高效液相色譜法同時測定棗仁安神膠囊中7種木脂素類成分

許慧君， 吉 祥， 張蘭桐*， 鐘 穎， 易 自

(1．河北醫科大學藥學院藥物分析教研室，河北石家莊050017;2．河北石家莊樂仁堂制藥有限責任公司，河北石家莊050000)

棗仁安神膠囊來源于中華人民共和國衛生部藥品標準《中藥成方制劑》11冊［1］(標準編號:WS3-B-2164-96)。棗仁安神膠囊是以酸棗仁(炒)、丹參、五味子(醋炙)等藥味制成內服的制劑，具有補心養肝，安神益智功效，用于神經衰弱患者心肝血虛證引起的失眠，兼有頭暈、健忘等功效。方中五味子性味酸、溫，歸入肺、腎、心經，具有斂肺滋腎、生津斂汗、寧心安神之功效，與酸棗仁配伍用于心悸怔忡及失眠［2-6］。目前文獻報道僅對棗仁安神膠囊中單一成分進行質量控制［7-12］。故測定五味子中多個木脂素類有效成分的量對于棗仁安神膠囊的質量控制具有非常重要的意義。本研究采用高效液相色譜法測定了棗仁安神膠囊中7種木脂素類成分，進一步為棗仁安神膠囊的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

Agilent1200液相色譜儀(美國Agilent公司);BP211D型電子分析天平(德國Satrorius公司)。乙腈、甲醇(色譜純，美國Tedia公司);水為重蒸水。對照品由復旦大學藥學院提供。棗仁安神膠囊購于貴州同濟堂制藥有限公司。

2 方法與結果

2．1 色譜條件 色譜柱為 Brava BDS C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:A 相為乙腈，B 相為水;柱溫:30℃;體積流量:0．8 mL/min;檢測波長:225 nm;進樣量:20 μL;線性梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Tab．1 Gradient elution program

2．2 對照品溶液的制備 分別稱取對照品戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素適量，精密稱定，加甲醇分別制成約1 mg/mL的對照品溶液。分別取各對照品適量加甲醇制成適當質量濃度的混合對照品貯備液，搖勻，0．45 μm 濾膜濾過，備用。

2．3 供試品溶液的制備 取重量差異項下的棗仁安神膠囊內容物1．0 g，精密稱定，加甲醇溶解，并定容于25 mL量瓶中，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補充所失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，離心，0．45 μm 濾膜濾過，棄去初濾液，續濾液作為供試品溶液。

2．4 陰性溶液的制備 按處方比例制備缺五味子的陰性空白樣品，，并按2．3項下方法制成陰性樣品溶液。

2．5 方法專屬性考察 分別精密吸取前述混合對照品溶液、供試品溶液與陰性供試品溶液各20 μL，按2．1項下色譜條件進樣測定，色譜圖見圖1。戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素與其它峰分離度均大于1．5，分離度良好，各對照品對應色譜峰理論塔板數大于2 000，不受其他組分的干擾。

2．6 線性關系考察 精密量取對照品貯備液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0 mL 置 10 mL 量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度。精密吸取20 μL，注入液相色譜儀測定。以質量濃度X(μg/mL)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線。回歸方程，線性范圍及相關系數見表2。

2．7 精密度試驗 精密吸取同一混合對照品溶液各20 μL，連續進樣5次，記錄色譜峰的峰面積。結果戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的RSD值分別為 0．59%、0．85%、0．64%、0．81%、0．68%、0．92%和0．48%，均符合精密度試驗的要求，說明該方法的精密度良好。

圖1 對照品(A)，棗仁安神膠囊(B)和陰性樣品(C)的HPLC色譜圖Fig．1 HPLC chromatograms of reference substances(A)，Zaoren Anshen Capsules(B)and negative samples(C)

表2 7種有效成分的回歸方程、相關系數和線性范圍Tab．2 Regression equations，correlation coefficient and linearity ranges of the seven compounds

2．8 重復性試驗 取棗仁安神膠囊5份，每份精密稱取內容物約1．0 g，按2．3項下方法制備供試品溶液，進樣20 μL進行測定。結果戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素質量分數平均值(n=5)分別為1．651、2．247、0．732、0．877、0．433、5．710、0．941 mg/g;RSD 值分別為 0．62%、0．59%、0．48%、0．83%、0．74%、0．68% 和 0．55%。均符合規定，表明本方法重復性良好。

2．9 穩定性試驗 取同一棗仁安神膠囊供試品溶液分別于 0、4、8、12、18、24 h 進樣分析，記錄峰面積。戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的RSD值分別為 0．67%、0．52%、0．86%、0．73%、0．70%、0．62%和0．59%。結果表明供試品于溶液室溫條件下放置24 h穩定性良好。

2．10 回收率試驗 精密稱取2．9項下已測定的棗仁安神膠囊內容物0．5 g，共6份，分別精密加入對照品適量，按2．3項下方法操作，制備供試品溶液并進樣分析。結果戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的平均回收率分別為 99．50%、99．95%、99．72%、99．78%、100．51%、99．93% 和 99．23%。RSD 值分別為 0．80%、0．57%、1．35%、0．73%、1．27%、0．26%和0．93%。結果表明該方法回收率良好，見表3。

2．11 樣品測定 取3批棗仁安神膠囊，按2．3項下制備供試品溶液，按上述方法進行測定，記錄色譜峰面積，將樣品中7種木脂素的峰面積代入相應標準曲線，分別計算戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的質量分數。每批樣品測定3份，結果見表4。

表3 7種成分加樣回收率考察結果Tab．3 The results of recovery

表4 棗仁安神膠囊中7種有效成分測定結果(n=3)Tab．4 The contents of the seven compounds in Zaoren Anshen Capsules(n=3)

3 討論

本研究建立了HPLC-DAD法同時測定棗仁安神膠囊中7種木脂素類成分，其分別為戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素。在該色譜條件下7種有效成分均能完全分離，陰性溶液無干擾，經精密度、重復性、回收率試驗證明該方法簡便、快捷，準確度較好且靈敏度高，可以為棗仁安神膠囊的質量控制提供科學依據。

流動相選擇中，考察了甲醇-水、乙腈-水等條件，結果乙腈-水作為流動相對多個木脂素類成分的洗脫較為理想，再一系列的摸索，確定梯度洗脫條件后，各有效成分保留時間均在65 min內，并且各色譜峰分離度較好，理論塔板數較高。由于本研究中待測組分均為木脂素類成分，結構較為相近，化學性質也進而相近。故在檢測波長的選擇中，以各成分共同的最大吸收波長225 nm為檢測波長。

本研究中對棗仁安神膠囊的提取方法進行了考察，采用了加熱回流和超聲提取。經比較，結果表明超聲提取所需溶劑量少、時間短并且提取效率高。從而對超聲提取中的各個影響因素進行考察，包括溶劑的選擇、溶劑的量以及提取時間的影響。最終確定其提取條件為90%乙醇作為溶劑，固液比為1∶25(g/mL)，最佳提取時間為30 min。

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