熒光分光光度法檢測維庫溴胺的血藥濃度

趙 麗，郭越潔，張勤功，趙真英

(1.山西省腫瘤醫院麻醉科，山西 太原 030013; 2.山西醫科大學，山西 太原 030001)

維庫溴胺是一種中短效非去極化肌松藥，主要優點是恢復速率快和無心血管副作用[1]，目前已成為臨床麻醉中最常用的非去極化肌松藥之一。測定維庫溴胺的血藥濃度，對于指導臨床合理用藥具有重要意義。為適應臨床藥物代謝動力學研究的需要，筆者建立了測定維庫溴胺血藥濃度的熒光分光光度法，現報道如下。

1 儀器與試藥

美國瓦里安熒光分光光度計;GL－88 B型旋渦震蕩器;高速冷凍離心機(北京醫用離心機廠);微量加液器。維庫溴胺標準品(浙江仙琚制藥有限公司)，需當日配制;四氯四碘熒光素應用液(0.5 g/L)，使用前需純化，當日配制;0.2 mmol/L碳酸緩沖液，pH為10.5;氯仿、丙酮等均為分析純。

2 方法與結果

2.1 熒光分析條件選擇

精密量取維庫溴胺適量，置量瓶中，用水溶解并稀釋成1 g/L的貯備液備用。精密量取維庫溴胺貯備液置量瓶中，加水稀釋成1μg/mL的溶液，置熒光分光光度計上掃描(激發、發射狹縫均為10 nm)激發光譜及發射光譜。結果見圖1，最大激發波長為550.00 nm，最大發射波長為590.00 nm。

圖1 維庫溴胺的激發光譜和發射光譜

2.2 樣品提取

取肝素抗凝全血，用高速冷凍離心機以4 000 r/min離心10 min，吸取上清血漿1 mL，保存在－20℃條件下，備用。

2.3 生化測定步驟

選用帶塞塑料離心管，依次加入內含維庫溴胺的標準液或血漿1 mL，碳酸氫鈉緩沖液1 mL，熒光素工作液0.5 mL，氯仿7 mL，每加入1種試劑后均需要在液體混合器上充分混勻;將離心管放置在震蕩器上震蕩2 min;將離心管放置在高速冷凍離心機中，選擇10 000 r/min，10℃ 條件離心10 min;離心完畢，吸棄上清水相，精確吸取有機相0.5 mL，置內含3.5 mL丙酮的帶塞玻璃管，充分混勻后待測定。熒光測定選擇激發/發射波長為550/590 nm，狹縫10 nm。

2.4 方法學考察

線性關系:取維庫溴胺貯備液，精密配置成質量濃度分別為0.05，0.10，0.50，1.00，1.50，2.00 μg/mL 的溶液，以質量濃度為橫坐標、熒光強度為縱坐標繪制標準曲線。維庫溴胺質量濃度在0.05～2.00 μg/mL范圍內與熒光強度呈線性關系。在水溶液中，測定的熒光強度與藥物質量濃度之間的回歸方程為 Y(熒光強度)=3.247+5.63 × 水中藥物質量濃度(μg/mL)，r=0.997 6。在試管中分別加入1 mL空白血漿，再加入維庫溴胺標準溶液，使血藥濃度相當于 0.05，0.10，0.50，1.00，1.50，2.00 μg/mL，按 2.3 項下方法進行測定，血漿中熒光強度與藥物質量濃度之間的回歸方程為Y(熒光強度)=1.235+4.01 ×血藥濃度(μg/mL)，r=0.995 8。

穩定性:配制維庫溴胺血漿標本質量濃度為0.5 μg/mL，考察血漿樣品在－20℃條件下，保存0，2，5，10 d及室溫放置2 h的穩定性。結果見表1。

表1 血漿標本放置后質量濃度變化(n=6)

精密度:分別配制含維庫溴胺的低、中、高3種質量濃度(0.1，1.0，2.0μg/mL)的血漿標本各6份，進行重復測定。結果見表2。

提取回收率:配制含不同質量濃度的維庫溴胺標準血樣，經萃取后測定其熒光強度，同法測定不經萃取的標準維庫溴胺熒光強度，用經萃取后測定的熒光強度值除以不經萃取的標準維庫溴胺的熒光強度乘以100%，計算提取回收率。結果見表2。

表2 人血漿中藥物濃度測定精密度及回收率(n=6)

方法回收率:分別配制質量濃度為 0.10，1.00，2.00 μg/mL 的血漿樣品，按2.3項下方法進行測定，將測定的維庫溴胺熒光強度代入標準曲線，求出測定藥物質量濃度，按測定量/添加量乘以100%計算方法回收率。結果見表2。

檢測限:本方法能夠測出的維庫溴胺最低血藥濃度為0.05 μg/mL，類似于文獻[2－3]報道的結果。

3 討論

本研究建立了檢測血漿維庫溴胺質量濃度的熒光分光光度法，專屬性強，分離完全，操作簡單，成本低廉。該法相對回收率大于96%，絕對回收率大于80%，日內、日間精密度 RSD均小于8%，符合生物等效性指導原則關于生物樣品分析方法的基本要求，可用于人體藥物代謝動力學和生物等效性試驗的血藥濃度檢測。

試驗中要注意溫度的影響。由于維庫溴胺在血漿中不太穩定，極易降解，所以血樣應在－20℃以下冰箱儲存，長期儲存應放置在－70℃冰箱。在提取中應選用低溫高速離心(10℃，10 000 r/min)，以減少藥物的分解，提高試驗的準確度。

所配制的熒光素貯備液于黑暗、4℃保存時相對較穩定，但含量也會逐漸下降，應在4 d內使用為宜。試驗發現，貯備液所配制的應用液穩定性很差，故熒光素應用液應當日配制，即配即用。

由于熒光分光光度法對試劑純度、實驗用水和試管等玻璃器皿潔凈度要求非常高，故所用玻璃器皿等均需經硝酸浸泡，且務必多次洗刷干凈。

本試驗結果表明，本法樣品預處理過程簡單，回收率高，線性范圍寬，測定方法精密度高，重現性好，結果準確，適于臨床和科研應用，可作為測定維庫溴胺血藥濃度的常規方法。

[1]LienCA.Rationaluseofmusculerelaxants[J].AnesthAnalg，1994，6:66－72.

[2]Kersten UW，Meijer DKF，Agoston S.Fluorimetric and chromatographic determination of pancuronium bromide and its metabolites in biological materials[J].Clini Chimi Acta，1973， 44(1):59－66.

[3]Rupp SM，Castagnoli KP，Fisher DM，et al.Pancuronium and vecuronium pharmacokinetics and pharmacodynamics in younger and elderly adults[J].Anesthesiology，1987，67(1):45－49.