透皮促進劑對萘普生的促透效果研究

姜建華，周曉芳，葉金翠

(1.浙江省杭州下城區中西醫結合醫院，浙江 杭州 310004; 2.浙江省腫瘤醫院，浙江 杭州 310022;3.浙江省醫學科學院藥物研究所，浙江 杭州 310013)

萘普生為非甾體抗炎鎮痛藥(NSAIDs)，具有抗炎、鎮痛、解熱功效，臨床常用于治療各類風濕性關節炎、骨關節炎及強直性脊椎炎，可緩解各種輕度至中度的疼痛。NSAIDs對整個胃腸道均有損傷，患者長期口服NSAIDs，胃和十二指腸潰瘍的發生率為10% ～20%[1]，是未使用NSAIDs的健康人群的5～15倍[2－3]，嚴重胃腸道并發癥的發生危險是非NSAIDs使用者的4倍[4]。因此，需長期服藥的患者或胃潰瘍患者往往不能耐受NSAIDs。經皮給藥作為安全、有效的給藥途徑，非常適合NSAIDs。萘普生經皮給藥，不僅可避免口服給藥的胃腸道刺激，而且可使藥物在皮下、關節等局部保持高濃度，以發揮更好的治療作用，避免全身作用產生的副反應。萘普生具有低相對分子質量(230.26)、低熔點(153～154℃)、油水分配系數與溶解性合適以及生物半衰期較短等特性，使得萘普生研制成透皮吸收制劑具可行性。本研究考察了透皮促進劑月桂氮酮(azone)、油酸(oil acid，OA)、月桂醇(dodecyl alcohol，DA)與 1，2－ 丙二醇(1，2－PG)單用或混合使用對萘普生的促透效果，為萘普生透皮給藥系統的開發提供參考。

1 儀器與試藥

LC－10 A型高效液相色譜儀(日本島津);SPD－10 A型紫外檢測器;C－R 6 A型數據處理器(日本島津);Valia－Chien雙室滲透池(浙江大學玻璃儀器廠);電子分析天平(德國賽多利斯)。萘普生(中國藥品生物制品檢定所，批號為100198－0002);月桂氮酮(廣州助劑化工廠)、油酸(沈陽市都西試劑廠)、月桂醇(上海化學試劑供應站)、丙二醇(如皋市金陵試劑廠)均為分析純。雄性SD大鼠(浙江省醫學科學院)。

2 方法與結果

2.1 皮膚來源與處理

取體重約200 g的雄性SD大鼠，用刀片刮去大鼠腹部毛，處死，剝離腹部皮膚，去除皮下脂肪及黏液，用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干后置冰箱儲存，備用。

2.2 皮膚滲透試驗

將處理好的大鼠腹部皮膚固定于Valia－chien雙室滲透池上，角質層面向供應室，真皮層面向接受室。滲透池固定在磁力攪拌器上，用星狀磁粒以500 r/min的速度攪拌，并用水浴夾套使溫度恒定為(37±0.5)℃。供應室中加入4 mL不同促進劑的萘普生供給液，塞子蓋緊并以膜封口，接受室內加入10% 聚乙二醇400(PEG 400)生理鹽水 4 mL。分別于 4，6，8，10，24 h 時取樣 500 μL，同時立即補加等溫等體積的接受液。以高效液相色譜(HPLC)法測定各時間點接受室中藥物濃度，計算單位面積內藥物的累積滲透量 Q(μg/cm2)。計算公式如下:

式中 Vn和 Cn分別為第 n次取樣時接受液的體積和濃度;Vi和 Ci分別為第 i次取樣時接收液的體積和濃度;Vn=Vi=4 mL;∑CiVi為取樣帶走的藥物的累積和。以 Q與時間(t)作圖得藥物累積曲線，對曲線的直線部分進行線性回歸，所得的直線斜率即為透皮擴散速率J(μg·cm2/h)。

2.3 萘普生質量濃度測定(高效液相色譜法)

