四妙勇安湯對(duì)2型糖尿病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響*

黃金瑋,常 柏

（1.唐山工人醫(yī)院分院內(nèi)三科，唐山 063000；2.天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院，天津 300070）

糖尿病大血管病變屬中醫(yī)的“脫疽”范疇，四妙勇安湯為治療“脫疽”的代表方劑。筆者長(zhǎng)期應(yīng)用四妙勇安湯治療糖尿病大血管病取得了良好的治療效果。本研究試圖以2型糖尿病大鼠為研究對(duì)象探討四妙勇安湯治療糖尿病大血管病變的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 T2DM大血管病變大鼠模型的制備 SPF級(jí)雄性 Wistar大鼠，50 只，體質(zhì)量：（180±20）g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。許可證號(hào)：SCXK津2006－0001。高脂飼料喂養(yǎng)3個(gè)月，在空腹6 h狀態(tài)下，尾靜脈快速注射鏈脲佐菌素30 mg/kg，1周后取尾靜脈血，檢測(cè)血糖＞16.7 mmol/L的大鼠作為2型糖尿病（T2DM）模型大鼠；

1.2 實(shí)驗(yàn)分組、給藥及指標(biāo)檢測(cè) 選取T2DM大鼠36只，按血糖結(jié)合體質(zhì)量分層隨機(jī)分為3組：模型組、羅格列酮治療組、四妙勇安湯治療組，另取12只大鼠作為正常對(duì)照組。各組動(dòng)物每日灌胃給藥1次，正常對(duì)照組和T2DM模型組灌胃等劑量自來(lái)水，治療組給予羅格列酮、四妙勇安湯，連續(xù)給藥4周。實(shí)驗(yàn)期間除正常對(duì)照組給予普通飼料外，其余各組均給予高脂高熱量飼料。用藥前、2周、4周分別取尾靜脈血用強(qiáng)生血糖儀檢測(cè)血糖，4周末股動(dòng)脈取血，離心血清，檢測(cè)各組大鼠糖化血清蛋白；給藥4周后，各組大鼠股動(dòng)脈取血，取血清檢測(cè)血管可溶性細(xì)胞間黏附分子（sVCAM－1），血漿檢測(cè)一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素－1（ET－1）、腫瘤壞死因子－α（TNF－α）。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑 四妙勇安湯飲片由天津中新藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供。馬來(lái)酸羅格列酮，4mg/片，葛蘭素史克（天津）有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：03110001。鏈脲佐菌素（STZ），美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。大鼠TNF－α、sVCAM－1定量EIA試劑盒，尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)（北京）有限公司。大鼠ET-1放射免疫分析藥盒，北京市福瑞生物工程公司提供。NO測(cè)試藥盒：南京聚力生物醫(yī)學(xué)工程研究所提供。

2 結(jié)果

T2DM模型大鼠血清sVCAM-1、血漿TNF-α含量明顯升高；血漿ET-1較正常組上調(diào)，NO明顯下調(diào)。四妙勇安湯及羅格列酮均能顯著降低血清sVCAM-1、血漿TNF-α含量，顯著降低血漿ET-1的含量，顯著提高血漿NO含量（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

3 討論

糖尿病大血管病變屬中醫(yī)的“消渴”“脫疽”范疇，屬于糖尿病的脈損階段，治療上把握“陰虛為本，燥熱為標(biāo)”的本虛標(biāo)實(shí)的核心病機(jī)。四妙勇安湯載于清代鮑相敖《驗(yàn)方新編》，方能滋陰降火，和營(yíng)解毒，由金銀花、玄參、當(dāng)歸和甘草組成，為治療“脫疽”的代表方劑，臨床廣泛用于下肢血管病變。筆者長(zhǎng)期應(yīng)用四妙勇安湯治療糖尿病大血管病取得了良好的治療效果。

表1 四妙勇安湯對(duì)T2DM大鼠血清sVCAM-1、血漿TNF-α、NO、ET-1的影響 (±sTab.1 Effects of Simao yongan decoction on serum levels of sVCAM-1,plasma TNF-α,NO,ET-1 in diabetic rats(±s

表1 四妙勇安湯對(duì)T2DM大鼠血清sVCAM-1、血漿TNF-α、NO、ET-1的影響 (±sTab.1 Effects of Simao yongan decoction on serum levels of sVCAM-1,plasma TNF-α,NO,ET-1 in diabetic rats(±s

