針刺背俞穴對慢性疲勞模型大鼠行為學(xué)的影響

摘要 目的:觀察慢性疲勞大鼠的行為學(xué)變化及研究針刺其背俞穴的治療作用。方法:運用慢性束縛及強制冰冷水游泳復(fù)合刺激因素造模，并根據(jù)背俞穴的特異性選取肺俞、心俞、肝俞、脾俞、腎俞等穴進(jìn)行針刺治療干預(yù)，以艾灸和人參皂甙灌胃進(jìn)行對比，用曠場實驗和鼠尾懸掛實驗進(jìn)行觀測評定。結(jié)果:模型組大鼠活動能力下降，情緒有抑郁傾向等疲勞癥狀，針刺、艾灸背俞穴和灌服人參皂甙均能改善各項評測成績。結(jié)論:針刺背俞穴能有效改善模型大鼠由慢性疲勞所帶來的體力和精神上的癥狀。

關(guān)鍵詞 背俞穴 慢性疲勞 行為學(xué)

隨著當(dāng)代社會生活節(jié)奏的加快，臨床上以精神緊張、容易疲勞為主訴的患者越來越多，慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndmme，CFS)日益受到醫(yī)學(xué)界的重視。CFS雖一時危及不到生命，但會嚴(yán)重影響患者的健康及生活質(zhì)量。它帶給患者的不僅僅是生理疲勞，更多的是心理上的變化，將降低機體對外環(huán)境的興奮性及應(yīng)激性。針灸作為祖國醫(yī)學(xué)重要的傳統(tǒng)療法之一，在臨床上治療慢性疲勞綜合征已經(jīng)取得了較好的療效，也廣泛的被患者所肯定。本實驗通過針刺慢性疲勞模型大鼠背俞穴，觀察研究其對慢性疲勞模型大鼠行為學(xué)上的變化與影響，為優(yōu)化臨床針灸治療CFS提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組雄性3月齡SPF級SD大鼠60只，體重160-180g，雌雄各半。根據(jù)隨機數(shù)字表法將大鼠隨機分為正?？瞻捉M(Ⅰ組)、模型組(Ⅱ組)、針刺組(Ⅲ組)、艾灸組(Ⅳ組)和藥物組(Ⅴ組)，每組雌雄大鼠各6只。

1.2 動物模型建立大鼠飼養(yǎng)于室溫22±2℃正常光照的SPF級實驗室中，同組雌雄分開。適應(yīng)2天后進(jìn)行造模。除空白組(I組)不作造模處理外其余各組均采用慢性束縛法和強制冰冷水游泳法隔天交替進(jìn)行制備CFS大鼠模型，規(guī)定單號日期進(jìn)行束縛，雙號日期進(jìn)行冷水游泳，持續(xù)14天。

慢性束縛法:將需造模的三組大鼠均隔天束縛1次，每次束縛過程四組同步進(jìn)行，但每天束縛的時間不同，隨機確定(每天上午8-11點，或下午2:30-5:30)。每次束縛時，使大鼠鉆進(jìn)自制的束縛筒內(nèi)(大小以可以裝進(jìn)實驗大鼠但不能使其掙扎轉(zhuǎn)頭為宜)，并調(diào)節(jié)到其不產(chǎn)生強烈反抗的緊張程度，平架在木板上。6min后取出。在整個束縛過程中，正常組動物在同一環(huán)境中，但不予進(jìn)食和進(jìn)水。

強制冰冷水游泳法:準(zhǔn)備兩個游泳池，規(guī)格為185cm×58cm×73cm，游泳時水深為50em，水溫為10℃±I℃，將同組雌雄大鼠同時分別置于游泳池，10分鐘后取出。游泳期間防止大鼠團(tuán)抱自救或因力竭沉入水中。

1.3 治療處理各組均在每天造模處理后05h內(nèi)開始進(jìn)行治療處理，每日1次，連續(xù)14天。

正常空白組(Ⅰ組)、模型組(Ⅱ組):不進(jìn)行任何治療處理;

針刺組(Ⅲ組):針刺治療，針刺方法為:依據(jù)中國中醫(yī)藥出版社出版的《針灸治療學(xué)》慢性疲勞綜合征一節(jié)，同樣選穴肺俞、心俞、肝俞、脾俞、腎俞，參照《實驗針灸學(xué)》定位。第一組穴位選擇肺俞、心俞;第二組穴位選擇肝俞、脾俞、腎俞。針刺前先用苦味酸標(biāo)記以上穴位，然后將大鼠放在自制的鐵絲固定籠中，調(diào)整籠的大小，以不產(chǎn)生運動為準(zhǔn)。兩組穴位每日交替選用，采用江蘇醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的0.15寸30號毫針，直刺5～9mm，針刺手法采用捻轉(zhuǎn)補法，留針30min，每5min行針1次;

艾灸組(Ⅳ組):艾灸治療，選取針刺組同樣的穴位，將大鼠固定后以無煙艾條點燃置于穴位上2—3cm處，每穴每次灸10min，兩組穴隔天交替進(jìn)行。

藥物組(Ⅴ組):人參皂甙灌胃治療，人參皂甙粉劑由廣州威佳生物化學(xué)試劑公司提治療。本組模型大鼠給予人參皂甙水溶液(70mg/kg/d)灌胃治療。

1.4 行為學(xué)測試方法14天后，造模與治療結(jié)束，立即開始行為學(xué)方面的測定。內(nèi)容包括探究行為及情緒反應(yīng)(曠場實驗)和體力情況及疲勞的程度(鼠尾懸掛實驗)。

