人肝癌SMMC-7721細胞培養(yǎng)體會①

王玥 李應東

(甘肅中醫(yī)學院 蘭州 730060)

目前細胞培養(yǎng)技術已成為很重要的生物技術之一,它是醫(yī)學、新藥開發(fā)等實驗研究的基礎技術,其作用不容忽視。人肝癌SMMC-7721細胞屬于肝癌細胞系,現(xiàn)已廣泛用于藥物毒理、抗腫瘤等方面的研究,目前關與人肝癌SMMC-7721細胞的培養(yǎng)文獻還比較少,我們對于人肝癌SMMC-7721細胞的培養(yǎng)條件和方法上進行了探索,現(xiàn)總結出一些經驗。

1 資料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 實驗細胞 人肝癌SMMC-7721細胞株由甘肅蘭州大學附屬二院泌尿研究所惠贈。

1.1.2 主要試劑 Dulbcco’s Modified Eagle’Medium(DMEM)培養(yǎng)基:北京賽默飛世爾生物化學制品有限公司磷酸鹽緩沖液(PB S):氯化鈉8.00g、十二水磷酸氫二鈉2.885g、氯化鉀0.20g、磷酸氫二鉀0.20、三蒸水配制,0.22μm濾膜過濾除菌,PH7.2～7.4,4℃保存。新生牛血清(NBCS):杭州四季青生物材料工程研究所-20℃保存,使用前4℃溶解,56℃滅活30min。胰蛋白酶消化液:胰蛋白酶(T rypsin 1:250,GIBCO公司)用PBS液配制成濃度為0.25%溶液,0.22μm濾膜過濾除菌,4℃保存。青霉素、鏈霉素溶液:0.22μm濾膜過濾除菌,4℃保存。

1.1.3 實驗儀器 二氧化碳培養(yǎng)箱:BB16UV德國Heraeus公司;超凈工作臺:VS-1300L型,蘇凈集團蘇州安泰空氣技術有限責任公司;倒置相差光學顯微鏡:IX71型,日本Olympus公司產品;恒溫水浴鍋:DZW-4型,金壇市恒豐儀器廠;純凈水系統(tǒng):Milli-Q Biocel美國Millipore公司;電熱恒溫干燥箱:風熱式,101型,北京科偉永鑫實驗儀器設備廠;臺式滅菌器:TMQ.J-2540型,山東新華醫(yī)療器械股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 SMMC-7721細胞的復蘇方法 將凍存的細胞用鑷子捏住在提前預熱的37℃水浴鍋中快速搖晃將細胞解凍,整個過程一般不要超過2min,然后將細胞用尖吸管轉移至細胞培養(yǎng)瓶中(復蘇的時候細胞最好不要分瓶),密度一般為1×104cell/mL為宜。……