針刺對局灶性腦缺血大鼠缺血腦組織及血清IL-6的影響*

郭永明，梁憲如

（1.天津中醫藥大學針灸學院，天津 300193；2.武警醫學院附屬醫院，天津 300162）

白介素-6（IL-6）是由多種細胞產生的具有重要生物學活性的細胞因子，它既可誘導急性時相蛋白的產生，也是B細胞終末分化并分泌抗體的必須因子，在免疫調節中發揮著重要作用[1-2]。近年來研究報道，腦缺血后極早期腦內、血漿和腦脊液中IL-6的水平即發生變化[3]，表明IL-6可能參與了急性腦缺血時的炎癥反應等病理生理過程。本實驗采用熱凝法造成大腦中動脈阻塞模型，動態觀察了局灶性腦缺血大鼠腦組織和血清中IL-6的變化及“醒腦開竅”針法的>干預效應。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 選用Wistar大鼠130只（由天津市衛生局實驗動物中心提供），體質量（220±20）克，雌雄各半，隨機分缺血組、針刺組各50只、假手術組25只、正常組5只。前3組又分為3、6、12、24、48 h各時段組，其中缺血組、針刺組每組各10只、假手組每組各5只。

1.2 模型的制作 缺血組及針刺組動物經3%的戊巴比妥鈉（45 mg/kg）腹腔注射麻醉，側臥位固定，于眼眶至耳的中點縱行切開皮膚約1 cm左右，分離并切去部分顳肌，暴露顳骨，做1個約3 mm的骨窗，輕抬腦，可見橫過嗅束向上走行的大腦中動脈（MCA），用加熱的不銹鋼絲輕輕接觸靠近嗅束上緣的大腦中動脈，使之快速凝閉，遇有血管破裂可用小棉球局部輕壓止血，術后創面敷少許抗生素（先鋒Ⅳ），縫合傷口并單籠飼養。假手術組除不凝閉MCA外，余手術步驟同缺血組。

1.3 腧穴的選取及處理 根據“大鼠穴位圖譜”，針刺組選取“醒腦開竅”針法主穴人中、內關，先針刺人中，用雀啄手法10次，繼刺雙側內關穴，直刺捻轉提插瀉法1 min。3 h針刺組，手術后1 h針刺；6、12 h針刺組，手術后1 h針刺，處死前蓄積1次；24、48 h針刺組針刺2次/d，處死前蓄積1次。正常組、假手術組及缺血各組動物同樣抓取，不做其他處理。

1.4 指標檢測及方法

1.4.1 標本收集 各組動物在規定的時間點摘眼球取血，分離血清，-20℃冰箱保存，待測。然后迅速斷頭取腦，在冰盤上分開兩大腦半球，剝離大腦中動脈（MCAO）側皮質，稱質量，按 400 mg∶1 mL 的比例加生理鹽水作組織勻漿，2000 r/min離心15 min，取上清，-20℃冰箱保存，待測。

1.4.2 IL-6 的測定 采用 FT-6SDF γ-晶體閃爍計數儀（天津中醫藥大學第一附屬醫院放免室提供），用放射免疫分析法測定各組動物腦組織及血清中IL-6含量，IL-6檢測試劑盒由北京東亞免疫技術研究所提供，操作程序嚴格按照藥盒說明書進行。

1.5 統計學處理 數據用表示，用SPSS 10.0統計軟件處理，進行方差分析，并進行組間兩兩比較。

2 結果

2.1 局灶性腦缺血大鼠腦組織IL-6含量的變化及針刺的影響 見表1。結果表明局灶性腦缺血后早期腦組織中IL-6含量即明顯升高，48 h基本恢復正常，“醒腦開竅”針法可在缺血早期有效降低腦組織IL-6含量，并使其恢復正常。

表1 各組動物腦組織白介素-6含量（±s）Tab.1 The expression of IL-6 in brain tissue in different groups（±s）μg/g

表1 各組動物腦組織白介素-6含量（±s）Tab.1 The expression of IL-6 in brain tissue in different groups（±s）μg/g

