好，在試驗中發現豬油組的采食比較好。

本試驗中，6%魚油組和8%魚油組對幼蟹體重的增長沒有促進作用。其可能原因是因為添加大量魚油引起FAS活性的顯著下降，脂肪合成速度受到抑制，脂肪的供能作用減小，日糧中的蛋白質被用于供能，同化作用減弱。另外，如果飼料中的可利用能已經滿足魚、蝦的要求，過多的加入脂肪還會對魚、蝦的生長和健康帶來負作用[7,8]。

3.2 不同脂肪源和魚油水平飼料對河蟹脂肪酸合成酶活性的影響

由本試驗結果可知，日糧中添加6%豬油能顯著提高肝胰腺和肌肉中FAS活性，6%豆油對FAS活性影響不大，與脫脂組沒有顯著性差異。添加2%和4%的魚油對FAS活性影響也不大，而且隨著魚油含量的增加，FAS活性會明顯下降，日糧中添加6%和8%的魚油，FAS活性顯著下降。

動物體中脂肪酸合成酶活性的高低，受激素和日糧的影響。而日糧中的脂肪酸含量、脂肪酸飽和程度、鏈的長短、雙鍵位置等對脂肪酸合成酶的活性起著重要的作用。

很多研究都表明，EPA和DHA比亞油酸和亞麻酸對FAS活性的抑制作用要強[9，10]。另外CIarke[9，11]和Dana等[12]研究表明n-3系列脂肪酸對FAS抑制作用比n-6強。本試驗中，魚油的EPA和DHA含量在3種脂肪源中最高，n-3PUFA總量(23.7%)也比豆油(11.1%)和豬油(2.4%)要高出很多，豆油中亞油酸含量很高，所以添加魚油的飼料組中FAS活性受到抑制，而豬油組中FAS活性則較高。

本試驗結果表明，隨著飼料中魚油添加量的不同，FAS活性顯著不同。原因可能是由于多不飽和脂肪酸對FAS抑制作用不僅取決于脂肪中n-3與n-6脂肪酸的量，也取決于脂肪中20C n-3與n-6脂肪酸的比例[11]。

[1]Tian W X.Fatty acid synthase from rat liver[J].J Biol Chem,1985,260:11375～11387.

[2]陳立僑，周忠良．中華絨螯蟹的攝食與營養生理研究[J]．上海水產大學學報，1998，7(8)：24～30.

[3]徐新章，何珍秀，付培峰．不同脂肪源對幼蟹生長的影響[J]．飼料工業，1997，18 (5)：16～18.

[4]汪留全，胡 王，李海洋，等．飼料中DHA與EPA水平對幼蟹生長和飼料利用率的影響[J]．漁業現代化，2003，(6)：39～41.

[5]任澤林，李愛杰.中國對蝦(Penaeuschinensis)脂肪酸轉化能力的研究[J].水產科技情報，1995，55(5)：225～227.

[6]江洪波，陳立僑，周忠良．不同餌料對中華絨螯蟹幼體發育和存活的影響[J]．水產學報，2000，24(5)：442～447.

[7]李愛杰．水產動物營養與飼料學[M]．北京： 中國農業出版社，1996.44～45.

[8]侯永清．水產動物營養與飼料配方[M]．武漢：湖北科學技術出版社，2001.63.

[9]Clarke S D.Dietary polyunsaturated fat uniquely suppress rat liver fatty acid synthase and S14mRNA content[J].J Nutrition,1990,120:225～231.

[10]Ikuo Ikeda.α-linolenic,eicosapentaenoic and docosahexeaenoic acids affect lipid metabolism differently in rats[J].J Nutrition,1994,124:1898～1906.

[11]Clarke S D.Inhibition of triiodothyronine’s induction of rat liver lipogenic enzymes by dietary fat[J].J Nutrition,1993,120:625～630.

[12]Dana R Smith.Depress of lipogenesis in swine adipose tissue by specific fatty acids[J].J Anim Sci,1996,74:975～983.

2010-11-05

湖北省自然科學基金項目(2002AB095)；中國水產科學研究院淡水生態與健康養殖重點開放實驗室開放課題(FEA20040106)

李偉國(1978-),男,湖北漢川人,農學碩士,講師,主要從事動物營養與飼料研究.

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2010.04.010

S963

A

1673-1409(2010)04-S034-04