2.3.1 檢測波長選擇

取萘普生適量，溶于流動相中，于200～400 nm波長范圍內進行紫外掃描。根據吸收圖譜，萘普生在流動相中的最大吸收波長為231 nm，因此選定此波長為檢測波長。

2.3.2 色譜條件

色譜柱:ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(70 ∶30)，水相中加入冰醋酸調 pH 至 2.0;流速:1.0 mL/min;檢測波長:231 nm;柱溫:37 ℃;進樣量:20 μL。

2.3.3 線性關系考察

精密稱取萘普生適量，配成貯備液，再用甲醇稀釋配制成質量濃度分別為 1，5，15，20，25，30，35，40，50 μg/mL 的溶液，搖勻。精密量取20 μL注入液相色譜儀，照上述色譜條件測定，記錄峰面積，得回歸方程 A=16 403 C－469.4，R2=0.999 3(n=9)。結果表明，萘普生溶液的質量濃度在1.0～50 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.4 回收率試驗

精密稱取萘普生適量，配制高、中、低質量濃度的樣品溶液各5批，依法測定，將結果代入標準曲線計算，與實際濃度比較，計算方法回收率。結果平均回收率為100.85%。

2.3.5 精密度試驗

按照回收率試驗項下操作方法，配制高、中、低3種質量濃度的樣品溶液，同日內測定5批，隔日測定1批并連續5批。結果日內 RSD 為 0.53% ～0.85%，日間 RSD 為 0.67% ～2.10%。

2.4 單一促進劑促透試驗

結果見表1。可知，azone和OA對萘普生有顯著的經皮促透效果，而DA和1，2－PG對其無明顯促透作用，尤其是1，2－PG單獨使用時基本無促透作用。圖1為單一使用促進劑后的藥物經皮累積滲透量－時間曲線，結果表明，azone和OA對萘普生的促透作用明顯與劑量相關，在5%濃度以下藥物透皮量與促進劑濃度成正比，但5%濃度以上隨促進劑濃度的增加促透效果反而下降，其中5%azone和5%OA的促透作用最顯著。

表1 促進劑作用下萘普生的經皮滲透速率(J)及其促透倍數(ER)

2.5 合用促進劑促透試驗

研究了azone或OA與1，2－PG聯合應用對萘普生的經皮滲透促透效果，固定5%azone和5%OA濃度不變，分別與不同濃度的1，2－PG聯合使用進行皮膚滲透試驗。結果見表2和圖2。可見脂溶性促進劑azone和OA與水溶性促進劑聯合使用，比單獨使用的促透效果更顯著，促透倍數較在水中高達10倍以上。5%azone+20%1，2－PG可達最大促透效果。

3 討論

萘普生收載于2005年版《中國藥典(二部)》，其原料含量測定采用傳統容量法，取樣量大，滴定液配制較煩瑣。萘普生針劑含量測定采用紫外分光光度法。本研究采用靈敏的高效液相色譜法測定萘普生的質量濃度，準確性好、精密度高，出峰快、峰形好，分析時間短，且皮膚蛋白浸出液等雜質峰與主峰分離完全，專屬性好，回收率與精密度均符合要求，適用于體外透皮試驗的檢測。由于萘普生為弱酸性藥物，在溶液中存在解離平衡，色譜行為受pH影響較大，因此試驗時需在水相中加入冰醋酸調節流動相的 pH，以改善其峰形與維持穩定性。

圖1 在不同促進劑其及不同濃度作用下藥物經皮滲透累積量－時間曲線

表2 促進劑聯合使用的經皮滲透速率(J)及其促透倍數(ER)

