ELISA與ICA法對甲胎蛋白檢測的比較

鄭定容 劉 仿

（1.廣東醫學院附屬西鄉人民醫院檢驗科，廣東深圳 518102；2.東莞市廣東醫學院實驗教學管理處，廣東東莞 523808）

甲胎蛋白（AFP）主要在胎兒肝中合成，分子量6.9萬，在胎兒13周AFP占血漿蛋白總量的1/3[1]。在妊娠30周達最高峰，以后逐漸下降，出生時血漿中濃度為高峰期的1%左右，約40mg/L，在周歲時接近成人水平（低于30μmg/L）。但當肝細胞發生病變時，AFP基因表達重新開放，于血清中可檢測到AFP 濃度顯著升高[2]。目前，定量檢測血清AFP的方法很多，主要有化學發光法、放射免疫法和酶聯免疫法，本研究分別應用對比試驗、回收試驗和精密度試驗進行評價。

1 資料與方法

1.1 實驗對象

樣本取自2006年4月～2009年12月深圳市寶安區西鄉人民醫院住院或門診原發性肝癌患者，隨機抽檢30例，年齡21～80歲，平均（55.0±5.3）歲。所有病例根據臨床表現，經B超、CT、MRI及各項實驗室指標檢查確診，部分病例經手術后病理證實。

1.2 實驗試劑

甲胎蛋白診斷試劑盒（鄭州市博賽生物技術股份有限公司）；AFP定值質控品（美國貝克曼庫爾特公司，批號：33219））：7.00ng/mL、80.00ng/mL、1725.00ng/mL；AFP定值標準品（美國貝克曼庫爾特公司）0.00ng/mL、2.50ng/mL、5.00ng/mL、25.00ng/mL、100.00ng/mL、500.00ng/mL、3000.00ng/mL。

1.3 實驗儀器

ACCESS全自動化學發光測定儀（美國貝克曼庫爾特公司）、EPPENDDORF 5415 D高速冷凍離心機（德國EPPENDDORF公司）、RA-22100C Milcrop late Reader酶標儀、RA-2600CMilcrop lateWasher洗板機（深圳雷杜生命科學股份有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 對比實驗 將隨機抽檢的30份患者標本分別用兩種方法進行檢測，并對兩種方法進行比較。設y為ICA 法所測AFP含量，x為ELISA所測AFP含量，最后進行回歸方程。

1.4.2 回收試驗 取不同濃度的混合血清，AFP 濃度為10.71 ng/mL、18.08 ng/mL、46.83 ng/mL，分別加入不同濃度定值血清，用ICA法和ELISA法分別檢測其回收率。

1.4.3 精密度試驗比較 取混合血清（AFP含量為56.00 ng/mL），分別用兩種方法同時平行20次測定，計算批內誤差；連續10d，2次/d，計算批間誤差。

1.5 統計學處理

使用SPSS13.0 for windows統計軟件包。

2 結果

ICA 法的批內、批間精密度均優于ELISA法，ICA法在檢測準確度和穩定性上，較之ELISA具有很強的優越性。見表1。

表1 精密度實驗（%）

將隨機抽檢的30份患者標本分別用兩種方法進行檢測，并對兩種方法進行比較。設y為ICA 法所測AFP含量，x為ELISA所測AFP含量，則回歸方程： y=1.54x＋9.09，相關系數r=0.982。該結果顯示，ELISA測得的AFP含量與ICA法測的AFP含量存在回歸關系，x和y正相關，且相關性較好。

取不同濃度的混合血清，AFP 濃度為10.71ng/mL、18.08ng/mL、46.83 ng/mL，分別加入不同濃度定值血清，用ICA法和ELISA法分別檢測其回收率。用ICA和ELSIA測得的回收率分別在96.84%～98.85%和93.90%～98.16%，平均回收率分別為98.04%和96.42%，ICA的檢測精度高，穩定性強，回收率高于ELISA。見表2。

