偏正顆粒的提取工藝優選及其急性毒性試驗

王 華，王 莉，馬金秋

(山東省秦皇島市第一醫院，山東 秦皇島 066000)

偏正顆粒的提取工藝優選及其急性毒性試驗

王 華，王 莉，馬金秋

(山東省秦皇島市第一醫院，山東 秦皇島 066000)

目的 優選偏正顆粒的提取工藝并考察其醇沉工藝，觀察偏正顆粒的急性毒性反應。方法 以歐前胡素含量為指標，采用正交試驗法優選偏正顆粒的提取工藝;通過對小鼠灌胃給藥，觀察偏正顆粒對小鼠的毒性反應。結果 優化的提取工藝為加6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h，并選用50%的乙醇沉淀;將因偏正顆粒的毒性反應出現死亡的動物解剖，未見明顯病理改變。結論 優選的工藝合理、可行。偏正顆粒在規定劑量下使用安全。

偏正顆粒;正交試驗;歐前胡素;急性毒性試驗

偏正顆粒是醫院自制的中藥制劑，批準文號為秦藥劑字[2001]普－01－020號，處方系我院臨床應用多年的協定處方，由白芷、川芎、細辛、蒼耳子、元胡、罌粟殼、天麻、菊花等藥材組方，具有除濕散寒、行氣活血的作用，用于治療風濕或寒濕所致的偏頭痛及頭痛，效果比較理想。筆者對偏正顆粒的提取和醇沉工藝進行了考察，以方中君藥白芷有效成分歐前胡素含量為指標進行L9(34)試驗[1]，篩選了偏正顆粒的最佳提取純化工藝;又因方中制草烏為藥典中收錄的毒性藥材，故對其進行了急性毒性試驗。現報道如下。

1 儀器、試藥與動物

Agilent高效液相色譜儀;23200型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);124型電子天平(上海精密科學儀器有限公司)。歐前胡素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為826－9904);甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純;偏正顆粒(秦皇島市第一醫院制劑中心提供，規格為8 g/包)。昆明種小白鼠(河北省實驗動物中心提供，合格證號為DK0412－0115)，實驗室溫度為(22±2)℃，相對濕度60±2)%，試驗觀察期間飼以該中心提供的固體飼料，自由飲水。

2 方法與結果

2.1 水提取工藝優選

2.1.1 因素水平

為有效提取藥材，經過初步考察，選取了對提取物收率影響較大的浸泡時間(因素A)、加水量(因素B)、提取時間(因素C)、提取次數(因素D)作為考察因素，藥材適當粉碎，以歐前胡素含量為考察指標，按表1水平以L9(34)表進行試驗。

表1 水提取工藝正交試驗因素水平表

2.1.2 正交試驗

提取液制備按處方比例稱取所有藥材111 g，共9份，適當碎段，按正交試驗設計方案，加水煎煮提取，提取液濃縮至約80 mL，移至100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

歐前胡素含量測定:精密吸取上述提取液10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液;取歐前胡素對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含15 μg的溶液，即得對照品溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇－水(62∶38)為流動相，檢測波長為310 nm，理論板數按歐前胡素峰計算不低于1 000。吸取供試品溶液和對照品溶液各20 μL，分別用高效液相色譜儀，測定峰面積，按外標法計算歐前胡素含量。

正交試驗結果:見表2及見表3。可見，以歐前胡素含量為考察指標，因素影響大小依次為提取次數、加水量、提取時間、浸泡時間，最佳工藝為A2B2C2D1，即加入6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h。

表2 水提取工藝正交試驗結果

2.1.3 驗證試驗

按處方稱取藥材3份，分別按選定的最佳工藝進行提取，結果歐前胡素含量分別為 12.81，12.78，12.76 mg/g。可見，按照最佳水提取工藝進行提取，歐前胡素的含量最高。