注：與同時段缺血組比較：※P<0.05，※※P<0.01；與同時段假手術組比較：★P<0.05；★P<0.01；與正常組比較：▼P<0.05，▼▼P<0.01。

組別缺血組針刺組假手術組正常組3 h 740.85±149.85▼▼★★222.16±135.23※※▼▼★★480.49±222.88467.51±159.466 h 725.16±134.64▼▼★★185.38±85.27※※▼▼★★460.49±149.04467.51±159.46組別缺血組針刺組假手術組正常組12 h 955.29±215.73▼▼★★261.18±117.93※※▼★★503.97±127.70467.51±159.4624 h 685.72 ±113.28▼▼397.65 ±187.07※※★615.836±116.99467.51±159.4648 h 400.10±98.78★537.97±181.26※577.04±172.15467.51±159.46

2.2 局灶性腦缺血大鼠血清IL-6含量的變化及針刺的影響 見表2。結果表明局灶性腦缺血后血清IL-6含量早期即出現異常升高，然后逐漸降低，至24 h基本降到正常水平，“醒腦開竅”針法可使血清IL-6含量在腦缺血后3到12 h降低，24 h之后增加。

表2 各組動物血清白介素-6含量（±s）Tab.2 The expression of IL-6 in serum in different groups（±s）μg/L

表2 各組動物血清白介素-6含量（±s）Tab.2 The expression of IL-6 in serum in different groups（±s）μg/L

注：與同時段缺血組比較：※※P<0.01;與同時段假手術組比較：★★P<0.01;與正常組比較：▼▼P<0.01。

組別缺血組針刺組假手術組正常組3 h 107.94±65.10▼▼★★63.67±33.90※※31.03±15.7031.89±13.506 h 103.34±47.78▼▼★★50.08±28.84※※25.95±13.3731.89±13.5012 h 85.73±30.78▼▼★★45.75±24.11※※22.94±10.6431.89±13.50組別缺血組針刺組假手術組正常組24 h 25.66±12.7683.34±42.58※※▼▼★★28.85±14.5231.89±13.5048 h 36.77±17.32110.76±32.11※※▼▼★★41.31±6.5231.89±13.50

3 討論

IL-6在腦缺血急性反應期發揮了重要的抗炎作用，在中樞神經內具有神經保護作用[4]。中樞神經系統缺血損傷過程中體內IL-6水平增高，IL-6通過與其受體（IL-6R）結合，識別信號轉導成分gpl30，形成具有生物活性的三元復合體，立即激活細胞內的多種激酶，導致蛋白磷酸化和基因表達，進而發揮其多元化神經營養功能而起到抗缺血損傷、促神經修復等神經保護作用。IL-6促進膠質細胞分泌神經生長因子（NGF）并增強NGF信號轉導，可能是IL-6多元化神經營養作用的基礎[5]。

本次實驗發現局灶性腦缺血3 h腦組織中IL-6含量即明顯升高，12 h達高峰，24 h開始降低，48 h降至正常范圍，而血清中IL-6含量3 h即急劇升高，6、12 h逐漸降低，24到48 h降至正常范圍，該結果與文獻報道[6-9]基本一致。在其他實驗中還觀察到腦缺血后白介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-8含量也發生明顯改變，可以推測腦缺血后機體處于應激狀態，通過神經—內分泌—免疫網絡充分調動機體的抗損傷修復能力，使缺血局部及外周血中IL-6含量急劇增加，以拮抗其他炎性細胞因子的合成分泌，同時發揮IL-6其自身的神經保護作用以減輕缺血性神經損害；當發生腦缺血損害后機體可能通過多器官、多途徑迅速分泌大量IL-6進入血液，到達缺血局部發揮抗損傷及修復作用，在這種應激性保護過程中局部腦組織的反應可能滯后于全身整體，所以外周血中IL-6缺血后3 h即急劇升高而腦組織中12 h才達高峰，同時這種應激反應可能是發生缺血性損害后的機體產生的一種即早反應，因此至48 h腦組織及血中的IL-6基本恢復正常水平。針刺治療后缺血性損害減輕，同時抑制了其他炎性細胞因子的表達或合成，機體的應激反應減輕，因此針刺組早期（到12 h）腦組織及血清中IL-6含量均較缺血組明顯降低，至于血清IL-6含量24 h以后出現異常升高，推測其原因可能是通過針刺多途徑、多靶向的調節作用，促進機體合成分泌大量IL-6進入血液，通過血運到達缺血區腦組織發揮其抗炎、神經保護及促進受損神經元修復的作用。因此，筆者認為“醒腦開竅”針法對IL-6的這種調節作用可能是其治療缺血性腦卒中的作用機制之一。

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