曠場實驗(Open-field法):(參考Katz方法)用于測定大鼠的探究活動和情緒反應(yīng)。將大鼠置于敞箱底面的中心方格內(nèi)，以動物穿越底面的格數(shù)(四爪均進(jìn)入的方格方可記數(shù))記錄為水平運動次數(shù)，以后肢直立次數(shù)(兩前爪騰空或攀附箱壁)記錄為垂直運動次數(shù)。室內(nèi)暗光，安靜，每次實驗后均將糞便尿液清除干凈。每只動物測定1次，每次測定3min。穿行次數(shù)少于10次的將不納入統(tǒng)計。

鼠尾懸掛實驗:用于測定大鼠體力情況及疲勞的程度。具體操作為將距大鼠尾端1cm的部分穿過中央鉆有直徑1cm的孔的一水平有機玻璃板，板離地面1m左右，使大鼠呈倒掛狀。大鼠為克服不正常的體位而掙扎活動，但活動一定時間后，出現(xiàn)間斷性“不動”，顯示“失望”狀態(tài)。觀察5min內(nèi)大鼠的不動時間(處于完全靜止不動狀態(tài)的總時間1。

1.5 數(shù)據(jù)的處理采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件處理。實驗結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示，組間差異采用方差分析，用Duncan’s檢驗。

2 結(jié)果

2.1 曠場實驗由表1可知，正常組、針刺組、艾灸組與藥物組的穿行次數(shù)明顯多于模型組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，除模型組外各組無明顯差異。模型組直立次數(shù)的均數(shù)少于正常組，但差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(考慮實驗環(huán)境影響);針刺組、艾灸組、藥物組的直立次數(shù)要多于模型組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 鼠尾懸掛實驗由表2可知，正常組、針刺組、艾灸組與藥物組的不動時間明顯少于模型組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，除模型組外各組無明顯差異，但艾灸組的不動時間最短。

3 分析與討論

大量的臨床病例及研究證實，CFS發(fā)病后，除常見的體力疲勞癥狀外，常伴有精神抑郁或急躁、健忘等精神神經(jīng)癥狀。祖國醫(yī)學(xué)雖無CFS病名之說，但其與古人記載的某些病癥在病因、病機、癥狀乃至治療都與CFS有相似之處，如張仲景在《金匱要略》中的百合病、臟躁病，李東垣在《脾胃論》中所論的脾胃內(nèi)傷病。中醫(yī)認(rèn)為，CFS病位以肝、脾、腎為主，尤以肝為要，由于積勞內(nèi)傷或病后久虛不復(fù)，臟腑生理功能不相協(xié)調(diào)，與心、肺、肝、脾、腎五臟的氣血、陰陽失調(diào)相關(guān)。

在曠場實驗中，模型組大鼠的穿行次數(shù)、直立次數(shù)都明顯少于正常組，可以看出CFS降低了大鼠的空間探究能力及其對陌生環(huán)境的好奇性，有抑郁的傾向。鼠尾懸掛實驗中大鼠的不動時間也明顯要多于其余各組，說明模型組大鼠經(jīng)造模后體力下降明顯，活動易出現(xiàn)疲勞。

針刺組及艾灸組中，我們根據(jù)CFS的病因病機，參考教科書，制定了肺俞、心俞、肝俞、脾俞、腎俞這一組主治穴位。背俞穴是臟腑之氣輸注于背部膀胱經(jīng)上的俞穴，與體內(nèi)臟腑相連系，可以直接調(diào)理各臟腑功能失調(diào)。肺俞補氣行氣，心俞調(diào)神定志，肝俞、脾俞兩穴配合調(diào)肝補脾，以解氣機之郁滯、復(fù)脾胃之升降，腎俞調(diào)補真元。各穴共同行氣補虛，調(diào)補肝脾，調(diào)心安神，以恢復(fù)五臟功能協(xié)調(diào)，解除機體疲勞。而藥物組，據(jù)前人研究，人參皂甙可以通過抑制羥、氧自由基產(chǎn)生、過氧化氫的脂質(zhì)過氧化作用及加速自由基清楚等途徑發(fā)揮抗氧自由基的作用，從而起到緩解疲勞的作用。各治療組的CFS大鼠經(jīng)相應(yīng)的治療后，曠場實驗和鼠尾懸掛實驗的結(jié)果均好于模型組，疲勞癥狀明顯改善，據(jù)統(tǒng)計分析差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。證明以背俞穴為主穴治療CFS無論是針刺還是艾灸均能取得良好效果，選取背俞穴為主穴直接調(diào)理臟腑以治療CFS的思路值得研究和推廣。本次實驗未能體現(xiàn)出各治療組間的治療效果的明顯差異(各治療組的結(jié)果差異不具統(tǒng)計學(xué)意義)，考慮為實驗設(shè)計方案的不足，本次實驗的重點也不在此。

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