表3 方差分析結果表

2.2 醇沉工藝考察

通過查閱資料并結合工作中的實際經驗，發現全方水提浸膏容易吸潮，且不容易制粒，必須加輔料以降低黏性和吸濕性，但會導致服用藥量較多，故應對水提液進行醇沉。按處方比例稱取所有藥材共412 g，酌情碎斷，按最佳水提工藝加水煎煮提取，提取液濃縮至相對密度1.04～1.05(70℃)，分成4等份，其中3份分別加95%乙醇至醇體積分數40%，50%，60%，充分攪拌，置4℃以下冰箱中24 h，過濾，濃縮至約450 mL，用水定容至500 mL量瓶中。按2.1.2項下歐前胡素測定含量。結果乙醇體積分數為0，40%，50%，60% 時歐前胡素含量分別為 9.62，9.60，9.58，8.26 mg/g。可見，醇沉對歐前胡素的含量有影響，但影響不是很大，當乙醇體積分數為50%時歐前胡素含量降低較少，且溶液較澄清。故選用50%的乙醇沉淀，即于水提取液中加入2倍量95%乙醇。

2.3 急性毒性試驗[2]

采用灌胃針給小鼠喂藥，給藥后立即計時，詳細觀察動物給藥后反應，記錄癥狀出現或死亡時間和出現反應的動物數量。

取小鼠5只。取偏正顆粒35 g，加水研磨至50 mL，配成70%的混懸液，按每10 g體重0.4 mL給小鼠灌胃，間隔2 h再給藥1次，共給藥2次。第2次給藥后約40 min，有2只小鼠死亡，尸檢僅見胃腸充盈，余未見異常。觀察7 d，未再有小鼠死亡。給藥量為56 g/kg，約為人臨床劑量的207倍。

取小鼠20只，雌雄各半，體重18～22 g。取70%的偏正顆粒混懸液45 mL，加水稀釋至53 mL，配成59%混懸液，按每10 g體重0.4 mL給小鼠灌胃，間隔2 h再給藥1次，共給藥2次，觀察7 d。結果除見小鼠活動減少外，小鼠飲食、大小便、行為活動等未見異常，未見死亡發生。給藥前雄性小鼠體重(20.9±1.3)g，7 d后(28.1±1.7)g;給藥前雌性小鼠體重(19.7±1.2)g，7 d 后體重(26.9 ±2.0)g。給藥量為 47 g/kg，約為人臨床劑量的 174 倍。

3 討論

正交試驗結果表明，偏正顆粒的最佳提取工藝為白芷、川芎、細辛等8味藥材加6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h。并對其水溶液選用50%的乙醇進行沉淀后過濾。驗證試驗也表明，該工藝條件合理、有效成分含量較高，穩定可行。

偏正顆粒的臨床給藥劑量為2次/d、每次8 g，即0.32 g/kg體重。小鼠急性毒性試驗表明，小鼠的最大耐受量為47 g/kg，約為人臨床劑量的174倍。提示偏正顆粒在規定劑量下服用安全。

[1]楊宏建，肖美鳳，袁 麗，等.正交實驗優選三棵針中小檗堿的提取工藝[J].中國藥師，2005，8(12):673－675.

[2]中華人民共和國衛生部藥政管理局.中藥新藥研究指南[M].北京:人民衛生出版社，1993:203.

Study on Extraction Technology of Pianzheng Granules and Acute Toxicity Test

Wang Hua， Wang Li， Ma Jinqiu
(No.1 Hospital of Qinhuangdao City， Qinhuangdao， Hebei， China 066000)

Objective To optimize the extraction process and condition of Pianzheng Granules and to investigate the alcohol precipitation echnology and the acute toxic reactions of Pianzheng Granules.Methods The extracting technology for Pianzheng Granules was optimized by orthogonal design with the imperatorin content as index.Mice were given the drug by gavage and their acute toxic reactions were observed.Results The optimum extraction conditions were adding 6 times amount of water，soaking for 1 h and decocting twice，1 h for each ime and selecting 50% ethanol for precipitation.The obvious pathologic changes were not observed in the dead animal.Conclusion The optimized extracting technology of Pianzheng Granules is rational and feasible.Pianzheng Granules is safe and reliable in regulated doses.

Pianzheng Granules;orthogonal design;imperatorin;acute toxicity

TQ461;R285.5

A

1006－4931(2011)04－0045－02

2010－03－11;

2010－08－13)

王華，女，主管藥師，主要從事醫院藥學工作，(電話)0335－5908035(電子信箱)yyyf6285@sina.com。