圖2 azone或OA與1，2－PG聯合使用的藥物滲透累積量－時間曲線

提高藥物的透皮速率是開發經皮給藥制劑的關鍵，應用透皮促進劑是增加藥物透皮吸收的首選方法[5]。其作用機制多是通過改變皮膚角質層扁平細胞的有序疊集結構(使有序排列變為無序排列)，增大角質層細胞間隙的空隙，使藥物迅速進入皮下而被吸收[6]。本研究結果表明，azone和OA對萘普生的促透效果顯著，且呈劑量依賴關系，5%濃度可達最佳促透作用;聯合1，2－PG使用，可達單一促進劑無法比擬的促透效果，促透倍數達10倍以上，其中5%azone+20%1，2－PG達最大促透倍數。azone發揮促透作用與其同角質層中脂質的相互作用有關。azone的化學結構中有一較大的極性基團和脂質烷基鏈，可進入到脂質雙分子層中破壞它的有序結構。采用電子衍射方法對從人角質層剝離的脂質進行的研究也表明，azone可作為一個獨立相存在于角質層的脂質中[7]。1，2－PG單獨作用無明顯促透效果(促透倍數ER為1.03)，但與azone或OA聯用時促透作用顯著。一般認為，這主要是因為1，2－PG能作為良好的溶劑分布在類脂極性基團之間的親水性區域，使azone更容易分配進入細胞間區域[8]。同時，1，2－PG的水溶性有利于藥物在皮膚角質層和活性表皮間轉運。5%的OA和20%的1，2－PG混合使用也可取得顯著的促透效果(促滲倍數ER為11.78)。OA屬于脂肪酸類化合物，與皮膚中脂肪酸有相似的結構，分子中存在的不飽和雙鍵使其具有不對稱的空間結構。當OA分子插入角質層內的脂質雙分子層疏水結構時，由于其不飽和疏水的順式結構，使雙分子層扭轉，形成微細的、易于滲透的流動性通道，從而有效地影響了角質層脂質結構的有序排列[9]。本試驗所得結果初步驗證了萘普生透皮給藥的可行性，為萘普生經皮給藥制劑的研發提供了參考。

[1]Wolfe F， Zhao S，Lane N.Preference for nonsteroidal anti－inflammatory drugs over acetaminophen by rheumatic disease patients:a survey of 1 799 patients withosteoarthritis，rheumatoidarthritis， andfibromyalgia[J].ArthritisRheum，2000，43(2):378－385.

[2]Pincus T，Swearingen C， Cummins P， et al.Preference for nonsteroidal anti－inflammatory drugs versus acetaminophen and concomitant use of both types of drugs in patients with osteoarthritis[J].J Rheumatol，2000，27(4):1 020－1 027.

[3]Gabriel SE， Jaakkmainen L， Bombardier C.Risk for serious gastrointestinal complications related to use of nonsteroidal anti－inflammatory drugs.a meta－analysis[J].Ann Intern Med，1991，115(10):787－796.

[4]Seibrt K，Zhang Y，Leahy K，et al.Pharmacological and biochemical demonstration of the role of cyclooxygenase 2 in inflammation and pain[J].Proc Natl Acad Sci USA，1999，91(25):12 013－12 017.

[5]方曉陽，葉 青.中藥透皮吸收促進劑的研究與發展[J].中草藥，2003，34(2):188－191.

[6]方世平，孫曼春，王智勇，等.月桂氮酮和薄荷腦對姜赤凝膠體外透皮吸收的影響[J].中國醫院藥學雜志，2006，26(3):280－283.

[7]Pilgram GS，Van der Meulen J，Gooris GS，et al.The influence of two azones and sebaceous lipids on the lateral organization of lipids isolated from human stratum corneum[J].Biochim Biophys Acta－Biomembr，2001，1 511(2):244－254.

[8]楊 鵬，丁雪鷹，高 靜，等.透皮促滲劑對鹽酸氟西汀經皮滲透性的影響[J].第二軍醫大學學報，2007，28(11):1 252－1 254.

[9]韓 旻，鐘韻偉，李新平，等.不同促滲劑對氫溴酸高烏甲素貼片體外經皮滲透的影響[J].中國中藥雜志，2008，33(11):1 252－1 255.