九味腰痛膠囊長期毒性試驗研究

王桂敏，成 源

(1.陜西省西安市未央區中醫醫院，陜西 西安 710016; 2.北京岐黃制藥有限公司，北京 101200)

九味腰痛膠囊是一種新研制的中藥，具有祛風除濕、活血通絡作用，臨床上用于治療腰椎間盤突出癥[1]。因治療期間患者服藥時間較長，為了給臨床安全應用提供充分依據，筆者連續對大鼠口服給藥90 d，觀察其長期毒性?，F報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與藥品

Wistar大鼠(西安醫科大學實驗動物中心提供，合格證號為陜醫實動準第03號)，鼠齡6周，體重(230±15)g，雌雄各半，飼養1周后使用。試驗全過程在室溫16～18℃、相對濕度50% ～70%的層流飼養室中完成。九味腰痛膠囊(含生藥15.6 mg/g)由西安市未央區中醫醫院自制，批號為060601。

1.2 給藥方法

取大鼠80只，雌雄各半，分為4組，即低劑量組、中劑量組、大劑量組，用藥劑量分別為125，250，500 mg/kg(分別相當于臨床常用量的5，10，20倍)，按每只動物應服用的劑量，將藥物分別加入飼料中。對照組給予無藥物飼料。共給藥90 d。

1.3 觀察方法[2－4]

每日觀察各組動物的外觀體征、行為活動、尿與糞便性狀，記錄體重、進食量以及血液學指標、血液生化、尿沉淀鏡檢、尿常規分析和肝功能。末次用藥后，各組處死15只動物，系統尸解，觀察各臟器情況;取心、肝、脾、肺、腎等臟器，稱濕重，計算臟器系數;同時進行常規蘇木精－伊紅染色(HE)法染色，光鏡下行病理組織學檢查。各組留動物5只，停藥21 d，恢復期指標檢測均同給藥期。

1.4 數據處理

2 結果

2.1 一般情況變化

同對照組動物比較，各劑量給藥組試驗期間均無異常表現，試驗末體重也無明顯異常改變(P＞0.05)，停藥后各組動物均未出現異?，F象。結果見表1。

表1 大鼠口服九味腰痛膠囊給藥期和恢復期的體重變化(±s)

表1 大鼠口服九味腰痛膠囊給藥期和恢復期的體重變化(±s)

組別 劑量(mg/kg)給藥期體重(g) 恢復期體重(g)對照組大劑量組中劑量組低劑量組0 500 250 125 7 d 2.8 ± 0.7 2.8 ± 1.0 2.7 ± 1.2 2.9 ± 0.3 35 d 10.1 ± 3.3 10.9 ± 3.8 10.7 ± 3.5 10.6 ± 4.0 63 d 17.8 ± 7.3 17.7 ± 5.9 18.0 ± 5.6 17.9 ± 6.4 91 d 24.9 ± 10.7 24.5 ± 10.1 24.7 ± 9.9 24.8 ± 11.0 112 d 30.4 ± 12.6 30.8 ± 12.5 29.9 ± 12.9 30.3 ± 12.7

2.2 血液學和血液生化學變化

各組動物在給藥后及停藥后血液學指標和血液生化學均無異常變化(P＞0.05)，各項檢查數值均在正常范圍內，說明九味腰痛膠囊對血液學和血液生化學一般項目無影響。結果見表2及表3。

2.3 肝腎功能和尿液變化

測定大鼠的血中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬酸氨基轉移酶(AST)和血清尿素氮(BUN)含量，并進行大鼠的尿常規檢查。結果各劑量組動物ALT值均在正常范圍內，給藥后及停藥后BUN和尿液均無異常變化(P＞0.05)，說明九味腰痛膠囊對動物肝功能和腎功能無影響。結果見表4。

表2 大鼠口服九味腰痛膠囊給藥期和恢復期的血常規檢查(±s)

表2 大鼠口服九味腰痛膠囊給藥期和恢復期的血常規檢查(±s)

紅細胞計數(×1012/L)組別 血紅蛋白(g/L)白細胞計數(×109/L)中性細胞 (%)淋巴細胞(%)血小板計數(×109/L)對照組大劑量組中劑量組低劑量組給藥期6.46 ± 0.66 6.41 ± 0.66 6.48 ± 0.53 6.43 ± 0.30恢復期6.47 ± 0.37 6.44 ± 0.64 6.43 ± 0.68 6.50 ± 0.73給藥期102.4 ± 8.2 104.4 ± 6.2 103.4 ± 7.3 104.4 ± 7.2恢復期101.6 ± 6.8 107.2 ± 7.5 103.0 ± 10.2 104.2 ± 7.3給藥期8.49 ± 4.98 8.47 ± 2.94 8.38 ± 1.88 8.39 ± 3.53恢復期8.13 ± 2.56 8.38 ± 2.51 8.27 ± 2.92 8.18 ± 2.88給藥期16.0 ± 2.3 16.0 ± 2.2 16.6 ± 1.3 16.3 ± 1.7恢復期16.5 ± 2.5 16.5 ± 2.6 16.4 ± 2.6 16.5 ± 3.2給藥期84.0 ± 2.3 84.0 ± 2.2 83.4 ± 1.3 83.7 ± 1.7恢復期83.5 ± 2.5 83.5 ± 2.6 83.6 ± 2.6 83.5 ± 3.2給藥期157±32 158±22 158±27 159±24恢復期160±30 158±30 157±26 158±25

表3 大鼠口服九味腰痛膠囊給藥期和恢復期的血液生化檢查(±s)