3 討論

3.1 ELSIA在AFP腫瘤標記物檢測中的應用

甲胎蛋白是1956 年由Bergstrandh和Czar在人胎兒血清中發現的一種甲種球蛋白，它被認為是輔助診斷肝癌最好的臨床檢測方法[3]。ELISA以快速、簡便實效的優勢在基層廣泛應用。雖然ICA法的線性范圍、精密度等方面明顯優于ELISA法，但是在人體正常值參考范圍內的AFP檢測，ELISA法具有快速、簡便、成本低廉的優點，在健康體檢人群普查，良性肝病患者定期檢查中起到很好篩查作用。由于ELISA反應中難以避免的“鉤狀效應”[4]，即測定顯色隨著待測標本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測定吸光度隨抗原濃度的增加而開始下降至不顯色，容易造成假陰性結果，AFP高值反而測為低值，樣本需稀釋才能準確測定。同時，ELISA反應存在手工操作誤差，重線性不及ICA法。

表2 回收率實驗(n=20)

3.2 ICA在AFP腫瘤標記物檢測中的應用

ICA采用經典的免疫學原理，具有高度特異性，不受黃疸、脂血、溶血等因素影響。自動化程度高，減少了人為操作誤差；方法靈敏度高可獲得很低的檢測下限值；穩定性好，標準曲線2～4周校正一次，患者可隨到隨做且無放射性污染。

ACCESS型全自動微粒子化學發光免疫分析系統以磁性微粒子為載體[5]，最大限度擴大包被面積，以堿性磷酸酶標記抗原、抗體，采用最靈敏的發光底物AMPPD磁性微粒子包被技術的應用大大提高檢測的靈敏度，使化學發光法的線性范圍更寬；光電倍增管接受發光強度信號（發光穩定后，記錄11次/s，取9次均值為結果）；超聲波清潔系統，防止交叉污染 （＜1PPM），使得檢測結果更為穩定可靠。彌補了ELISA法批間誤差大、結果不穩定的缺點。徹底解決了放射免疫檢測的污染問題以及方法繁瑣。

ICA 為化學發光法類型之一，將發光技術與免疫反應和計算機技術結合。ICA 法與其它標記免疫分析相比，具有檢測靈敏度高、精密度好、準確性高、無放射性污染、檢測線性范圍寬、自動化程度高、操作簡便等諸多優點，是目前成為免疫檢測廣泛采用的新技術之一[6]。具有靈敏度高、示蹤物穩定、標準曲線劑量范圍寬、自動化程度高、操作簡便等許多優點，在臨床和科研中得到了日益廣泛的應用。

[1] Hayashi T，Arai G，HyochiN，et al.Suppression of spermatogenesis in ipsilateral and contralateral testicular tissues in patientswith seminoma by human chorionic gonadotropin beta subunit[J].Urology，2001，58（2）：251-257.

[2] Acevedo H F.Human chorionic gonadotrop in （ HCG），the hormone of life and death： a review[J].Journal of Experimental Therapeutic and Oncology，2002，2（3）：133-145.

[3] Goldstein MJ，Mitchell EP.Carcinoembryonic antigen in the staging and follow up of patientswith colorectal cancer[J].Cancer Invest，2005，23：338-351.

[4] 魏東，鄧愛文，牟成惠. ICA，RIA和ELISA法測定甲胎蛋白的比較[J].第一軍醫大學學報，2001，21（6）：459-460.

[5] 凌慶枝，周昕，張紀原.磁性分離酶聯免疫技術檢測人類絨毛膜促性腺激素及其臨床意義分析[J].生物學雜志，2000，17（3）：32.

[6] 羅俊敏，朱劍峰，宋小龍.動態檢測HCG濃度對滋養葉細胞疾病的臨床判斷[J].中國誤診學雜志，2002，2（9）：1317-1318.