注：與正常對(duì)照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別正常對(duì)照組模型組羅格列酮組四妙勇安湯組sVCAM-1（mg/L）4.06±0.326.01±0.73▲4.46±0.42*4.08±0.39*TNF-α（ng/mL）9.86±2.7646.89±12.06▲28.02±8.62*▲16.85±7.33*ET-1（ng/mL）77.58±9.21127.83±14.52▲▲87.95±8.01**93.24±9.12**NO（μmoL/L）75.85±6.9645.72±7.03▲▲63.23±8.47**67.35±7.87**

內(nèi)皮功能紊亂是動(dòng)脈粥樣硬化的起始階段，也是其中心環(huán)節(jié)。血管內(nèi)皮功能同多種因子相關(guān)。VCAM－1是血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的黏附分子，屬于免疫球蛋白超家族，表達(dá)于細(xì)胞表面的VCAM－1脫落后進(jìn)入血液成為可溶性細(xì)胞間黏附分子1（sVCAM-1）。盧曙芳等[1]認(rèn)為頸動(dòng)脈內(nèi)膜厚度（IMT）與血清sVCAM-1呈正相關(guān)，本研究提示糖尿病組血清sVCAM-1水平明顯高于正常對(duì)照組，說(shuō)明sVCAM-1參與了2型糖尿病大血管病變的病理過(guò)程，其水平增高可能是血管內(nèi)皮激活或早期動(dòng)脈硬化的分子標(biāo)志，并可作為糖尿病大血管病變的血清學(xué)標(biāo)志。

TNF－α 由單核/巨噬細(xì)胞活化產(chǎn)生，TNF－α 的高表達(dá)，刺激sVCAM－1，使其mRNA和蛋白質(zhì)在血管平滑肌表達(dá)，使血管平滑肌與單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞黏附，引起動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）損傷，導(dǎo)致凝血/纖溶系統(tǒng)失衡及促進(jìn)炎性細(xì)胞對(duì)VEC黏附，導(dǎo)致血栓調(diào)節(jié)素在內(nèi)皮表面的下降調(diào)節(jié)作用，使凝血酶催化蛋白激酶C（PKC）活性下降，在糖尿病血管并發(fā)癥的形成和發(fā)展中起著重要作用[2]。內(nèi)皮素（ET）和NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）合成及釋放的一對(duì)血管縮、舒因子，NO能舒張血管，抑制血小板黏附和聚集，抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移；ET是已知最強(qiáng)的縮血管多肽，具有促血管收縮和平滑肌細(xì)胞增殖分裂的作用。ET可負(fù)性調(diào)節(jié)內(nèi)皮NO的釋放，NO濃度的增高可抑制ET的生成，兩者的動(dòng)態(tài)平衡維持著正常的血管內(nèi)皮功能，ET的升高和NO的減少是血管內(nèi)皮損傷的標(biāo)志。本研究中TNF-α，ET水平在模型組明顯升高，NO水平明顯降低，均為糖尿病血管病變發(fā)生發(fā)展的重要因素。

羅格列酮能夠改善胰島素抵抗，并能通過(guò)PPAR-γ受體保護(hù)血管內(nèi)皮功能。本研究結(jié)果顯示，羅格列酮及四妙勇安湯均能顯著降低糖尿病大鼠血管并發(fā)癥模型血漿ET-1、TNF-α含量，升高血漿NO含量，降低PKC通路及氧化應(yīng)激所介導(dǎo)的TNF-α誘導(dǎo)的sVCAM高表達(dá)，抑制單核細(xì)胞向血管內(nèi)皮的黏附，且四妙勇安湯可能更優(yōu)于羅格列酮，能夠更有效保護(hù)血管內(nèi)皮功能，阻滯或延緩糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，降低糖尿病大鼠血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)。

[1]盧曙芳，沈建國(guó)，朱麒錢(qián)，等.2型糖尿病患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度與細(xì)胞間黏附分子1、c反應(yīng)蛋白的相關(guān)性[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2006，22(4)：358-359.

[2]Therry Couffinlad,TNF-αstimulate ICAM-1(in tercellular adhesion molecule-1)expression in human vascular smooth muscle cells Atherosclerosis Thromb,2003,13(3)∶407-417.