表3 大鼠口服九味腰痛膠囊給藥期和恢復期的血液生化檢查(±s)

堿性磷酸酶(U) 總膽紅素(μmol/L) 總蛋白 (g/L) 白蛋白(g/L) 血清肌酐(μmol/L) 血清總膽固醇 (mmol/L) 血清葡萄糖 (mmol/L)組別對照組大劑量組中劑量組低劑量組給藥期163.3 ±39.4 165.1 ±57.3 164.2 ±71.1 170.5 ±45.6恢復期164.4 ± 41.2 160.8 ± 50.4 162.3 ± 48.1 160.5 ± 45.8給藥期5.27 ± 2.95 5.19 ± 2.30 5.39 ± 1.20 5.14 ± 5.20恢復期5.23 ±2.55 5.20 ±2.38 5.67 ±2.43 5.51 ±2.31給藥期65.73 ±4.49 65.58 ±3.39 65.25 ±3.24 66.48 ±3.01恢復期65.55 ±3.51 65.58 ±3.46 65.35 ±3.33 65.48 ±3.19給藥期32.31 ±2.77 33.50 ±1.28 33.15 ±1.71 32.53 ±2.18恢復期32.35 ±2.64 33.40 ±2.28 33.15 ±2.04 33.42 ±2.23給藥期44.0 ±6.3 44.3 ±6.7 44.8 ±8.2 45.5 ±8.1恢復期45.0 ±6.8 44.8 ±6.7 44.5 ±7.1 45.5 ±6.2給藥期1.48 ±0.27 1.41 ±0.20 1.48 ±0.38 1.46 ±0.22恢復期1.43 ±0.30 1.48 ±0.28 1.48 ±0.34 1.49 ±0.24給藥期9.41 ±0.45 9.68 ±0.84 9.46 ±2.68 9.46 ±1.17恢復期9.45 ± 0.54 9.38 ± 0.66 9.36 ± 1.32 9.36 ± 1.16

表4 大鼠口服九味腰痛膠囊給藥期和恢復期的肝功能和尿常規檢查(±s)

表4 大鼠口服九味腰痛膠囊給藥期和恢復期的肝功能和尿常規檢查(±s)

組別ALT(U/L) AST(U/L) 尿pH 尿蛋白質 尿葡萄糖 BUN(mmol/L)對照組大劑量組中劑量組低劑量組給藥期57.73 ± 11.28 59.38 ± 10.28 58.31 ± 10.04 58.10 ± 11.57恢復期57.88 ±10.60 58.99 ±10.33 57.84 ±10.65 57.90 ±10.32給藥期132.1 ± 31.4 110.9 ±15.2 103.4 ±27.3 131.6 ±36.1恢復期108.8 ± 18.4 110.4 ± 16.2 108.6 ± 17.6 110.5 ± 19.7給藥期7.35 ± 0.26 7.30 ± 0.26 7.30 ± 0.25 7.35 ± 0.24恢復期7.25 ± 0.26 7.25 ± 0.26 7.30 ± 0.25 7.35 ± 0.25給藥期10(－)10(－)10(－)10(－)恢復期10(－)10(－)10(－)10(－)給藥期10(－)10(－)10(－)10(－)恢復期10(－)10(－)10(－)10(－)給藥期5.88 ± 0.62 5.58 ± 0.70 6.03 ± 0.61 5.95 ± 0.62恢復期5.88 ± 0.60 5.68 ± 0.64 5.64 ± 0.62 5.90 ± 0.62

2.4 解剖和病理組織學檢查

光鏡下檢查，各組動物未見明顯病理改變，組間重要臟器系數無明顯差異。

3 討論

長期毒性研究不僅可以觀察連續反復給藥時，實驗動物出現的毒性反應、劑量與毒性效應的關系、主要毒性靶器官、毒性反應的性質和程度、毒性反應是否可逆等，還可觀察動物的耐受量、無毒性反應劑量、毒性反應劑量及安全范圍，并可了解毒性產生時間、達峰時間、持續時間及可能反復產生毒性反應的時間，有無遲發性毒性反應、有無蓄積毒性或耐受性等，因此在臨床前安全性評價中具有重要地位，對于新藥研究和臨床用藥成功與否起著舉足輕重的作用[5－6]。

本試驗共設3個劑量組，通過大鼠口服九味腰痛膠囊90 d和停藥21 d觀察，各組動物的一般狀況(食量、體重)良好，體重增長正常;各劑量組均未出現毒性反應。從大鼠血液學和血液生化學指標變化，肝功能、腎功能和尿液指標變化觀察，給藥組與空白對照組之間無顯著性差異;解剖和病理組織學檢查也未發現病理改變，表明給藥期無明顯毒性反應，恢復期未見延遲性毒性。因此可認為該藥臨床上應用具有較高的安全性。

[1]王桂敏，成 源.九味腰痛膠囊治療腰椎間盤突出癥47例[J].陜西中醫，2002，23(3):231－232.

[2]袁伯俊，廖明陽，李 波.藥物毒理學實驗方法與技術[M].北京:化學工業出版社，2007:154.

[3]國家食品藥品監督管理局.中藥天然藥物長期毒性研究技術指導原則[M].北京:中國醫藥科技出版社，2005:73.

[4]呂秋軍.新藥藥理學研究方法[M].北京:化學工業出版社，2007:382－387.

[5]江 濤，周永德，葛 勤.黃馬酒長期毒性試驗研究[J].中國藥業，2009，18(13):9－10.

[6]王書杰，王麗萍，劉晉華，等.風痛寧丸對大鼠的長期毒性試驗[J].中國藥師，2010，13(13):63－64.